◎ 陳麗香，陸慧珍，郭海柔，黃柳霞

（1.廣東省食品工業(yè)公共實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 511442；2.廣東省食品工業(yè)研究所有限公司，廣東 廣州 511442；3.廣東省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站，廣東 廣州 511442）

特丁硫磷又稱特丁磷，是一種防治病蟲害農(nóng)藥，屬高效、內(nèi)吸、廣譜殺蟲劑，能防治各種經(jīng)濟(jì)作物、糧、棉的主要害蟲，用做土壤處理或拌種，持效時(shí)間長(zhǎng)。特丁硫磷在土壤中可氧化分解為特丁硫磷砜和特丁硫磷亞砜，毒性與特丁硫磷相似，但更具有流動(dòng)性和持久性[1]。

《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2019）規(guī)定蔬菜、水果等農(nóng)產(chǎn)品中特丁硫磷的最大殘留限量為0.01 mg·kg-1，特丁硫磷的殘留物以特丁硫磷及其氧類似物（砜、亞砜）之和計(jì)，以特丁硫磷表示，沒有指定或推薦的檢測(cè)方法。目前國(guó)內(nèi)檢測(cè)蔬菜水果中特丁硫磷的標(biāo)準(zhǔn)方法有NY/T 761—2008、GB 23200.8—2016、GB 23200.113—2018、GB 23200.116—2019等，均只檢測(cè)特丁硫磷或特丁硫磷和特丁硫磷砜，未涉及特丁硫磷亞砜的檢測(cè)。目前對(duì)特丁硫磷和特丁硫磷砜的檢測(cè)研究較多[2-6]，而對(duì)同時(shí)檢測(cè)特丁硫磷、特丁硫磷砜和特丁硫磷亞砜的研究較少[7]，因此有必要建立一種同時(shí)檢測(cè)定特丁硫磷、特丁硫磷砜和特丁硫磷亞砜的檢測(cè)方法。QuEChERS是一種新型農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留分析的前處理技術(shù)，具有分析快速、操作簡(jiǎn)單、耗用溶劑少等優(yōu)點(diǎn)[8]。同時(shí)測(cè)定3種化合物的方法只有液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[9-10]，本文采用QuEChERS前處理方法，使用氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜測(cè)定蔬菜水果中特丁硫磷、特丁硫磷砜和特丁硫磷亞砜的殘留量。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

蔬菜和水果為市售。

特丁硫磷，1 000 μg·mL-1，ANPEL公司；特丁硫磷砜，1 000 μg·mL-1，BePure公司；特丁硫磷亞砜，1 000 μg·mL-1，F(xiàn)irst Standard公司；環(huán)氧七氯，99.9%，AccuStandard公司；乙腈、正己烷、丙酮、乙酸乙酯均為色譜純，Honeyell公司；陶瓷均質(zhì)子、C18和PSA，美國(guó)Agilent公司；GCB，Wters公司；弗羅里硅土，上海安譜公司；無(wú)水硫酸鎂、氯化鈉、檸檬酸鈉和三水合二檸檬酸鈉，廣州化學(xué)試劑廠。

1.2 儀器與設(shè)備

GC-MS/MS氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（Agilent GC 8890，QQQ 7000D，配拉出透鏡高靈敏度離子源（EI），美國(guó)Agilent公司）、3K15高速冷凍離心機(jī)（SIGMA公司）、MS 3basic旋渦混合器（德國(guó)IKA公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別準(zhǔn)確吸取特丁硫磷、特丁硫磷砜和特丁硫磷亞砜（1 000 μg·mL-1）適量于容量瓶中，用正己烷稀釋成特丁硫磷1.00 μg·mL-1、特丁硫磷砜1.00 μg·mL-1和特丁硫磷亞砜10.0 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

準(zhǔn)確稱取10.000 mg環(huán)氧七氯99.9%，用正己烷溶解并定容至10 mL，得1 000 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

準(zhǔn)確吸取1 000 μg·mL-1環(huán)氧七氯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量，用正己烷稀釋成1.00 μg·mL-1的環(huán)氧七氯標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.3.2 樣品前處理

將蔬菜水果切成小塊，用組織搗碎機(jī)搗碎。制備好的試樣于-18 ℃以下冷凍保存，待測(cè)。

（1）提取。稱取15.00 g試樣，置于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈，1個(gè)陶瓷均質(zhì)子、4 g MgSO4、1 g NaCL、1 g檸檬酸鈉和0.5 g三水合二檸檬酸二鈉，渦旋振蕩1 min，8 500 r·min-1在5 ℃低溫離心5 min，上清液待凈化。

（2）凈化。所有上清液轉(zhuǎn)移到裝有150 mg C18、150 mg PSA、100 mg GCB和900 mg無(wú)水 硫 酸鎂的15 mL離心管中，渦旋1 min，8 500 r·min-1在5 ℃低溫離心5 min，移取10 mL上清液至10 mL比色管中，40 ℃水浴氮吹至近干，加入900 μL正己烷和100 μL環(huán)氧七氯工作液，過(guò)0.22 μm尼龍針頭式過(guò)濾膜，上機(jī)檢測(cè)。

1.3.3 儀器分析條件

（1）色譜條件。色譜柱：毛細(xì)管氣相色譜柱DB-1701（30 m×0.25 mm×0.25 μm），升溫程序：50 ℃，保持1 min，以30 ℃·min-1升至180 ℃，再以5 ℃·min-1升至240 ℃，再以40 ℃·min-1升至280 ℃，保持5 min；進(jìn)樣口溫度：280 ℃；載氣（He）流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣模式：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量：2.0 μL。

（2）質(zhì)譜條件。電子轟擊離子源（EI）；電子能量：70 eV；離子源溫度：230 ℃；四極桿溫度：150 ℃；傳輸線溫度：280 ℃；采集模式：MRM模式；溶劑延遲：5 min。

上述條件下，特丁硫磷及其氧類似物（砜、亞砜）和環(huán)氧七氯的保留時(shí)間、定量及定性離子對(duì)、碰撞電壓如表1所示。

表1 特丁硫磷及其氧類似物（砜、亞砜）和環(huán)氧七氯的質(zhì)譜參數(shù)表

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

先采用一級(jí)質(zhì)譜全掃描的模式對(duì)特丁硫磷及其氧類似物（砜、亞砜）和環(huán)氧七氯進(jìn)行分析，根據(jù)選擇豐度高、干擾小的原則確定母離子，再采用二級(jí)質(zhì)譜產(chǎn)物離子的模式確定子離子，最后采用MRM的采集模式對(duì)化合物的碰撞電壓進(jìn)行優(yōu)化。

在“1.3.3”所述條件下，對(duì)0.0100 μg·mL-1特丁硫磷、0.010 0 μg·mL-1特丁硫磷 砜、0.100 μg·mL-1特丁硫磷亞砜和0.100 μg·mL-1環(huán)氧七氯的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析，得到總離子流色譜圖，見圖1。

圖1 混合基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流圖

2.2 提取液的選擇

選用3種農(nóng)殘常用提取溶劑乙腈、乙酸乙酯、丙酮作為提取溶劑進(jìn)行比對(duì)，在空白樣品中加入質(zhì)量濃度為0.005 mg·kg-1的特丁硫磷和特丁硫磷砜和0.05 mg·kg-1的特丁硫磷亞砜，除加入提取試劑不同，其他實(shí)驗(yàn)步驟按照1.3.2操作，結(jié)果見圖2?？梢钥闯?，丙酮提取的3種化合物的回收率均高于120%，乙酸乙酯提取的特丁硫磷和特丁硫磷砜的回收率接近100%，而特丁硫磷亞砜的回收率略低，乙腈提取的3種化合物的回收率在100%～105%，故選擇乙腈作為提取液。

圖2 不同提取溶劑對(duì)3種化合物回收率的影響圖

2.3 凈化條件的優(yōu)化

色素、有機(jī)酸和糖類是蔬菜和水果的主要基質(zhì)干擾，容易影響定量的準(zhǔn)確性。本實(shí)驗(yàn)選擇3種不同的凈化管進(jìn)行比較。A：200 mg弗羅里硅土、100 mg GCB、900 mg無(wú)水硫酸鎂；B：150 mg C18、150 mg PSA、900 mg無(wú)水硫酸鎂；C：150 mg C18、150 mg PSA、100 mg GCB、900 mg無(wú)水硫酸鎂。

對(duì)空白樣品進(jìn)行添加回收，特丁硫磷和特丁硫磷砜添加水平為0.005 mg·kg-1，特丁硫磷亞砜為0.05 mg·kg-1，根據(jù)1.3.2的提取步驟進(jìn)行同步提取，提取液分別用A、B、C 3種凈化管進(jìn)行凈化，樣品回收率見圖3。結(jié)果表明，A和B凈化管特丁硫磷砜的回收率偏高，而特丁硫磷亞砜的回收率略低，而C凈化管3種化合物的回收率在98%～103%，故選擇C凈化管進(jìn)行凈化。

圖3 不同凈化方式對(duì)3種化合物回收率的影響圖

2.4 基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)效應(yīng)（ME）是指樣品中除目標(biāo)分析物以外的其他成分對(duì)待測(cè)物測(cè)定值的影響，響應(yīng)信號(hào)受到增強(qiáng)或抑制的現(xiàn)象?；|(zhì)效應(yīng)會(huì)影響結(jié)果的準(zhǔn)確度。計(jì)算見式（1）。

當(dāng)|ME|＜20%，視為弱基質(zhì)，無(wú)需采取補(bǔ)償措施；當(dāng)20%≤|ME|≤50%，為中等基質(zhì)，當(dāng)|ME|＞50%，為強(qiáng)基質(zhì)，必須采取措施補(bǔ)償基質(zhì)效應(yīng)。

本文按1.3.2節(jié)進(jìn)行前處理，配制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，以正己烷配制同濃度的線溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線，按式（1）計(jì)算ME結(jié)果見表2。結(jié)果表明，3種化合物在4種基質(zhì)中，全部為中等基質(zhì)或強(qiáng)基質(zhì)，需要采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行定量校準(zhǔn)以補(bǔ)償基質(zhì)效應(yīng)，確保定量結(jié)果準(zhǔn)確。

表2 特丁硫磷及其氧類似物（砜、亞砜）在4種基質(zhì)中的基質(zhì)效應(yīng)表（單位：%）

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限和定量限

分別準(zhǔn)確吸取5 μL、10 μL、20 μL、50 μL、100 μL和200 μL特丁硫磷、特丁硫磷砜和特丁硫磷亞砜混合標(biāo)準(zhǔn)工作液于6個(gè)氮?dú)獯蹈傻目瞻谆|(zhì)中，加入100 μL環(huán)氧七氯標(biāo)準(zhǔn)工作液，正己烷定容至1.00 mL，配制成系列基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在選定的儀器條件下進(jìn)行分析，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

由表3知，特丁硫磷、特丁硫磷砜和特丁硫磷亞砜均呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.99。根據(jù)大于3倍和10倍定量子對(duì)信噪比確定方法的檢出限（LOD）和定量限（LOQ），得出特丁硫磷和特丁硫磷砜的檢出限為0.000 5 mg·kg-1，定量限為0.001 mg·kg-1，特丁硫磷亞砜的檢出限為0.005 0mg·kg-1，定量限為0.010 mg·kg-1。本方法靈敏度高可以滿足蔬菜和水果中特丁硫磷、特丁硫磷砜和特丁硫磷亞砜檢測(cè)要求。

表3 3種化合物的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限表

2.6 準(zhǔn)確度和精密度

對(duì)不含特丁硫磷及其氧類似物（砜、亞砜）的芹菜、茄子、蘋果和橙子4種空白試樣進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，設(shè)定特丁硫磷和特丁硫磷砜的添加水平為0.001 mg·kg-1、0.005 mg·kg-1、0.010 mg·kg-1，特丁硫磷亞砜的添加水平為0.01 mg·kg-1、0.05 mg·kg-1、0.10 mg·kg-1，考察方法的準(zhǔn)確度和精密度，結(jié)果見表4。

表4 3種化合物在蔬菜和水果中的添加回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表（n=6）

結(jié)果表明，特丁硫磷及其氧類似物（砜、亞砜）的回收率為80.09%～108.43%，RSD為1.82%～8.22%，方法準(zhǔn)確度和精密度良好，符合GB/T 27404—2008附錄F中對(duì)檢測(cè)方法確認(rèn)的要求。

3 結(jié)論

本文采用QuEChERS前處理方法，氣相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定蔬菜和水果中特丁硫磷、特丁硫磷砜和特丁硫磷亞砜的殘留量。該方法線性范圍廣，回收率和精密度良好，具有操作簡(jiǎn)單、靈敏度高和定性準(zhǔn)確的特點(diǎn)，可同時(shí)測(cè)定蔬菜和水果中特丁硫磷、特丁硫磷砜和特丁硫磷亞砜的殘留量。