荊金金，張若愚，林冰潔，林潮輝，熊智欽，張豐香，薛鵬

（濰坊醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，山東濰坊 261053）

單核細(xì)胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes，Lm）為革蘭氏陽(yáng)性胞內(nèi)寄生菌，屬于食源性致病菌的一種，廣泛存在于荷塘污泥、淺地表水、土壤等自然環(huán)境中且易污染蔬菜、水果、禽類、肉類、蛋類、乳制品、奶制品、水源以及海產(chǎn)品等食物，可感染多種哺乳動(dòng)物，導(dǎo)致人畜共患病[1,2]。單核細(xì)胞增生李斯特菌能打破胃腸道粘膜屏障、胎盤屏障和血腦屏障，易感人群為老年人、新生兒、孕婦及免疫力低下者[3]，可導(dǎo)致胃腸炎、敗血癥、腦膜腦炎、胎盤胎兒感染及流產(chǎn)，致死率高達(dá)30%，遠(yuǎn)高于其他食源性致病菌[4]。美國(guó)疾病預(yù)防與控制中心（Centers for Disease Control and Prevention，CDC）報(bào)道，每年有1600人因食用被單核細(xì)胞增生李斯特菌污染的食物感染李斯特菌病，其中約260人死亡[5]。國(guó)內(nèi)李斯特菌感染案例相對(duì)較少[6]，但未來(lái)仍存在許多潛在的威脅。

目前，李斯特菌病的主要治療藥物為抗生素，但在治療過(guò)程中容易出現(xiàn)抗生素濫用現(xiàn)象，易引起超級(jí)耐藥菌的產(chǎn)生[7]。因此，研究和開(kāi)發(fā)新型綠色抗生素替代藥物成為當(dāng)前的研究熱點(diǎn)和難點(diǎn)之一[8]。博落回為罌粟科博落回屬多年生草本植物，具有抗菌消炎、增強(qiáng)免疫力以及抗腫瘤等功效[9]。早在20年前，博落回就因其安全、無(wú)污染、易降解無(wú)殘留、不易產(chǎn)生耐藥菌等優(yōu)點(diǎn)，作為獸藥和生物農(nóng)藥廣泛應(yīng)用于養(yǎng)殖生產(chǎn)中。但博落回本身有毒，長(zhǎng)期食用會(huì)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生危害[8-10]。

西洋參（American ginseng）為五加科人參屬多年生草本植物，原生長(zhǎng)于北美原始森林，已在我國(guó)引種栽培多年，目前我國(guó)西洋參種植主要集中在吉林、黑龍江、山東、北京等地[11,12]。西洋參的主要生物活性成分為人參皂苷和多糖。人參皂苷廣泛存在于西洋參的根、莖葉、花蕾及果實(shí)中[13,14]。研究表明，西洋參莖葉中總皂苷的含量高于其根部[15]，且類型相似，藥理活性差異較小[16]。人參原型皂苷在腸道中的轉(zhuǎn)化非常微弱，大部分很難被利用。低糖基的人參皂苷Rg2、C-K、Rg3、Rh1、Rh2等，在腸道中的吸收率高[17]，具有抗癌、抗血栓、抗炎癥、抗皮膚老化以及治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病等功效，特別是將人參皂苷結(jié)構(gòu)修飾得到的次級(jí)人參稀有皂苷，效果更佳[18,19]。人參中含量極低的皂苷如Rh2、Rg3、Rk3、Rg6等被稱為稀有皂苷[17]。稀有皂苷在西洋參中含量非常少，研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)對(duì)普通人參皂苷的糖基進(jìn)行改造可以得到稀有皂苷[20]。

目前對(duì)于單核細(xì)胞增生李斯特菌的研究主要集中在其對(duì)孕婦、新生兒、免疫力低下者的危害，對(duì)男性危害研究較少。對(duì)于人參皂苷的研究主要集中在其抗腫瘤、抗氧化、心血管疾病治療等方面，對(duì)于抗感染的研究少。因此，本實(shí)驗(yàn)以雄性小鼠為研究對(duì)象，以富含低極性皂苷的西洋參轉(zhuǎn)化皂苷（HTS）為原料，研究其對(duì)感染單核細(xì)胞增生李斯特菌雄性小鼠的保護(hù)效果。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

單核細(xì)胞增生李斯特菌（ATCC19115），購(gòu)自廣東省微生物菌種保存中心；無(wú)特定病原體級(jí)別（SPF）的雄性昆明鼠（6~8周齡），購(gòu)自山東朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司（許可證號(hào)：SCXK2019003）；西洋參莖葉皂苷（AGS），購(gòu)自吉林宏久生物科技有限公司；血瓊脂和腦心浸液（BHI）培養(yǎng)基，購(gòu)自青島海博生物科技有限公司；ELISA試劑盒，購(gòu)自上海西塘生物科技有限公司；博落回注射液，購(gòu)自山東易和天生物科技有限公司；青霉素80萬(wàn)單位和異氟醚，購(gòu)自山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司。其他化學(xué)物質(zhì)都是分析或色譜級(jí)別的。

BPMJ-150F型培養(yǎng)箱，上海億恒科學(xué)儀器有限公司；IX73奧林巴斯光學(xué)顯微鏡，日本Olympus公司；SW-CJ-2F型雙人雙面凈化工作臺(tái)，蘇州凈化設(shè)備有限公司；SCIENTZ-48L冷凍型高通量組織研磨器，寧波新芝生物科技股份有限公司；1510酶標(biāo)儀，賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；AR224CN電子天平，常州奧豪斯儀器有限公司；Thermo臺(tái)式離心機(jī)，美國(guó)賽默飛世爾科技公司；GF88DA型高壓滅菌鍋，廈門致微儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 西洋參轉(zhuǎn)化皂苷的制備

以西洋參莖葉皂苷（AGS）（粗皂苷含量可達(dá)89%）為原料，轉(zhuǎn)化后的西洋參莖葉皂苷（HTS）由實(shí)驗(yàn)室前期制備。經(jīng)高效液相色譜儀分析，AGS中極性皂苷含量為 0.81±0.03 mg/mg（主要為 Rb2、Re/Rg1、Rd等），低極性皂苷含量為0.08±0.02 mg/mg；HTS中極性皂苷含量為 0.10±0.01 mg/mg，低極性皂苷含量為 0.76±0.02 mg/mg（主要為 Rg3、Rk1、Rg6、Rg5 等）[21,22]。

1.2.2 單核細(xì)胞增生李斯特菌培養(yǎng)

稱取7.6 g血瓊脂培養(yǎng)基，加熱溶解于200 mL蒸餾水中攪拌均勻，置于三角瓶中，高壓滅菌鍋中121 ℃高壓滅菌15 min，冷卻至50~55 ℃時(shí)無(wú)菌操作加入預(yù)溫至36 ℃的5%（V/V）無(wú)菌脫纖維綿羊血，混勻，傾入無(wú)菌平皿及50 mL離心管中，分別制成鮮紅色血培養(yǎng)基和血瓊脂斜面培養(yǎng)基，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。稱取7.6 g腦心浸液肉湯（BHI），加熱攪拌溶解于200 mL蒸餾水中，置于三角瓶中，高壓滅菌鍋中121 ℃高壓滅菌15 min，待培養(yǎng)基冷卻至60 ℃時(shí)，分裝至50 mL離心管，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

將凍干的單核細(xì)胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes，Lm）粉末置于 BHI培養(yǎng)基中，培養(yǎng)箱37 ℃孵化24 h，連續(xù)傳代。將活化的單核細(xì)胞增生李斯特菌置于預(yù)先準(zhǔn)備好的血液瓊脂斜面培養(yǎng)基中低溫保存。

1.2.3 菌懸液制備

用接種環(huán)接種培養(yǎng)后的Lm，將其分別置于含 1 mL生理鹽水的離心管中，分散混合，顯微鏡下計(jì)數(shù)，調(diào)整菌懸液濃度至106CFU/mL。

1.2.4 體外抑菌實(shí)驗(yàn)

高溫滅菌直徑為6 mm的濾紙分成3組（4片/組），分別標(biāo)記為1、2、3、4。用移液器準(zhǔn)確吸取10 mg/mL AGS溶液和HTS溶液，5萬(wàn)單位/0.1 mL青霉素注射液和10 mg/mL博落回注射液各10 μL，分別對(duì)1、2、3、4號(hào)試紙片進(jìn)行浸潤(rùn)干預(yù)（2次/片）。用移液器吸取100 μL菌懸液均勻涂布于血瓊脂培養(yǎng)基，用棉棒吸干多余的細(xì)菌懸液。將制備好的試紙按序號(hào)順時(shí)針排列在培養(yǎng)基上，將培養(yǎng)基置于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h后觀察抑菌圈[23]。

1.2.5 體內(nèi)抑菌實(shí)驗(yàn)

30只雄性昆明鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機(jī)分成5組：空白組、陰性組、AGS預(yù)處理組（AGS組）、HTS預(yù)處理組（HTS組）和青霉素組，每組6只。AGS組和HTS組小鼠分別給予 10 mg/kg的 AGS、HTS，10 mL/(kg·d)等體積灌胃預(yù)處理14 d，其余3組不做任何預(yù)處理。14 d后，陰性組、青霉素組、AGS組和HTS組小鼠分別給與腹腔注射0.1 mL 106CFU/mL單核細(xì)胞增生李斯特菌菌懸液，空白組不做任何處理。染菌后，AGS組和HTS組小鼠分別給予10 mg/mL的AGS、HTS，10 mg/(kg·d)等體積灌胃7 d，青霉素組小鼠腹腔注射0.1 mL 5萬(wàn)單位/0.1 mL青霉素注射液，陰性組和空白組不做任何處理。根據(jù)病情進(jìn)展，從上午7:00至晚上10:00每隔4 h觀察一次。每天稱量各組小鼠的體重并做記錄。當(dāng)小鼠出現(xiàn)行動(dòng)能力下降，不能進(jìn)食或飲水時(shí)，用1%~4%異氟醚對(duì)這些小鼠實(shí)施安樂(lè)死[24]。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案均經(jīng)濰坊醫(yī)學(xué)院動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（準(zhǔn)字文號(hào)：2020SDL147）。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，收集小鼠血液，并迅速解剖臟器（肝、脾、腎），立即拍照并記錄臟器重量，手術(shù)刀快速收集2 mm×5 mm×5 mm肝組織切片，10%甲醛溶液固定，并迅速送至濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科制備石蠟切片和血常規(guī)分析。

1.2.5.1 體重和臟器系數(shù)

每天稱量并記錄各組小鼠體重。當(dāng)小鼠出現(xiàn)終點(diǎn)現(xiàn)象時(shí)，異氟醚麻醉下頸椎脫位處死小鼠。處死后立即拍照并記錄臟器（肝、脾、腎）重量。未出現(xiàn)終點(diǎn)現(xiàn)象的小鼠在第8 d使用異氟醚安樂(lè)死，拍照并稱量記錄臟器（肝、脾、腎）重量。

1.2.5.2 肝組織切片

各組小鼠出現(xiàn)死亡后即刻解剖，并用手術(shù)刀快速收集2 mm×5 mm×5 mm肝組織切片。肝組織切片用10%甲醛溶液固定，盡快送至濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科制備石蠟切片。石蠟切片在 IX73奧林巴斯光學(xué)顯微鏡（奧林巴斯有限公司，日本東京）下觀察。

1.2.5.3 染菌小鼠血常規(guī)測(cè)定

各組小鼠出現(xiàn)瀕死現(xiàn)象時(shí)，摘眼球取血，將血液裝在含有肝素鈉抗凝劑的EP管內(nèi)混勻，盡快送至濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科進(jìn)行血常規(guī)分析。

1.2.5.4 肝臟中IL-1β和IFN-γ水平

取部分小鼠肝臟稱重，按重量體積比1:9的比例加入無(wú)菌生理鹽水，用冷凍型高通量組織研磨器研磨成組織勻漿，4000×g離心10 min，取上清液備用。用ELISA試劑盒檢測(cè)肝組織中IL-1β和IFN-γ水平，具體操作步驟參照試劑盒說(shuō)明書(shū)，由ELISA軟件計(jì)算細(xì)胞因子水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS Statistics 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理；采用GraphPad Prism 8進(jìn)行數(shù)據(jù)分析及繪圖。利用單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，在方差齊性檢驗(yàn)的基礎(chǔ)上，利用LSD-t法對(duì)不同組間差異進(jìn)行分析，用“*”和“#”表示顯著性差異。上述每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，測(cè)量結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±SD)表示。

2 結(jié)果與討論

2.1 紙片法測(cè)定抑菌活性

如圖1可知，通過(guò)比較抑菌圈的大小，AGS、HTS、博落回和青霉素對(duì)單核細(xì)胞增生李斯特菌有抑菌效果，抑菌圈大小為青霉素>博落回>HTS>AGS。低極性皂苷表面的糖基較少，與微生物的親和力增強(qiáng)，破壞細(xì)胞膜的穩(wěn)定性，從而達(dá)到抑菌的效果[25,26]。

圖1 抑菌圈大小Fig.1 Bacteriostatic zone size

由表1可知，AGS、HTS、青霉素和博落回注射液均對(duì)單核細(xì)胞增生李斯特菌具有抑制作用。青霉素對(duì)單核細(xì)胞增生李斯特菌的抑制效果最好，抑菌圈直徑為34.70 mm；其次為博落回注射液，抑菌圈直徑為28.27 mm；HTS對(duì)單核細(xì)胞增生李斯特菌的抑菌圈直徑為18.47 mm；AGS對(duì)單核細(xì)胞增生李斯特菌的抑制效果最差，抑菌圈直徑為17.00 mm。AGS、HTS、青霉素和博落回注射液對(duì)單核細(xì)胞增生李斯特菌抑菌直徑的方差分析結(jié)果均顯示p<0.05，四種物品的抑菌效果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明富含低極性皂苷的HTS抑菌效果優(yōu)于AGS，與薛鵬[21]等研究相互佐證。

表1 抑菌圈直徑的測(cè)定結(jié)果Table 1 Results of inhibition zone diameters test

2.2 染菌小鼠生存情況

腹腔注射0.1 mL 106CFU/mL單核細(xì)胞增生李斯特菌后，小鼠生存情況如圖2所示，AGS組小鼠染菌后的第3 d開(kāi)始出現(xiàn)死亡，7 d內(nèi)的的存活率為83%；陰性組、HTS組和青霉素組小鼠染菌后的7 d內(nèi)未出現(xiàn)死亡，存活率為 100%；空白組小鼠未出現(xiàn)死亡，排除其它因素對(duì)小鼠生存率的影響。AGS除可提高機(jī)體免疫力，同時(shí)可改善微循環(huán)，促進(jìn)機(jī)體血液循環(huán)[27]，加速單核細(xì)胞增生李斯特菌在體內(nèi)分布，進(jìn)而造成小鼠死亡。

圖2 生存曲線Fig.2 Percent survival

2.2.1 染菌小鼠體重變化根據(jù)小鼠的臨床表現(xiàn)（表2）和體重變化情況（圖3）可知，陰性組、AGS組和青霉素組小鼠，染菌后的第2 d出現(xiàn)毛色枯燥、食欲不振、腹瀉等臨床表現(xiàn)；HTS組染菌后，第2 d毛色、食欲未出現(xiàn)明顯變化，體重則呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，第3 d出現(xiàn)毛色枯燥、食欲不振、腹瀉等臨床表現(xiàn)。AGS組小鼠染菌后的第3 d體重下降最嚴(yán)重約 5%，之后呈現(xiàn)緩慢上升趨勢(shì)；陰性組小鼠染菌后的第6 d體重下降最嚴(yán)重約5.6%，之后呈上升趨勢(shì)；HTS組小鼠染菌后第3 d體重下降最嚴(yán)重約0.5%，總體呈上升趨勢(shì)；青霉素組小鼠染菌后的第2 d體重下降最嚴(yán)重約2.2%，之后呈上升趨勢(shì)；空白組小鼠在實(shí)驗(yàn)期間臨床表現(xiàn)正常，體重總體呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。單核細(xì)胞增生李斯特菌感染，可引起機(jī)體腸胃炎等癥狀[4]，HTS預(yù)處理可減輕染菌小鼠的腹瀉癥狀，起到抗炎作用。

圖3 小鼠體重變化情況Fig.3 Weight change in mice

表2 小鼠臨床表現(xiàn)情況Table 2 Clinical manifestations of mice

2.2.2 西洋參低極性皂苷對(duì)小鼠臟器指標(biāo)的影響

臟器系數(shù)為毒理學(xué)評(píng)價(jià)常用的指標(biāo)，數(shù)值增大表示臟器充血、肥大、水腫等異常生理狀態(tài)；數(shù)值減少表示臟器萎縮及其他退行性改變[28]。小鼠感染單核細(xì)胞增生李斯特菌后的臟器系數(shù)變化如圖4所示，空白組和HTS組小鼠肝臟系數(shù)（分別為0.0597、0.0593）同陰性組（0.0518）相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05，**）；陰性組、AGS組和青霉素組小鼠肝臟系數(shù)（分別為0.0518、0.0537、0.0475）同空白組相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05，##）?？瞻捉M、AGS組、HTS組和青霉素組小鼠的脾臟系數(shù)（分別為 0.00247、0.00417、0.00433、0.00273）同陰性組（0.00678）相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05，**）?？瞻捉M小鼠腎臟系數(shù)（0.016）同陰性組（0.0155）相比差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05，**）；HTS 組小鼠腎臟系數(shù)（0.0155）同陰性組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.1，*）；陰性組、AGS組和青霉素組小鼠腎臟系數(shù)（0.0155、0.017、0.0163）同空白組相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05，##）。

圖4 臟器系數(shù)Fig.4 Organ coefficient

2.2.3 西洋參低極性皂苷對(duì)小鼠血液中白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的影響

血液中白細(xì)胞（WBC）的數(shù)量變化可以作為炎癥發(fā)生的常規(guī)指標(biāo)，中性粒細(xì)胞（NEUT）數(shù)量作為炎癥發(fā)生的一種重要指標(biāo)[29,30]。染菌雄性小鼠血液中WBC和NEUT數(shù)量如表3所示，陰性組、AGS組、HTS組和青霉素組小鼠血液中WBC數(shù)量同空白組相比差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05，##）；陰性組、AGS組、HTS組和青霉素組小鼠血液中NEUT數(shù)量同空白組相比差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05，##）。結(jié)果表明，HTS預(yù)處理可以減少染菌小鼠血液中WBC、NEUT含量，起到減輕炎癥的作用。

表3 小鼠的血常規(guī)分析結(jié)果Table 3 Results of blood routine analysis in mice

2.2.4 西洋參低極性皂苷對(duì)小鼠肝臟的影響

現(xiàn)有研究表明，感染單核細(xì)胞增生李斯特菌雌性小鼠肝臟會(huì)出現(xiàn)顏色異常，有明顯的細(xì)菌定植、白斑等癥狀[31]。染菌雄性小鼠肝臟照片結(jié)果如圖5所示，肉眼觀察陰性組小鼠肝臟顏色異常，表面未見(jiàn)明顯的鈣化、白斑等損傷；空白組、AGS組、HTS組和青霉素組小鼠肝臟顏色質(zhì)地正常，未見(jiàn)明顯的外觀變化。單核細(xì)胞增生李斯特菌對(duì) HTS組小鼠肝臟無(wú)明顯的損傷。

圖5 肝臟照片F(xiàn)ig.5 Liver photograph

2.2.5 染菌小鼠的肝臟切片

感染單核細(xì)胞增生李斯特菌小鼠的肝臟切片如圖6所示，陰性組小鼠肝切片可見(jiàn)明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，細(xì)胞核缺失、肥大等現(xiàn)象，與空白組相比有明顯區(qū)別；與空白組相比，HTS組小鼠肝切片未見(jiàn)明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等現(xiàn)象；AGS組和青霉素組小鼠肝臟切片可見(jiàn)細(xì)胞核肥大，與空白組相比有區(qū)別。動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果同前人的研究相似，單核細(xì)胞增生李斯特菌侵入機(jī)體后，造成肝臟炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、壞死，組織水腫等病理性損害[31,32]。

圖6 肝臟切片F(xiàn)ig.6 Liver section

2.2.6 染菌小鼠肝臟中IL-1β和IFN-γ水平

IL-1β、IFN-γ是重要的炎性細(xì)胞因子，當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)炎癥反應(yīng)時(shí)，其水平會(huì)大幅度的上調(diào)[33]。IL-1β是由巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的一類細(xì)胞因子，能促進(jìn)黏附分子表達(dá)，引起炎癥介質(zhì)和炎癥蛋白釋放，進(jìn)而引起肝臟炎癥反應(yīng)和局部組織的損傷[34,35]。IFN-γ為非特異性免疫的重要組成部分。IFN-γ是由干擾素刺激基因調(diào)節(jié)釋放的一類糖蛋白，有抗病毒、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫功能等作用[36]。單核細(xì)胞增生李斯特菌進(jìn)入細(xì)胞后裂解可以激活炎性小體釋放IL-1β，引起環(huán)狀GMP-AMP合酶（cGAS）產(chǎn)生特異性的環(huán)二核苷酸（CDN）—環(huán)狀 GMP-AMP（cGAMP），激活干擾素基因蛋白刺激因子（STING），進(jìn)而增加巨噬細(xì)胞中干擾素IFN-γ的產(chǎn)生[37]。印雙紅等[38]研究表明，單核細(xì)胞增生李斯特菌可提高雌性小鼠炎性細(xì)胞因子IL-1β的水平。王建芳[39]研究表明單核細(xì)胞增生李斯特菌可提高雌性小鼠炎性細(xì)胞因子IFN-γ的水平。

染菌小鼠肝臟中炎性細(xì)胞因子的水平如圖7所示，空白組、HTS組和青霉素組小鼠肝臟中IL-1β的水平（分別約為 67.48 pg/mg、76.75 pg/mg、53.82 pg/mg）同陰性組（約為115.14 pg/mg）相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05，**）；AGS組小鼠肝臟中IL-1β的水平（約為85.09 pg/mg）同空白組相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.1）?？瞻捉M、AGS組、HTS組和青霉素組肝臟中 IFN-γ的水平（分別約為269.21 pg/mg、203.87 pg/mg、74.67 pg/mg、138.11 pg/mg）同陰性組（約為335.45 pg/mg）相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05，**）；陰性組、HTS組和青霉素組肝臟中IFN-γ的水平同空白組相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05，##）；AGS組肝臟中IFN-γ的水平同空白組相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.1，##）。結(jié)果表明，HTS預(yù)處理可增加機(jī)體的免疫力，能減輕單核細(xì)胞增生李斯特菌對(duì)雄性小鼠的肝細(xì)胞損傷，起到減少炎性細(xì)胞釋放和護(hù)肝的作用。

圖7 肝臟中IL-1β和IFN-γ的水平Fig.7 Levels of IL-1β and IFN-γ in the liver

HTS在腸道中的消化利用率較高，其富含的低極性皂苷表面糖基較少，同微生物細(xì)胞膜的親和力增強(qiáng)，易破壞細(xì)胞膜的穩(wěn)定性[40,41]，更好的保護(hù)感染單核細(xì)胞增生李斯特菌小鼠肝臟，減輕細(xì)菌對(duì)肝臟的損傷，減少炎性細(xì)胞因子釋放，起到護(hù)肝的作用。

3 結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn)，HTS對(duì)單核細(xì)胞增生李斯特菌具有一定的體外抑菌效果。盡管，單核細(xì)胞增生李斯特菌對(duì)雄性小鼠的危害較輕，但會(huì)引起肝臟損傷。與AGS相比，HTS預(yù)處理對(duì)感染單核細(xì)胞增生李斯特菌雄性小鼠具有保護(hù)作用，主要是通過(guò)降低染菌小鼠體內(nèi)炎癥細(xì)胞如WBC和中性粒細(xì)胞的分泌，減輕炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、壞死等肝組織病理形態(tài)，降低染菌小鼠炎性細(xì)胞因子的分泌水平來(lái)發(fā)揮抗炎作用。本研究為防治食源性致病提供了新的材料，也為預(yù)防李斯特菌感染提供數(shù)據(jù)和理論支持。