梁桂洪,黃和濤,曾令烽,楊 園,趙金龍,潘建科,楊偉毅,陳紅云,羅明輝,韓燕鴻,劉 軍*
1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院(廣東省中醫(yī)院)骨科,廣東 廣州 510120
2.廣東省中醫(yī)藥科學(xué)院 骨與關(guān)節(jié)退變及損傷研究團(tuán)隊(duì),廣東 廣州 510120
關(guān)節(jié)軟骨因缺乏血管、神經(jīng)和淋巴液的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng),導(dǎo)致其自我修復(fù)能力受到限制,損傷后難以再生,從而引起骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)等退行性疾病,嚴(yán)重影響中老年人的關(guān)節(jié)活動(dòng)[1]。目前關(guān)于關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)的方法主要有自體軟骨移植、骨軟骨移植、干細(xì)胞治療和基因治療等[2]。然而,提取自體軟骨細(xì)胞會(huì)對(duì)供體部位造成一定的損傷,移植的外源性軟骨細(xì)胞遷移能力弱,不能有效地聚集到損傷部位,且移植后分泌細(xì)胞外基質(zhì)的功能明顯減弱,不能與軟骨下板很好地融合,從而降低自體軟骨細(xì)胞移植治療效果[3]。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)是最常用的間充質(zhì)干細(xì)胞(marrow stromal cells,MSCs),由于其具有易獲得、多向分化和定向遷移的特性,在骨和軟骨修復(fù)中得到廣泛的研究和應(yīng)用[4-5]。當(dāng)機(jī)體組織出現(xiàn)損傷后,BMSCs 因具有較強(qiáng)的遷移能力,可以遷移至損傷處并對(duì)損傷組織進(jìn)行修復(fù)[6],因此增強(qiáng)BMSCs 的遷移能力有助于促進(jìn)損傷后的軟骨修復(fù)。
Hippo-Yes 相關(guān)蛋白(Yes-associated protein,YAP)信號(hào)通路是調(diào)控MSCs 增殖和分化的重要通路[7]。BMSCs 的增殖、分化、遷移等生物學(xué)功能均受Hippo-YAP 信號(hào)通路的影響[8]。抑制Hippo 信號(hào)通路能夠提高BMSCs 在體外的增殖和遷移能力[9]。YAP 作為Hippo-YAP 信號(hào)通路中的效應(yīng)基因,具有調(diào)節(jié)BMSCs 向成骨和成脂方向分化的作用[10]。本課題組前期研究表明,龍鱉膠囊具有保護(hù)和修復(fù)OA 關(guān)節(jié)軟骨組織的作用[11],且龍鱉膠囊聯(lián)合BMSCs 治療OA 的效果更為顯著[12];龍鱉膠囊能夠促進(jìn)BMSCs 增殖[13]。本研究通過(guò)考察龍鱉膠囊對(duì)BMSCs 中Hippo-YAP 信號(hào)通路和遷移功能的影響,為后續(xù)探究龍鱉膠囊通過(guò)促進(jìn)BMSCs 歸巢和成軟骨分化修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
SPF 級(jí)SD 大鼠10 只,雌雄各半,1.5月齡,體質(zhì)量(200±10)g,購(gòu)自南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,動(dòng)物許可證號(hào)SYXK(粵)-2018-0094。動(dòng)物飼養(yǎng)于廣東省中醫(yī)藥科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF 級(jí)環(huán)境中。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)廣東省中醫(yī)院動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(批準(zhǔn)號(hào)2020050)。
龍鱉膠囊(批號(hào)200701,0.5 g/粒)主要由蘄蛇、全蝎、丹參、巴戟天、仙茅、土鱉蟲(chóng)等補(bǔ)腎活血的藥物組成,由廣東省中醫(yī)院藥劑科生產(chǎn)[11];SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞完全培養(yǎng)基(批號(hào)RASMX-90011)、SD 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基(批號(hào)RASMX-90021)、SD 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基(批號(hào)RASMX-90031)、含0.04%乙二胺四乙酸(EDTA)的0.25%胰酶(批號(hào)TEDTA-10001)購(gòu)自賽業(yè)(蘇州)生物科技有限公司;青-鏈霉素雙抗(批號(hào)15140-122)、不含 EDTA 的 0.25%胰酶(批號(hào)15050065)、澳洲胎牛血清(批號(hào)10099141)、DMEM低糖培養(yǎng)基(批號(hào)C11885500BT)、PBS 緩沖液(批號(hào)C10010500BT)購(gòu)自美國(guó)Gbico 公司;二甲基亞砜(DMSO,批號(hào)D2650)購(gòu)自美國(guó)Sigma 公司;YAP 抑制劑維替泊芬(Verteporfin,批號(hào)S1786)購(gòu)自美國(guó)Selleck 公司;Transwell 小室(8 μm,批號(hào)353097)購(gòu)自美國(guó)BD 公司;BCA 蛋白定量試劑盒(批號(hào)K300)購(gòu)自上海博彩生物科技有限公司;SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒(批號(hào)P0012A)、結(jié)晶紫染色液(批號(hào)C0121)購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司;ECL 化學(xué)發(fā)光液(批號(hào)WBKLS0100)購(gòu)自美國(guó)Millipore 公司;大型腫瘤抑制因子2(large tumor suppressor homolog 2,LATS2)抗體(批號(hào)13646)、YAP 抗體(批號(hào)14074)、β-actin 抗體(批號(hào)3700)、山羊抗兔抗體、山羊抗小鼠抗體購(gòu)自美國(guó)CST 公司;結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growth factor,CTGF)抗體(批號(hào)ab6992)購(gòu)自英國(guó)Abcam 公司;干細(xì)胞表面標(biāo)記物FITC 抗兔CD45抗體(批號(hào)202205)和同型陰性對(duì)照(批號(hào)400107)、PerCP/Cyanine5.5 抗兔CD90/抗小鼠CD90.1 抗體(批號(hào)202515)和同型陰性對(duì)照(批號(hào)400149)、Alexa Fluor 647 抗兔CD44H 抗體(批號(hào)203908)和同型陰性對(duì)照(批號(hào)400234)、PE 抗小鼠/兔CD29抗體(批號(hào)102207)和同型陰性對(duì)照(批號(hào)400907)購(gòu)自美國(guó)BioLegend 公司。
311 型CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱(美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司);HR40-IIA2 型生物安全柜(海爾生物醫(yī)療股份有限公司);IC-1000 型Count Star 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀(上海睿鈺生物科技有限公司);5424R型高速冷凍離心機(jī)(德國(guó) Eppendorf 公司);Advantage A10 型超純水儀(美國(guó)Millipore 公司);TI2-E 型倒置熒光顯微鏡(日本Nikon 公司);ChemiDoc Touch 型高靈敏度化學(xué)發(fā)光成像儀(美國(guó)Bio-Rad 公司);Novo Quanteon 型流式細(xì)胞儀(安捷倫生物);M1000 Pro 型多功能酶標(biāo)儀(瑞士Tecan公司)。
將龍鱉膠囊內(nèi)的藥粉溶于純水,配制成質(zhì)量濃度為0.125 g/mL 的溶液。每日于9: 00、15: 00 時(shí),SD 大鼠ig 龍鱉膠囊(0.625 g/kg),連續(xù)7 d。最后1 次給藥1 h 后,大鼠ip 10%水合氯醛(3.5 mL/kg)麻醉,腹主動(dòng)脈采血,3000 r/min 離心10 min,收集含藥血清,于56 ℃水浴中孵育30 min,經(jīng)0.22 μm過(guò)濾器濾過(guò)后分裝,于 ?80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>
采用全骨髓細(xì)胞培養(yǎng)法提取和培養(yǎng)大鼠BMSCs。大鼠ip 10%水合氯醛(7 mL/kg)處死,于75%乙醇中浸泡10 min,無(wú)菌條件下取出股骨、脛骨和肱骨,剔除肌肉組織,于含1%雙抗的PBS緩沖液中浸泡10 min;將長(zhǎng)骨轉(zhuǎn)移至超凈工作臺(tái),用含1%雙抗的PBS 緩沖液沖洗2 次,置于10 cm培養(yǎng)皿中,剪斷長(zhǎng)骨的干骺端,加入10 mL 含1%雙抗的DMEM 低糖培養(yǎng)基,用10 mL 注射器抽吸培養(yǎng)基沖洗骨髓,收集骨髓懸液,1500 r/min 離心8 min,棄上清;加入7 mL SD 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞完全培養(yǎng)基,混勻后將細(xì)胞懸液接種至25 cm2培養(yǎng)瓶中,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h 后半量換液,再培養(yǎng)48 h 后全量換液,當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到90%以上,進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
取第3 代BMSCs,胰酶消化后制成單細(xì)胞懸液,離心后棄上清,用預(yù)冷的PBS 洗滌2 次,調(diào)整細(xì)胞密度為1×107/mL。各取100 μL 細(xì)胞懸液,分別加入CD29、CD44、CD45、CD90 標(biāo)記物抗體,同時(shí)每份樣品設(shè)立同型陰性對(duì)照,混勻后于冰上避光孵育30 min,采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面抗原的表達(dá)。
BMSCs 胰酶消化后計(jì)數(shù),將1×105個(gè)細(xì)胞接種至包被0.1%明膠的6 孔板中,每孔加入2 mL 完全培養(yǎng)基,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到60%~70%,將培養(yǎng)基小心地吸走,按成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基試劑盒說(shuō)明書,每孔中加入2 mL OriCell大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基,每3 天更換1 次新鮮的成骨誘導(dǎo)液,誘導(dǎo)4 周后吸去誘導(dǎo)液,PBS 沖洗2 次;每孔加入2 mL 4%多聚甲醛固定30 min,PBS 沖洗2 次;每孔加入1 mL茜素紅染液染3 min,吸去染液,PBS 沖洗2~3 次,將培養(yǎng)板置于倒置顯微鏡鏡下,觀察并拍照染色的效果。
BMSCs 胰酶消化后計(jì)數(shù),將2×105個(gè)細(xì)胞接種至6 孔板中,按成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基試劑盒說(shuō)明書對(duì)BMSCs 進(jìn)行誘導(dǎo)處理,將完全培養(yǎng)基吸走后,每孔加入2 mL OriCell 大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基A 液(由基礎(chǔ)培養(yǎng)基175 mL、胎牛血清20 mL、雙抗2 mL、谷氨酰胺2 mL、胰島素400 μL、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤200 μL、羅格列酮200 μL、地塞米松200 μL 組成),誘導(dǎo)3 d 后,吸走A 液,加入2 mL B 液(由基礎(chǔ)培養(yǎng)基175 mL、胎牛血清20 mL、雙抗2 mL、谷氨酰胺2 mL、胰島素400 μL 組成);24 h 后,吸走B 液,換回A液進(jìn)行誘導(dǎo);A 液和B 液交替作用6 次后,繼續(xù)用B 液維持培養(yǎng)5 d 直到脂滴變得大和圓;多聚甲醛固定,進(jìn)行油紅O 染色,于顯微鏡下觀察成脂染色效果。
將BMSCs 以1×105/孔接種至6 孔板中,培養(yǎng)至細(xì)胞鋪滿孔后,在鋪滿細(xì)胞的六孔板底部中間采用1 mL 無(wú)菌槍頭劃1 條直線,用PBS 洗去劃痕中間漂浮的細(xì)胞,保證劃痕區(qū)域無(wú)細(xì)胞存在。設(shè)置對(duì)照組,Verteporfin(2、5 μmol/L)組,5%含藥血清組,5%含藥血清+Verteporfin(2 μmol/L)組和5%含藥血清+Verteporfin(5 μmol/L)組。各給藥組分別加入相應(yīng)藥物,對(duì)照組加入DMSO,隨即在倒置顯微鏡下觀察并拍照劃痕的情況,培養(yǎng)24 h 后在顯微鏡下觀察并拍照劃痕愈合的情況。
按“2.6”項(xiàng)下方法進(jìn)行分組,Transwell 小室中加入100 μL 基礎(chǔ)培養(yǎng)基濕潤(rùn)小室,24 孔板的下層分別加入 600 μL 含有相應(yīng)藥物的培養(yǎng)基。BMSCs 消化離心,棄上清,用無(wú)血清培養(yǎng)基重懸,以2×105/mL 接種于小室上層,培養(yǎng)24 h 后,取出小室,PBS 清洗2 次;用甲醇固定30 min,PBS 清洗2 次;結(jié)晶紫染色5 min,PBS 清洗,用棉簽擦去小室上層未能穿過(guò)薄膜的細(xì)胞,于顯微鏡下觀察并拍照遷移后的細(xì)胞。
BMSCs 胰酶消化后計(jì)數(shù),將2×105個(gè)細(xì)胞接種至6 孔板中,培養(yǎng)12 h。設(shè)置對(duì)照組和含藥血清(2.5%、5.0%)組,各給藥組加入相應(yīng)藥物,對(duì)照組加入不含藥物的培養(yǎng)基,培養(yǎng)24 h,收集細(xì)胞,加入細(xì)胞裂解液,離心取上清液,采用BCA 蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白質(zhì)量濃度。蛋白樣品經(jīng)10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳,轉(zhuǎn)至PVDF膜,加入5%脫脂牛奶室溫封閉1 h,分別加入LATS2抗體(1∶1000)、YAP 抗體(1∶1000)、CTGF 抗體(1∶1000)和β-actin 抗體(1∶2000),4 ℃孵育過(guò)夜;TBST 洗滌3 次,分別加入山羊抗兔抗體(1∶1000)、山羊抗小鼠抗體(1∶2000),室溫孵育1 h,TBST 洗滌3 次,加入ECL 化學(xué)發(fā)光液顯影。
采用SPSS 21.0 軟件分析數(shù)據(jù),計(jì)量資料以x s± 表示,采用t檢驗(yàn)或單因素方差分析。
如圖1-A 所示,BMSCs 分離后正常貼壁生長(zhǎng),鏡下可見(jiàn)細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形。如圖1-B 所示,經(jīng)成骨誘導(dǎo)茜素紅染色后,可見(jiàn)大量被染成紅色的礦化結(jié)節(jié)。如圖1-C 所示,經(jīng)成脂誘導(dǎo)油紅-O 染色后,可見(jiàn)大量被染成橘紅色的脂滴。如圖1-D~G 所示,表達(dá)CD29 的陽(yáng)性率為99.68%,表達(dá)CD44 的陽(yáng)性率為99.03%,表達(dá)CD45 的陽(yáng)性率為0.14%,CD90 的陽(yáng)性率為95.38%,符合BMSCs 的特征。以上結(jié)果表明提取的細(xì)胞為BMSCs,可以確保后續(xù)研究中細(xì)胞來(lái)源的準(zhǔn)確性。
圖1 大鼠原代BMSCs 的形態(tài) (A)、礦化結(jié)節(jié)形成 (B)、脂滴形成 (C) 以及CD29 (D)、CD44 (E)、CD45 (F) 和CD90 (G) 表面標(biāo)記物表達(dá)情況Fig.1 Morphology (A) of primary rat BMSCs, mineralized nodule formation (B), lipid droplet formation (C) and expressions of surface markers of CD29 (D), CD44 (E), CD45 (F) and CD90 (G)
低表達(dá)LATS1 抑制Hippo 信號(hào)通路可以促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移[8],YAP 作為Hippo-YAP 信號(hào)通路中的效應(yīng)基因,可能是調(diào)控BMSCs 遷移的重要蛋白。如圖2 所示,與對(duì)照組比較,YAP 抑制劑Verteporfin 顯著抑制BMSCs 遷移(P<0.01、0.001),5%含藥血清顯著促進(jìn)BMSCs 遷移(P<0.05);與等劑量的Verteporfin 組比較,5%含藥血清+Verteporfin組BMSCs 遷移率顯著升高(P<0.01、0.001)。
圖2 Verteporfin 和龍鱉膠囊含藥血清對(duì)BMCSs 水平遷移能力的影響Fig.2 Effect of Verteporfin and Longbie Capsules containing serum on horizontal migration of BMCSs
如圖3 所示,與對(duì)照組比較,Verteporfin 顯著 抑制BMSCs 遷移(P<0.05),5%含藥血清顯著促進(jìn)BMSCs 遷移(P<0.05);與等劑量的Verteporfin組比較,5%含藥血清+Verteporfin 組BMSCs 遷移數(shù)顯著升高(P<0.01)。
圖3 Verteporfin 和龍鱉膠囊含藥血清對(duì)BMCSs 垂直遷移能力的影響Fig.3 Effect of Verteporfin and Longbie Capsules containing serum on vertical migration of BMCSs
如圖4 所示,與對(duì)照組比較,含藥血清(2.5%、5.0%)組細(xì)胞LATS2 蛋白表達(dá)水平顯著降低(P< 0.05),YAP、CTGF 蛋白表達(dá)水平均顯著升高(P<0.01),表明龍鱉膠囊具有調(diào)節(jié)Hippo-YAP 信號(hào)通路的作用。
圖4 Verteporfin 和龍鱉膠囊含藥血清對(duì)BMCSs 中LATS2、YAP 和CTGF 蛋白表達(dá)的影響Fig.4 Effect of Verteporfin and Longbie Capsules containing serum on expressions of LATS2, YAP and CTGF in BMCSs
關(guān)節(jié)軟骨損傷是發(fā)生OA 等關(guān)節(jié)退行性慢性疾病的主要病理因素,因關(guān)節(jié)軟骨自愈能力較差,受損后無(wú)法完成自行修復(fù),最終引起關(guān)節(jié)功能性障礙,嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[14]。傳統(tǒng)的關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)方法不能形成類似于天然透明軟骨組織的結(jié)構(gòu)和生物力學(xué)性能,自體軟骨細(xì)胞移植技術(shù)雖然可以生成生物力學(xué)性能良好的透明軟骨樣組織,改善患者癥狀和恢復(fù)運(yùn)動(dòng)功能[15],但存在供體部位損傷、分離的軟骨去分化等問(wèn)題[16]。BMSCs 移植在關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)治療中備受關(guān)注,其在特定條件下可以分化為軟骨細(xì)胞,且移植后能夠與軟骨下骨板融合,是修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨的理想細(xì)胞[17]。BMSCs 同樣具有較強(qiáng)的遷移和歸巢能力,當(dāng)機(jī)體組織出現(xiàn)損傷后,MSCs被損傷部位所召喚后復(fù)蘇,定向遷移至損傷處并進(jìn)行多向分化,從而對(duì)損傷細(xì)胞和組織進(jìn)行修補(bǔ)[6]。遷移及歸巢能力有助于BMSCs 成功定植于損傷部位,因此促進(jìn)BMSCs 向受損的組織定向遷移是其發(fā)揮軟骨修復(fù)作用的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。本研究通過(guò)全骨髓貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)大鼠BMSCs,利用成骨、成脂分化和細(xì)胞表面標(biāo)記物等方法鑒定細(xì)胞,結(jié)果表明提取的細(xì)胞分別被成功誘導(dǎo)出礦化結(jié)節(jié)和脂肪滴,且細(xì)胞表面標(biāo)記物CD29、CD44 和CD90 為陽(yáng)性表達(dá),CD45 為陰性表達(dá),符合BMSCs 的表型。
Hippo-YAP 信號(hào)通路主要由核心分子LATS1/2和哺乳動(dòng)物不育系20 樣激酶1/2(mammalian sterile 20-like kinase1/2,MST1/2)、效應(yīng)分子YAP 以及轉(zhuǎn)錄共刺激因子(transcriptional co-activator with PDZ-binding motif,TAZ)組成,是調(diào)控組織、細(xì)胞分化和增殖的重要通路,其多種配體、受體、轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子、激酶以及轉(zhuǎn)錄因子在MSCs 中均有表達(dá)[8]。通過(guò)調(diào)控Hippo-YAP 信號(hào)通路可能會(huì)影響B(tài)MSCs 的增殖、分化、遷移等生物學(xué)功能[9],從而調(diào)控成軟骨分化的功能。通過(guò)敲低LATS1 可以抑制Hippo 信號(hào)通路,降低YAP 磷酸活性,增強(qiáng)YAP轉(zhuǎn)錄活性,進(jìn)而提高小鼠BMSCs 在體外的增殖和遷移能力[10]。YAP 作為Hippo-YAP 信號(hào)通路中的效應(yīng)基因,其活性對(duì)BMSCs 分化作用尤為重要。在YAP 缺陷的 BMSCs 中,細(xì)胞核 β-連環(huán)蛋白(β-catenin)表達(dá)水平明顯降低,Wnt/β-catenin 信號(hào)通路活性減弱,BMSCs 成骨分化功能受限[18];YAP也是人臍帶MSCs 成脂、成骨分化的關(guān)鍵調(diào)控因子,通過(guò)上調(diào)YAP,可以誘導(dǎo)臍帶MSCs 向成骨細(xì)胞的分化[19],表明YAP 是BMSCs 成骨分化重要的調(diào)節(jié)基因。但YAP 對(duì)BMSCs 遷移的作用尚不明確,因此,本研究考察了YAP 抑制劑Verteporfin 對(duì)BMSCs遷移的影響,結(jié)果表明Verteporfin 能夠抑制BMSCs遷移。
補(bǔ)腎活血中藥能夠有效緩解OA 患者疼痛和改善關(guān)節(jié)功能[20-21]。龍鱉膠囊以補(bǔ)腎活血為治療原則,對(duì)OA 具有較好的療效[22];龍鱉膠囊能夠修復(fù)OA大鼠的關(guān)節(jié)軟骨[23],促進(jìn)BMSCs 增殖[13],且與BMSCs 聯(lián)用對(duì)OA 的治療效果更為顯著[12]。因此,龍鱉膠囊可能通過(guò)調(diào)控BMSCs 遷移從而發(fā)揮促進(jìn)關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)的作用。本研究結(jié)果顯示,龍鱉膠囊含藥血清具有促進(jìn)BMSCs 遷移的作用,與等劑量的Verteporfin 比較,龍鱉膠囊含藥血清+Verteporfin顯著促進(jìn)細(xì)胞遷移,表明龍鱉膠囊含藥血清能夠阻斷Verteporfin 抑制的BMSCs 遷移;與對(duì)照組比較,龍鱉膠囊含藥血清顯著抑制LATS2 蛋白表達(dá)水平,上調(diào)YAP 和CTGF 蛋白表達(dá)水平。
綜上,YAP 抑制劑Verteporfin 具有抑制BMSCs遷移的功能,龍鱉膠囊含藥血清能夠阻斷這一過(guò)程,從而起到增強(qiáng)BMSCs 遷移能力的作用,其作用機(jī)制可能與調(diào)控Hippo-YAP 信號(hào)通路相關(guān)。細(xì)胞遷移功能與BMSCs 歸巢、分化及其組織修復(fù)能力密切相關(guān),本課題組后續(xù)將研究龍鱉膠囊調(diào)控BMSCs成軟骨分化的作用及機(jī)制,為探索補(bǔ)腎活血中藥修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨提供新的研究方向和思路。
利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突