魏穎軒，包冉，王偉，張躍翔，崔園園，張冬梅

（1 包頭市食品藥品檢驗檢測中心，內(nèi)蒙古 包頭；2 內(nèi)蒙古盛唐國際蒙醫(yī)藥研究院，內(nèi)蒙古 呼和浩特）

0 引言

朝倫·細(xì)莫-21 散由沙棘、梔子[1]、人工牛黃等21 味藥組成。臨床功效為袪“寶日”病。用于“寶日”病，在發(fā)病的初期及中期患者往往表現(xiàn)為噯氣、胸背部有疼痛感、氣滯血瘀等。梔子的主要功效為清熱去火、利濕除煩。在標(biāo)準(zhǔn)制定過程中,以梔子苷作為測定指標(biāo)[2],參照《中國藥典》2015 年版一部[3]“梔子”項下含量測定方法，使用的測定方法為高效液相色譜法，對該藥中的梔子苷含量進(jìn)行有效的測定。在實驗的不斷研究中確定了理想的色譜條件，并進(jìn)行考察及對照實驗最終得出，該方法具有較強的專屬性和重現(xiàn)性，且操作起來十分方便，藥方中的其他成分在測定的過程中并沒有對梔子苷造成干擾。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

U3000 型高效 液相色譜儀；SCL-10AvP 型控制器,SPD-10AvP 型檢測器，Class-vP 色譜工作站，島津UV-1700 型紫外-可見分光光度儀；隔膜真空泵（鞏義市英峪儀器廠）；KQ-250DB 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Heal Force NW15UV 型超純水系統(tǒng)；ADVENTURERTM 型電子天平（萬分之 一）；Ohaus Discovery 型電子天平（十萬分之一）；FW400A 型多功能粉碎機（材茂科技有限公司）。

1.2 試劑與試藥

梔子苷對照品（批號：110749-201617），由中國食品藥品檢定研究院提供；供試品三批（批號：20190928，20190938，20190948），由國際蒙醫(yī)醫(yī)院提供，自制樣品一批（20190917）；乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Alltima C18柱(250mm×4.6 mm,5μm)；柱溫：33 ℃；檢測波長：238nm；流速：1.0ml/min；進(jìn)樣量：10μl；流動相：乙腈-水 (15 ∶85)；理論塔板數(shù)不低于1500。

2.2 溶液的制備

對照品溶液：在精密的條件下稱取出梔子苷對照品，稱取量為14.68mg，將其放置在100ml 的量瓶中，并加入甲醇進(jìn)行溶解處理，稀釋到一定刻度時將溶液搖勻，吸出5ml后將其放置在10ml 的量瓶中，加入甲醇繼續(xù)稀釋處理，將其稀釋到刻度，配置成含梔子苷質(zhì)量濃度為73.4μg/ml 的對照品溶液。

供試品溶液：取大約0.5g 本品進(jìn)行精密稱定后將其放置到錐形瓶中，加入50ml 甲醇，稱定其重量后使用超聲進(jìn)行0.5h 的處理，將功率設(shè)置為250W，將頻率設(shè)置為40kHz，冷卻后繼續(xù)稱重，減失的重量使用甲醇進(jìn)行補足處理，之后將溶液搖勻后進(jìn)行過濾即得供試品溶液。

陰性對照品溶液：按照一定的處方比例稱取出其余藥材，按照一定的生產(chǎn)工藝將缺梔子的陰性樣品進(jìn)行制備，陰性對照品溶液制備方法同于供試品溶液[4,5]。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗：分別精密吸取對照品溶液、陰性對照溶液、供試品溶液各10μl,在擬定的色譜條件下注入液相色譜儀，測得的結(jié)果顯示陰性對照色譜中，與梔子苷對照品、供試品色譜相應(yīng)的保留時間并沒有色譜峰出現(xiàn)，這就說明其他的組分并沒有對梔子苷的測定造成干擾。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取對照品溶液1μl、3μl、5μl、7μl、10μl、12μl、15μl、20μl 分別進(jìn)樣,色譜條件按照以上標(biāo)準(zhǔn)，對梔子苷的進(jìn)樣量以峰面積進(jìn)行回歸分析，結(jié)果測得梔子苷呈現(xiàn)良好線性關(guān)系的范圍為0.0734-1.4680μg。回歸方程：Y=18.423X+0.0782,R2=1。

穩(wěn)定性試驗：取同一份供試品（批號：20190914）溶液，分別于0h、2h、4h、8h、12h、24h 進(jìn)樣測定。梔子苷在24h 內(nèi)的峰面積積分值基本穩(wěn)定不變，能夠滿足測定所需要的時間[6]。

精密度試驗：取同一份供試品（批號：20190914）0.5058g，按擬定方法操作，連續(xù)進(jìn)樣6 次對梔子苷的峰面積積分值進(jìn)行測定，RSD 為0.66%，這表明儀器具有良好的精密度。

重復(fù)性試驗：取同一批號供試品（批號：20190914）6份，各約0.5g，精密稱定，分別按擬定方法操作，測定每份供試品含量。結(jié)果表明，供試品在相同的細(xì)度、提取溶劑和色譜條件下，測定結(jié)果穩(wěn)定。

加樣回收率試驗：取供試品（批號：20190914）9 份,均約0.25g,精密地稱取，并在1、2、3 號中加入配置的梔子苷對照品溶液，加入量均為5ml，4、5、6 號則分別加入上述的對照品溶液，加入量均為10ml,7、8、9 號也加入上述對照品溶液，加入量均為15ml,分別按擬定方法操作,測定每份供試品含量,計算回收率,平均加樣回收率為105.17%，RSD 為 1.89%。

耐用性試驗：換不同廠家、不同型號的色譜柱，取供試品（批號：20190914）約0.5g，按擬定方法操作并測定含量，結(jié)果見表1。

表1 不同色譜柱的耐用性試驗

說明本方法，在使用不同型號或廠家的色譜柱時，對測定結(jié)果影響較小，具有較好的耐用性。

2.5 樣品含量測定

取3 批樣品（批號：20190901,20190902,20190903）及自制樣品（批號：20190914）約0.5g，各2 份，精密稱定，按擬定方法處理并測定，含量測定結(jié)果見表2。

表2 樣品中梔子苷的含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

取梔子苷對照品溶液，使用紫外可見分光光度儀，選擇好波長，以200-700nm 范圍做光譜掃描，其中出現(xiàn)最大吸收的波長為238nm 處，同時在該處的峰形及峰高是最合適的，因此將238nm 作為最佳的檢測波長[7，8]。

3.2 流動相的選擇

參照《中國藥典》2015 年版一部[3]梔子項下，以乙腈-水（15 ∶85）作為流動相進(jìn)行測定，測定的結(jié)果提示梔子苷峰具有較好的分離效果，陰性對照品無干擾，并具有較適合的保留時間。

3.3 提取時間的考察

參考《中國藥典》2015 年版一部[3]“梔子”項下，以甲醇作為提取溶劑進(jìn)行超聲處理（功率250W，頻率40kHz），試驗中考察了超聲20min、30min、40min 等不同提取時間對提取效率的影響，通過考察得出，超聲處理30min 時，在供試品中提取梔子苷的含量最高，故將提取時間定為30min。

3.4 梔子藥材的轉(zhuǎn)移率

取梔子藥材粉末約0.05g，精密稱定，按《中國藥典》2015 年一部[3]“梔子”項下的方法處理并測定，梔子藥材中梔子苷的含量測定結(jié)果見表3。

表3 梔子藥材中梔子苷的含量測定結(jié)果

從表2 中數(shù)據(jù)可見,自制樣品（20190914）中梔子苷的含量為1.7270mg/g,從表3 數(shù)據(jù)可見,自制樣品所用梔子藥材的含量為30.4108mg/g,根據(jù)本品處方量折算,理論上成品每1g 含梔子苷應(yīng)為1.63mg,因此轉(zhuǎn)移率為1.73（mg/g）/1.63（mg/g）×100%=106.13%。