李洪剛，陳健，向鵬宇

（重慶市涪陵食品藥品檢驗(yàn)所，重慶 408000）

0 引言

復(fù)方木香小檗堿片是由鹽酸小檗堿、木香和吳茱萸3味中藥制成的，用于治療腸道感染、腹瀉。作為方中主藥的木香未作定量要求，不能有效的控制該制劑的質(zhì)量。通過(guò)實(shí)驗(yàn)，建立該制劑的含量測(cè)定方法[1-2]。 該方法精密度好，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于于復(fù)方木香小檗堿片的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（安捷倫1260），Sartorius-ME235S電子天平；木香烴內(nèi)酯（對(duì)照品由中檢院提供，批號(hào)111524-201911，含量99.9%），去氫木香內(nèi)酯（對(duì)照品由中檢院提供，批號(hào)111525-201912，含量99.8%）；復(fù)方木香小檗堿片（樣品由遠(yuǎn)大醫(yī)藥公司提供，批號(hào)分別為2020801，2020901，2020904）。甲醇為進(jìn)口HPLC級(jí)別，水為屈臣氏蒸餾水，其余試劑為優(yōu)級(jí)純級(jí)別。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件。Thermo-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）作為色譜柱；以水-甲醇（25:75）作為流動(dòng)相；流動(dòng)相為1.0 mL/min；選取225 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)；柱溫設(shè)置為35℃，進(jìn)樣量：10μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 精密稱取對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含木香烴內(nèi)酯對(duì)照品和去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品20 ng的溶液，即得對(duì)照品溶液。

2.2.2 取本品20片，研細(xì)，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，超聲處理（功率300 W，頻率45 kHz）30 min，放冷，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液[3]。

2.2.3 按復(fù)方木香小檗堿片劑制備工藝，取除木香外的其余藥味，按照工藝要求制成不含木香的復(fù)方木香小檗堿片，按照2.2.2項(xiàng)下的操作方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察。專屬性考察，取2.2項(xiàng)下3種溶液，依照2.1色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果供試品溶液與對(duì)照品溶液在相同時(shí)間內(nèi)有色譜峰出現(xiàn)，而陰性對(duì)照品溶液在此處未出現(xiàn)色譜峰，表明該方法專屬性良好，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.3.1 線性關(guān)系考察：取2.2項(xiàng)下的母液對(duì)照品溶液，分別精密量取1，5，10，15，20 mL，分別定容于100量瓶中，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：木香烴內(nèi)酯對(duì)照品Y=14561X+1.4558，r=0.9992；質(zhì)量濃度在10.13~200.26μg?mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品Y=18911X+43.213，r=0.9991，進(jìn)樣量在10.36~200.72μg?mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.2 精密度考察：取混合對(duì)照品溶液，連續(xù)測(cè)定6次，結(jié)果木香烴內(nèi)酯的峰面積的RSD為0.24%（n=6），去氫木香內(nèi)酯的峰面積的RSD為0.36%（n=6）。

2.3.3 重復(fù)性考察：取同一批號(hào)樣品（批號(hào)為20200904）6份，按2.2.2項(xiàng)下要求進(jìn)行制樣，分別測(cè)定，結(jié)果木香烴內(nèi)酯的峰面積的RSD為0.32%（n=6），去氫木香內(nèi)酯的峰面積的RSD為0.26%（n=6）[4]。

2.3.4 穩(wěn)定性考察：取同一批號(hào)樣品（批號(hào)為20200904）溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣10μL，考察其穩(wěn)定性，結(jié)果木香烴內(nèi)酯的峰面積的RSD為0.36%（n=6），去氫木香內(nèi)酯的峰面積的RSD為0.37%（n=6）。

2.3.5 加樣回收試驗(yàn)：精密稱取樣品（批號(hào)20200904）6份，精密加入2.2.1的對(duì)照品適量，按2.2.2項(xiàng)下要求制樣并依法測(cè)定，回收率結(jié)果見表1。

表1 加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4 樣品測(cè)定。取3批復(fù)方木香小檗堿片樣品，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，進(jìn)樣量10μL，記錄峰面積，計(jì)算各供試品中木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯的含量，結(jié)果分別為：1.0088和0.4285 mg/g；1.1214和0.4322 mg/g；1.0127和0.4312 mg/g。

3 討論

木香烴內(nèi)酯對(duì)照品和去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品易溶于甲醇、乙醇等有機(jī)溶劑，因此在提取分離條件的摸索過(guò)程中，比較了不同超聲時(shí)間對(duì)成分提取率的影響，分別選取了了超聲 15、30、45、60 min后進(jìn)行含量考察，通過(guò)考察，在超聲30 min后，指標(biāo)成分就能充分提取[5-6]。