牛建均 劉春艷 耿瑞 晏朝操 曾凡勇 張麗艷 王煥珍 馬四補(bǔ)

摘 要：油菜花粉富含豐富的營養(yǎng)成分和天然活性物質(zhì)，具有極高的開發(fā)利用價值，已被廣泛運用于食品和藥品中，因此對油菜花粉進(jìn)行質(zhì)量安全控制是急需解決的問題。本文通過對國內(nèi)外文獻(xiàn)進(jìn)行整理研究，從質(zhì)量控制方面對新資源食品油菜花粉的研究進(jìn)展進(jìn)行概述，為油菜花粉產(chǎn)品的開發(fā)利用提供參考。

關(guān)鍵詞：油菜花粉;質(zhì)量控制;概述

油菜花粉為蜜蜂科昆蟲中華蜜蜂（Apis cerana Fabricius）等工蜂所采集的十字花科植物油菜（Brassica Campestis Linn）的干燥花粉。油菜分布廣，最早栽培于印度和中國，種植地域廣闊，現(xiàn)如今廣泛分布于我國各地。油菜花粉含黃酮、蛋白質(zhì)、維生素、多糖等成分。中醫(yī)認(rèn)為油菜花粉具有益腎固本的功效，可用于治療腎虛，慢性前列腺炎等疾病，現(xiàn)代藥理證明其具有增強(qiáng)免疫力、抗氧化、抗腫瘤等作用[1]。本文對現(xiàn)有油菜花粉的質(zhì)量控制方法、化學(xué)成分、藥理作用及指紋圖譜研究加以總結(jié)概括，以期為油菜花粉的開發(fā)利用提供參考。

1 檢查項

1.1 性狀

依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)《蜂花粉》（GB/T 30359—2013）發(fā)現(xiàn)，油菜花粉為黃色至棕黃色，不規(guī)則的扁圓形團(tuán)粒（顆粒），直徑約2～4 mm，無肉眼可見砂粒、細(xì)土，無明顯外來雜質(zhì)，無蟲蛀和霉變，具有特有的清香氣和滋味，無異味。油菜花粉在顯微鏡下花粉粒呈球形或近球形，極面觀為裂圓形，直徑30～35 μm，具3條萌發(fā)溝，無內(nèi)孔，外壁厚度約1.5 μm，外層較厚，基柱末端稍膨大，造成球面輪廓呈波浪形，表面具網(wǎng)狀紋飾，網(wǎng)眼細(xì)小，不規(guī)則，網(wǎng)脊和溝膜上呈模糊的顆粒狀。

1.2 水分

目前，藥材水分的定量分析已成為一項重要指標(biāo)應(yīng)用于多種物質(zhì)的理化分析。2017版《浙江省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》里規(guī)定油菜花粉水分不得超過15.0%;2006版福建省中藥材標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定油菜花粉水分不得超過8.0%;2019年版《吉林省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定油菜花粉水分不得超過13.0%。油菜花粉中的含水量測定對其在產(chǎn)品加工和制劑生產(chǎn)中有重要的作用，陳露[2]參考《食品中水分的測定》（GB/T 5009.3—2010）中干燥法對油菜花粉、荷花花粉和山茶花花粉進(jìn)行水分檢查，發(fā)現(xiàn)3種蜂花粉含水量分別為4.80%、5.99%、5.42%，不同實驗對象數(shù)據(jù)結(jié)果較統(tǒng)一，可作為油菜花粉的質(zhì)量控制指標(biāo)之一。有研究[3]通過比較減壓干燥法、甲苯法、烘干法測定花粉中的水分，發(fā)現(xiàn)烘干法難以達(dá)到恒重，減壓干燥法水分難以完全揮發(fā)，甲苯法消耗樣品較多。

1.3 灰分

灰分是指物質(zhì)內(nèi)的含碳有機(jī)物經(jīng)高溫煅燒后揮發(fā)殆盡，而氧化物、無機(jī)鹽等無機(jī)物則殘留下來。2017版《浙江省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定，油菜花粉灰分不得超過5.0%，2006版《福建省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中未規(guī)定油菜花粉灰分限度。相關(guān)文獻(xiàn)[4-5]均參照《中國藥典》對中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中的灰分進(jìn)行測定。陳露[2]依據(jù)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中灰分的測定》（GB/T 5009.4—2016）方法測定油菜花粉灰分發(fā)現(xiàn)，其灰分含量僅為3.02%，該方法也可作為測定油菜花粉灰分標(biāo)準(zhǔn)之一。

1.4 浸出物

浸出物是指被測物質(zhì)中能溶于水或其他溶液的非蛋白質(zhì)含氮物和不含氮有機(jī)物。浸出物本質(zhì)上來說就是物質(zhì)加入液體溶液中，從而進(jìn)行提取分離組分的過程。浙江省中藥材標(biāo)準(zhǔn)和福建省中藥材標(biāo)準(zhǔn)中均未對油菜花粉的浸出物進(jìn)行測定。相關(guān)研究[4-6]中均依據(jù)《中國藥典》對中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中的浸出物進(jìn)行測定。采用合適的測定方法能夠準(zhǔn)確得到油菜花粉浸出物含量，為油菜花粉質(zhì)量控制提供參考。

1.5 二氧化硫

隨著現(xiàn)代工業(yè)的飛速發(fā)展，SO2大量排放，SO2氣體進(jìn)入植物后會改變細(xì)胞膜的通透性，破壞胞內(nèi)與光合作用相關(guān)的葉綠體等細(xì)胞器，導(dǎo)致植物枯萎死亡[7]。中藥材儲存過程中有硫磺熏蒸的保存方式，傳統(tǒng)的硫磺熏蒸加工方法由于其經(jīng)濟(jì)低、可操作性強(qiáng)、防霉防蟲等特點被廣泛應(yīng)用于藥材初加工和倉儲等環(huán)節(jié)[8]。但過度硫磺熏蒸會導(dǎo)致藥材的二氧化硫的含量超標(biāo)，甚至造成藥材化學(xué)成分發(fā)生量變或質(zhì)變，影響藥材質(zhì)量，危害人體健康。有研究[9]對全國27個省/市級藥品檢驗機(jī)構(gòu)的374個品種共13 776批藥材檢測發(fā)現(xiàn)其整體合格率僅為79.7%。檢測油菜花粉中二氧化硫殘留可有效地預(yù)防不合格油菜花粉藥材應(yīng)用于臨床，及時改進(jìn)藥材儲存方式甚至原植物的生長環(huán)境。

1.6 農(nóng)藥殘留

農(nóng)業(yè)對我國經(jīng)濟(jì)發(fā)展有著舉足輕重的作用，大量農(nóng)藥的使用在讓農(nóng)產(chǎn)品獲得了更高的產(chǎn)量，廣泛的存在于各種環(huán)境介質(zhì)及動植物體內(nèi)，極大地威脅動物機(jī)體的健康[10]。有機(jī)氯農(nóng)藥因其顯著的殺蟲效果被廣泛應(yīng)用，但具有半衰期長、不易降解和代謝等特點[11]。有研究結(jié)果[12-13]表明，花期前后的農(nóng)藥噴灑和加工的過程中混入的各種農(nóng)藥和環(huán)境污染物，是花粉中農(nóng)藥的主要來源，因此農(nóng)藥殘留成為蜂花粉質(zhì)量控制中一個重要因素。檢測油菜花粉中的農(nóng)藥殘留對其產(chǎn)品開發(fā)具有重大意義。有學(xué)者[14-15]運用氣相色譜（Gas Chromatography，GC）和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（Liquid Chromatograph Mass Spectrometer，LC-MS）對花粉中的有機(jī)氯農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測，研究發(fā)現(xiàn)有一定的殘留。

1.7 重金屬

油菜花粉的營養(yǎng)價值逐步被發(fā)現(xiàn)，并作為保健食品進(jìn)入人們的生活中?；ǚ郾旧砗锈}、鐵、錳、鋅等微量礦物質(zhì)，同時也含鉛、鎘、砷、汞、銅等有害元素[16]。重金屬元素是一種高毒性、持久性、難降解性的環(huán)境污染物，其可通過一系列途徑富集于植物體內(nèi)，通過食物鏈危害人體健康。因此，中藥材中重金屬的控制和管理成為急需解決的問題[17]。有研究運用電感耦合等離子體質(zhì)譜（Inductively Coupled Plasma Massspectrometry，ICP-MS）技術(shù)建立了茶花粉和蕎麥花粉中砷、汞、硒、鎘4種重金屬的含量測定方法[18]。有研究[19]用原子吸收分光光度法，測定10批油菜花粉藥材中的鉛、鎘、砷、汞、銅的含量。有學(xué)者[20]對已收集的花粉樣品采用ICP-MS技術(shù)檢測，結(jié)果顯示，蜂花粉含有一定量的鉛、鎘、砷、汞、鉻等有害元素。有學(xué)者[21]采用ICP-MS技術(shù)檢測不同地區(qū)的蜂花粉中重金屬含量，結(jié)果表明不同地區(qū)的花粉重金屬含量有明顯差別，其中山西省地區(qū)花粉的重金屬含量最高，山東和密云地區(qū)花粉中重金屬含量呈一定的變化趨勢。對油菜花粉中重金屬有害物的檢測及檢出限度將有助于花粉的開發(fā)利用。

2 薄層鑒別

薄層色譜法（Thin Layer Chromatography， TLC）屬于液-固吸附色譜，由于其直觀、經(jīng)濟(jì)、簡便的特點，被廣泛應(yīng)用于藥品定性鑒別、藥品雜質(zhì)檢查、藥品的含量測定及中藥指紋圖譜分析[22]。有學(xué)者[23]運用薄層色譜-生物自顯影法對油菜花粉粗黃酮提取物成分分析。較多蜂花粉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中均采用薄層色譜法對樣品定性鑒別[24-25]。然而油菜花粉現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)《浙江省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》和《福建省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中均未對油菜花粉的進(jìn)行薄層鑒別，僅有2019年版《吉林省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中對油菜花粉進(jìn)行了薄層鑒別，對油菜花粉進(jìn)行薄層鑒別將有助于花粉的質(zhì)量控制和開發(fā)利用。

3 含量測定

研究[1]表明油菜花粉所含營養(yǎng)成分主要包括的黃酮、蛋白質(zhì)、氨基酸、多糖、維生素、脂肪酸、礦物質(zhì)等。目前針對油菜花粉化學(xué)成分含量的研究要集中于黃酮類、多糖等，其主要采用的方法包括高效液相色譜法、分光光度法、苯酚-硫酸法、福林酚法等。

3.1 黃酮的含量測定

黃酮類化合物是一類常見的重要天然產(chǎn)物，具有降血脂、抗動脈硬化、抗炎等多種生理活性功效[26]。2019年版《吉林省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》對油菜花粉中槲皮素和山柰素進(jìn)行了含量限定，其總量不得少于0.24%。2017年版《浙江省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》采用紫外分光光度法對油菜花粉總黃酮進(jìn)行測定，規(guī)定其總量以無水蘆丁計不得少于3.0%。鄭敏燕等[27]采用（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）對青海油菜花粉中槲皮素、山萘酚、異鼠李素測定，其平均含量分別為0.928%、0.295%、0.0834%。阮征等[28]運用HPLC測定油菜花粉經(jīng)不同破壁方法對黃酮提取的影響，結(jié)果顯示溫差-超聲-酶法混合破壁法的破壁率最高，其黃酮的提取得率也最高。黃新球等[29]采用硝酸鋁比色法對油菜花粉等11種蜂花粉中總黃酮測定，結(jié)果顯示11種蜂花粉中總黃酮含量4.75～32.39 mg/g，其中油菜花粉總黃酮含量為15.71 mg/g。高志華[30]運用HPLC成功測定了產(chǎn)自貴陽、龍里、貴定的油菜花粉中山柰素含量，結(jié)果顯示不同產(chǎn)地的油菜花粉中山柰素含量存在一定差異。楊潔[31]運用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（High Performance Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry，HPLC-MS/MS）對油菜蜂蜜中黃酮類物質(zhì)進(jìn)行定性和定量研究，鑒定出17種黃酮類化合物，包括槲皮素、山柰素、異鼠李素、木犀草素等。

3.2 多糖的含量測定

蜂花粉中含豐富的多糖，主要包括果膠多糖、纖維素和半纖維素等，具有多方面的生物活性和藥理作用[32-33]。研究表明[34-35]蜂花粉具有提高機(jī)體免疫力、降血糖、降血脂、抗氧化等功效。胡景華等[36]對油菜花粉中的多糖進(jìn)行提取、測定，結(jié)果顯示不同產(chǎn)地油菜花粉的多糖含量無顯著差異。涂宗財[37]等通過單因素實驗優(yōu)化和篩選苯酚-硫酸法測定油菜花粉多糖的顯色條件，得出最佳顯色條件，降低了多糖測定中其他成分的影響，使分析測定的結(jié)果更加可靠。有研究采用[38]響應(yīng)面優(yōu)化超聲輔助提取油菜花粉多糖，優(yōu)化后多糖提取率驗證值可達(dá)5.28%。有研究表明[39]油菜蜂花粉多糖（平均值）通常占花粉干重的35%左右，不同產(chǎn)地的油菜花粉多糖的含量有差異。

3.3 其他成分的含量測定

油菜花粉中還含有大量蛋白質(zhì)、脂肪、總多酚和維生素。有研究[40]對油菜花粉破壁前后的品質(zhì)分析，發(fā)現(xiàn)破壁后的花粉中脂肪和蛋白質(zhì)含量均高于未破壁花粉。李敏[41]分別采用凱式定氮法、索氏抽提法測定油菜花粉中蛋白質(zhì)和脂肪的含量，結(jié)果顯示油菜花粉中的蛋白含量比脂肪高。有研究[29]采用福林酚法對油菜花粉等11種蜂花粉中總多酚測定，結(jié)果顯示油菜花粉中總多酚含量為21.16 mg/g。蔣燕霞[42]等采用HPLC技術(shù)對油菜花粉中維生素C的含量進(jìn)行測定，結(jié)果油菜花粉中維生素C含量范圍為0.32～0.42 mg/g。

4 化學(xué)成分

油菜花粉的化學(xué)成分相當(dāng)豐富，它含有較多的天然活性成分，其成分主要包括多糖、黃酮、蛋白質(zhì)和氨基酸、礦物質(zhì)和維生素、脂類等。油菜花粉中蛋白質(zhì)種類多，主要包括水溶蛋白、難溶蛋白、醇溶蛋白和堿溶蛋白，總蛋白含量合計可達(dá)27.4%[43]，氨基酸主要包括天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸、脯氨酸和豐富的游離氨基酸[44]。

有研究發(fā)現(xiàn)[20，45]發(fā)現(xiàn)油菜花粉分別含有鈣、鎂、鐵、鈉、錳、鋁、銅和維生素A、維生素E及維生素C等常量和微量元素。研究發(fā)現(xiàn)[43]油菜花粉中含有一定量不飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸，主要有花生四烯酸、油酸、亞油酸和亞麻酸等。多糖是由多個單糖分子通過脫水得到的。有研究[35-36，41]對油菜花粉中的多糖分析，發(fā)現(xiàn)其主要含木糖、甘露糖、阿拉伯糖、鼠李糖、葡萄糖和半乳糖。大量研究[23，46]表明油菜花粉的活性物質(zhì)主要是其含有的大量且種類繁多的黃酮類化合物，包括山萘酚、槲皮素、異鼠李素等。油菜花粉除含有上述營養(yǎng)成分外，還含有磷脂、甾醇類及揮發(fā)油成分等[47-49]。

5 藥理作用

油菜花粉因含有豐富的營養(yǎng)成分和多種生物活性物質(zhì)，具備了多種藥理作用，隨著國內(nèi)外學(xué)者對油菜花粉功效的深入研究，發(fā)現(xiàn)其具有提高免疫功能、抗氧化、抗腫瘤、抑制前列腺增生、降血脂等作用。

相關(guān)研究[50-54]表明油菜花粉中的植物多糖、維生素、蛋白質(zhì)和其他多種活性成分可促進(jìn)免疫細(xì)胞的增殖和分化，增強(qiáng)細(xì)胞活性。相關(guān)臨床研究[55-56]表明花粉在治療前列腺疾病上作用溫和，無不良反應(yīng)，有良好的治療效果，治療機(jī)制與激素調(diào)節(jié)及抗炎作用相關(guān)。有研究[51，57]發(fā)現(xiàn)油菜花粉具有抗衰、抗氧化、保護(hù)機(jī)體免受外源自由基損傷的特性，主要原因是其對氧自由基致紅細(xì)胞膜損傷有保護(hù)作用，其主要有效成分包括黃酮、蛋白及多糖[58-60]。研究表明[61]花粉多糖主要通過活化淋巴T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等對腫瘤細(xì)胞有強(qiáng)殺傷力細(xì)胞的增殖，產(chǎn)生淋巴因子和抗體，從而對腫瘤產(chǎn)生抑制作用。有研究表明[62]油菜花粉肽為抗腫瘤的有效成分，其作用機(jī)制主要是油菜花粉肽作用于胃癌SGC 7901細(xì)胞，與油菜花粉肽的濃度有關(guān)。油菜花粉因含有多不飽和脂肪酸及黃酮類化合物，可作為理想的降血脂原料藥的理論，已被相關(guān)研究[63-64]證實。油菜花粉營養(yǎng)物質(zhì)豐富，還具有美容養(yǎng)顏、抗疲勞、保護(hù)肝臟[65]等多種功效。

6 指紋圖譜研究

6.1 指紋圖譜研究概述

指紋圖譜技術(shù)包括色譜法和光譜法，色譜法是其主要方法。目前國際上，將中藥指紋圖譜看作一種對天然藥物進(jìn)行質(zhì)量控制及成分檢測的方法，且已達(dá)成共識。建立中藥指紋圖譜，保證其專業(yè)的特性并更好的應(yīng)用于相關(guān)研究，需遵循穩(wěn)定性原則、特征性原則和系統(tǒng)性原則。高效液相指紋圖譜技術(shù)具有使用范圍廣、分離效能高、分析速度快、流動相選擇性廣等特點，適用于揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大的中藥成分的分析檢測。

6.2 油菜花粉指紋圖譜的研究

有研究[66]利用HPLC色譜法對油菜花粉總黃酮部位進(jìn)行分析得到HPLC指紋圖譜，并明確劃出16個共有峰，結(jié)果證明該方法穩(wěn)定性及重復(fù)性較好，為油菜花粉的質(zhì)量控制提供一定的依據(jù)。有研究[67]建立11批不同產(chǎn)地油菜花粉的中藥指紋圖譜，其相似度評價結(jié)果表明不同地區(qū)油菜花粉含有的化學(xué)成分是相對穩(wěn)定的，建立的中藥指紋圖譜可行，為其質(zhì)量評價提供一定依據(jù)。有學(xué)者[68]利用HPLC指紋圖譜對10批油菜花粉進(jìn)行研究，實驗結(jié)果表明黃酮類成分的高效液相色譜指紋圖譜能客觀反映油菜花粉的指紋特征，具有一定的相似性和內(nèi)在差異，可通過內(nèi)在的差異來控制油菜花粉質(zhì)量，成為油菜花粉質(zhì)量評價及質(zhì)量控制的重要指標(biāo)。

7 結(jié)語

油菜是我國主要的油料農(nóng)作物之一，有悠久的種植歷史，豐富多樣的資源。隨著對油菜花粉不斷深入研究，它的功能特性逐漸被挖掘出來，利用價值也越來越高。與此同時，油菜花粉的安全性也越來越受到關(guān)注。要在不斷利用油菜花粉的同時，采取各種手段來嚴(yán)格控制油菜花粉的質(zhì)量，保證其安全有效。本文通過對油菜花粉現(xiàn)有的質(zhì)量檢測進(jìn)行總結(jié)，以期為相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的制定提供參考依據(jù)。

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基金項目：貴州省中醫(yī)藥管理局（黔中醫(yī)藥函〔2020〕101號）。

作者簡介：牛建均（1991—），男，漢族，碩士，中藥師。研究方向：中藥、民族藥質(zhì)量控制及新藥研究。

通信作者：馬四補(bǔ)（1979—），男，回族，博士，副教授。研究方向：中藥、民族藥質(zhì)量控制及新藥研究。E-mail：453175568@qq.com。