張慧珍 王丹 馬盼

摘要：蠟樣芽胞桿菌是一種條件致病菌，該菌生長的最適溫度為28℃～37℃，其繁殖體較耐熱，需100℃×20分鐘才被殺死，其芽胞可耐受100℃×30分鐘或干熱120℃×60分鐘才能被殺死，這也是它不同于其他食源性致病菌的重要特征。蠟樣芽胞桿菌的檢驗(yàn)原理為根據(jù)其在特定培養(yǎng)基上特定的生長、形態(tài)和生理生化特征，首先將蠟樣芽胞桿菌培養(yǎng)物均勻分散在稀釋液中，再將稀釋液涂布在MYP瓊脂平板上30℃培養(yǎng)24小時(shí)后，挑取典型菌落在營養(yǎng)瓊脂上純培養(yǎng);隨后接種于硫酸錳營養(yǎng)瓊脂平板上，不同溫度培養(yǎng)24 h后，分別將平板放入不同溫度的培養(yǎng)箱中，同一時(shí)間觀察蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶的產(chǎn)生情況，從而對蠟樣芽胞桿菌的生長有更深入的了解。

一、試驗(yàn)方法：

1、菌液制備：接種蠟樣芽胞桿菌的凍存菌種至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中活化培養(yǎng)24h后，將上述培養(yǎng)物用0.85%的無菌生理鹽水分別制成含菌量為104～105CFU/mL的菌懸液。

2、樣品檢測：按照GB 4789.14-2014的檢驗(yàn)流程進(jìn)行試驗(yàn)。

3、將經(jīng)過營養(yǎng)瓊脂純培養(yǎng)的蠟樣芽胞桿菌分別接種于硫酸錳營養(yǎng)瓊脂平板上，具體試驗(yàn)方案[2][3][4]如下：

將硫酸錳平板按照檢測方法培養(yǎng)相應(yīng)的時(shí)間，分別放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

5、結(jié)果分析：

蠟樣芽胞桿菌生長的最適溫度為28℃～37℃，在第一次培養(yǎng)溫度是25℃時(shí)，分別在第二次培養(yǎng)30℃和 36℃第二天時(shí)出現(xiàn)大量的游離芽孢和蛋白質(zhì)結(jié)晶體，說明在此溫度條件下菌體可大量繁殖并在營養(yǎng)物質(zhì)匱乏時(shí)產(chǎn)生較多的蛋白質(zhì)結(jié)晶體。

在第一次培養(yǎng)溫度是30℃時(shí)，在第二次培養(yǎng)30℃第二天時(shí)出現(xiàn)大量游離芽孢和蛋白質(zhì)結(jié)晶體，說明在此溫度條件下菌體可大量繁殖并在營養(yǎng)物質(zhì)匱乏時(shí)產(chǎn)生較多的蛋白質(zhì)結(jié)晶體。

在第一次培養(yǎng)溫度是36℃時(shí)，在第二次培養(yǎng)25℃和 30℃第二天時(shí)出現(xiàn)大量的游離芽孢，但在25℃時(shí)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)結(jié)晶體較少，說明在30℃溫度條件下菌體可大量繁殖并在營養(yǎng)物質(zhì)匱乏時(shí)產(chǎn)生較多的蛋白質(zhì)結(jié)晶體。

實(shí)驗(yàn)結(jié)論

通過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可看出，在該菌的適宜生長為溫度范圍內(nèi)，適當(dāng)調(diào)整兩次培養(yǎng)溫度的溫度差，有利于在較短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生大量的游離芽孢和蛋白質(zhì)結(jié)晶體，從而達(dá)到縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間的效果，提高檢測效率。

參考文獻(xiàn)：

[1]GB 4789.14-2014， 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 蠟樣芽胞桿菌檢驗(yàn)[S].

[2]劉芳，羅臻，黃靜敏，蘭全學(xué).致病性蠟樣芽胞桿菌的研究進(jìn)展[J].檢驗(yàn)檢疫學(xué)刊，2016，26（01）：68-71.

[3]洪程基.蠟樣芽胞桿菌檢驗(yàn)及方法探討[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2006（04）：484-485.

[4]李玲. 蠟樣芽孢桿菌培養(yǎng)條件優(yōu)化及動(dòng)力學(xué)研究[D].南京大學(xué)，2011.

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