方曉丹，王有成，王愛珍，錢 穎

(金華市人民醫(yī)院 兒科，浙江 金華 321000)

腸道微生態(tài)為人體中最主要、最復(fù)雜的微生態(tài)系統(tǒng)，腸道微生態(tài)穩(wěn)態(tài)的維系對(duì)嬰幼兒營(yíng)養(yǎng)代謝、致病菌的免疫拮抗具有重要的意義[1]。腸球菌、大腸桿菌等需氧菌為出生初期嬰兒腸道的優(yōu)勢(shì)菌群。隨著嬰兒的生長(zhǎng)發(fā)育，雙歧桿菌等專性厭氧菌發(fā)酵乳糖逐漸改變腸道微生態(tài)的pH值，腸道微生物群形成相互制約并依存的平衡體系[2]。嬰幼兒期為腸道微生態(tài)形成的關(guān)鍵時(shí)期，腸道微生態(tài)受多因素影響，其中喂養(yǎng)方式是重要的影響因素[3]。本研究對(duì)240例新生兒進(jìn)行長(zhǎng)期跟蹤隨訪，探討益生菌干預(yù)對(duì)嬰兒腸道微生態(tài)及生長(zhǎng)發(fā)育的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2017年1月—2019年1月金華市人民醫(yī)院兒科73例純母乳喂養(yǎng)足月新生兒設(shè)為母乳喂養(yǎng)組。另選擇同期171例人工喂養(yǎng)(母乳喂養(yǎng)不超過1周)足月新生兒，按隨機(jī)數(shù)字表分為益生菌干預(yù)組86例和單純?nèi)斯の桂B(yǎng)組85例。納入標(biāo)準(zhǔn)：健康足月兒，均為陰道分娩，產(chǎn)婦6個(gè)月內(nèi)無抗生素應(yīng)用史。排除低體重兒(出生體質(zhì)量<2.5 kg)、巨大兒(出生體質(zhì)量>4.0 kg)，排除有窒息、顱內(nèi)出血、感染、病理性肥胖、先天性畸形、遺傳代謝性疾病的新生兒；排除有妊娠糖尿病、妊娠高血壓綜合征、吸煙、酗酒、吸毒史的產(chǎn)婦。隨訪過程中，母乳喂養(yǎng)組發(fā)生脫漏1例、益生菌干預(yù)組發(fā)生脫漏2例、單純?nèi)斯の桂B(yǎng)組發(fā)生喂養(yǎng)不耐受1例。各組性別、出生體質(zhì)量、出生身長(zhǎng)及胎齡差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象家屬均簽署知情同意書。

表1 各組一般資料比較

1.2 喂養(yǎng)方法 母乳喂養(yǎng)組采用純母乳喂養(yǎng)，單純?nèi)斯の桂B(yǎng)組采用不添加益生菌的配方奶粉(合生元)喂養(yǎng)，益生菌干預(yù)組采用添加益生菌的配方奶粉(合生元，雙歧桿菌出廠時(shí)不少于 1×106CFU/g)喂養(yǎng)，3組均于出生后第5月開始正常添加輔食。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 雙歧桿菌與大腸桿菌的數(shù)量比值 分別于嬰幼兒出生第3天、第1月及第6月留取2 g糞便置于無菌容器，16S r RNA熒光定量PCR定量檢測(cè)糞便中雙歧桿菌、大腸桿菌，計(jì)算雙歧桿菌與大腸桿菌的數(shù)量比值(B/E值)。雙歧桿菌引物：上游5′-GATTCTGGCTCAGGATGAACGC-3′，下游 5′-CTGATAGGACGCGACCCCAT-3′；大腸桿菌引物：上游5 ′-CATGCCGCGTGTATGAAGAA - 3′，下游 5′-CGGGTAACGTCAATGAGCAAA-3′；擴(kuò)增反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5 min；95℃ 40 s、55℃ 20 s、68℃ 40 s，共40個(gè)循環(huán)；72℃延伸10 min。試劑購(gòu)于北京天根生化有限科技公司。

1.3.2 發(fā)育指標(biāo) 嬰兒肥胖指標(biāo)采用《中國(guó)7歲以下兒童生長(zhǎng)發(fā)育參照標(biāo)準(zhǔn)》[4]，BMI≥95 kg/m2為肥胖。采用《0～6歲小兒神經(jīng)心理發(fā)育檢查表》[5]評(píng)價(jià)嬰兒神經(jīng)心理發(fā)育水平，包括大運(yùn)動(dòng)、精細(xì)動(dòng)作、語言、適應(yīng)能力、社會(huì)行為，神經(jīng)心理發(fā)育商(DQ)=智齡/實(shí)際月齡×100%，≥130為優(yōu)秀，115～<130為中上，85～<115為中等，70～<85為中下，<70為低下。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS22.0，log腸道菌群定量值為正態(tài)分布，采用log值比較，3組及3組以上組間計(jì)量資料比較單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK法，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 雙歧桿菌與大腸桿菌及比值比較 干預(yù)前，3組糞便雙歧桿菌定量結(jié)果、大腸桿菌定量結(jié)果、B/E比值比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。干預(yù)后第3天、第1月及第6月，母乳喂養(yǎng)組和益生菌干預(yù)組的糞便雙歧桿菌定量結(jié)果、B/E比值均高于同期單純?nèi)斯の桂B(yǎng)組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。干預(yù)后第3天和第1月，母乳喂養(yǎng)組、益生菌干預(yù)組的糞便大腸桿菌定量結(jié)果均低于同期單純?nèi)斯の桂B(yǎng)組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 干預(yù)前后3組研究對(duì)象雙歧桿菌與大腸桿菌及比值比較

2.2 發(fā)育指標(biāo)比較 干預(yù)后第6月，3組身長(zhǎng)、神經(jīng)發(fā)育商比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；母乳喂養(yǎng)組、益生菌干預(yù)組的身長(zhǎng)、神經(jīng)發(fā)育商結(jié)果均高于單純?nèi)斯の桂B(yǎng)組，母乳喂養(yǎng)組、益生菌干預(yù)組肥胖率均低于單純?nèi)斯の桂B(yǎng)組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；見表3。

表3 干預(yù)后第6月3組研究對(duì)象發(fā)育指標(biāo)比較

3 討論

腸道微生態(tài)的穩(wěn)定對(duì)病原微生物的免疫防御、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝均有重要意義。嬰兒腸道微生態(tài)的形成源于母體及周圍環(huán)境，早期腸道定植群主要來源于生產(chǎn)時(shí)產(chǎn)道以及母乳喂養(yǎng)時(shí)所接觸的菌群。隨著喂養(yǎng)方式以及所接觸的環(huán)境不同，嬰兒期腸道微生態(tài)的波動(dòng)也較大。本研究結(jié)果顯示，母乳喂養(yǎng)與益生菌干預(yù)嬰兒在干預(yù)后第3天、第1月及第6月腸道微生態(tài)雙歧桿菌、大腸桿菌數(shù)量均逐漸增多，其中雙歧桿菌為優(yōu)勢(shì)菌群，B/E隨生長(zhǎng)發(fā)育逐漸降低。研究[6]表明，成人腸道微生態(tài)較為穩(wěn)定，嬰幼兒腸道微生態(tài)的發(fā)育需達(dá)3歲左右才接近于成人。嬰幼兒保健一直提倡母乳喂養(yǎng)，一方面母乳中的免疫球蛋白可提高嬰幼兒免疫力，另一方面母乳中的雙歧因子也可促進(jìn)嬰幼兒腸道雙歧桿菌的增殖，利于嬰幼兒腸道微生態(tài)的早期建立[7]。早期嬰幼兒腸道菌群99%為生理性厭氧菌，雙歧桿菌對(duì)腸道微生態(tài)的平衡較為關(guān)鍵[8]。益生菌為益于宿主健康的活微生物，對(duì)腸道微生態(tài)平衡是有益補(bǔ)充；同時(shí)可增強(qiáng)腸道黏膜的屏障作用，保護(hù)腸黏膜上皮的完整性；對(duì)嬰幼兒免疫系統(tǒng)的發(fā)育完善也有較好的刺激作用[9]。本研究結(jié)果顯示，母乳喂養(yǎng)組、益生菌干預(yù)組干預(yù)后第3天、第1月及第6月的糞便雙歧桿菌定量結(jié)果均明顯高于同期單純?nèi)斯の桂B(yǎng)組，母乳喂養(yǎng)組和益生菌干預(yù)組干預(yù)后第3天、第1月及第6月的糞便B/E比值結(jié)果均明顯高于同期單純?nèi)斯の桂B(yǎng)組，提示益生菌干預(yù)對(duì)嬰兒腸道微生態(tài)的建立有積極作用。

研究[10-11]表明，雙歧桿菌、乳酸桿菌為腸道有益菌種，早期益生菌的干預(yù)對(duì)嬰幼兒的生長(zhǎng)發(fā)育有積極作用。本研究結(jié)果表明，干預(yù)后第6月，母乳喂養(yǎng)組、益生菌干預(yù)組嬰兒的身長(zhǎng)、神經(jīng)發(fā)育商結(jié)果均明顯高于單純?nèi)斯の桂B(yǎng)組，母乳喂養(yǎng)組、益生菌干預(yù)組肥胖率均明顯低于單純?nèi)斯の桂B(yǎng)組。母乳中低聚糖可促進(jìn)雙歧桿菌、乳酸桿菌的腸道定植，益生菌對(duì)腸道吸收植物多糖具有促進(jìn)作用，對(duì)于碳水化合物的分解以及維生素的合成均有積極的促進(jìn)作用[12]。另外，腸道微生態(tài)與脂質(zhì)代謝關(guān)系密切，研究[13]顯示，部分肥胖人群存在腸道微生態(tài)失衡、雙歧桿菌減少、大腸桿菌增多的現(xiàn)象。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)[14]結(jié)果表明，高脂飲食可導(dǎo)致小鼠腸道菌群紊亂。目前腸道微生態(tài)失衡引起肥胖的機(jī)制未完全明確，仍需進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，腸道微生態(tài)的穩(wěn)態(tài)對(duì)嬰兒的生長(zhǎng)發(fā)育較為關(guān)鍵，相較于單純?nèi)斯の桂B(yǎng)，益生菌干預(yù)有助于嬰兒腸道微生態(tài)的建立和生長(zhǎng)發(fā)育。