王雅卿 姚美辰

為患者輸注去除白細(xì)胞的紅細(xì)胞制品,是目前能夠有效降低或者防止一些輸血不良反應(yīng)及輸血相關(guān)性疾病傳染的一項(xiàng)技術(shù),這項(xiàng)技術(shù)能夠成功應(yīng)用于臨床得益于一次性使用白細(xì)胞過(guò)濾器的誕生［1］。由于在多種去除血液中白細(xì)胞的方法中,去白細(xì)胞濾器過(guò)濾法是最有效、最便捷的［2］,因此適用于血站的一次性白細(xì)胞濾器現(xiàn)已得到了廣泛的應(yīng)用。一次性白細(xì)胞濾器通常分為隔夜過(guò)濾型和即采即濾型兩種,前者適用于采血8 h 以后進(jìn)行過(guò)濾,冷藏保存的時(shí)間比較長(zhǎng),只能適用于制備普通冰凍血漿；后者則應(yīng)用在采血2～8 h內(nèi)的過(guò)濾分離,要求當(dāng)天過(guò)濾,適用于新鮮冰凍血漿的制備［3］。目前相關(guān)報(bào)道中大家均比較關(guān)注白細(xì)胞過(guò)濾情況［4］,但過(guò)濾也可能對(duì)其它血液成分產(chǎn)生不同程度的影響,其中紅細(xì)胞的回收率和血漿中的FHb 濃度也會(huì)對(duì)輸注紅細(xì)胞懸液的效果產(chǎn)生不同程度的影響。而全血經(jīng)過(guò)濾后,血漿被分離制成新鮮漿等血漿制品,其中新鮮漿制品中的FIB 和FⅧ的活性對(duì)臨床患者輸注后療效產(chǎn)生決定性影響,而這些凝血因子也會(huì)受到外源性生物過(guò)濾材料的影響,對(duì)血漿中凝血因子的生物活性和血漿蛋白的含量產(chǎn)生一定程度的影響。因此為了解 T-200 型一次性使用白細(xì)胞過(guò)濾器血袋所采用的去白細(xì)胞濾器對(duì)相關(guān)血液產(chǎn)品質(zhì)量的影響,作者對(duì)其去除白細(xì)胞效果、FHb 濃度、FIB 和FⅧ的活性等相關(guān)質(zhì)量指標(biāo)進(jìn)行了檢測(cè)和分析,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2019 年9 月～2020 年1 月街頭采集的自愿無(wú)償獻(xiàn)血者血液全血40 袋,規(guī)格均為 200 ml,在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中均使用導(dǎo)管或者轉(zhuǎn)移袋,通過(guò)無(wú)菌接口機(jī)分裝實(shí)驗(yàn)用血液樣本,采樣全程符合無(wú)菌操作,采樣后不影響血液產(chǎn)品的質(zhì)量。

1.2 儀器與試劑 XT-1800i 血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀(SYSMEX公司),CS-2000i 全自動(dòng)凝血分析儀(SYSMEX 公司),Cobas-C111 全自動(dòng)生化分析儀(Roche 公司),CH 光學(xué)顯微鏡(奧林帕斯),Nageotte 白細(xì)胞大容量計(jì)數(shù)池(HAUSSER SCIENTIFIC HORSHAM,PAUSA),LBG-22低溫濾白柜(天津正源公司)。血漿FHb 試劑盒(北京瑞爾達(dá)公司),FⅧ活性測(cè)定試劑盒(SYSMEX 公司),纖維蛋白原測(cè)定試劑盒(SYSMEX 公司),活化部分凝血活酶時(shí)間測(cè)定試劑盒(SYSMEX 公司),凝血因子正常值質(zhì)控品(SYSMEX 公司)。

1.3 方法 根據(jù)《血站技術(shù)操作規(guī)程》2019 版要求,選擇采集過(guò)程流暢的獻(xiàn)血者血液(采集時(shí)間≤5 min)。采集后放置(4±2)℃環(huán)境保存,6～8 h 內(nèi)完成全血過(guò)濾,分別檢測(cè)全血和過(guò)濾后去白全血的FHb 濃度、FIB 和FⅧ活性,及過(guò)濾后紅細(xì)胞回收率、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、去白細(xì)胞濾器過(guò)濾時(shí)間。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用t檢驗(yàn)。P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 白細(xì)胞過(guò)濾器濾除檢測(cè)結(jié)果 對(duì)過(guò)濾后的去白全血進(jìn)行檢測(cè),紅細(xì)胞回收率均可達(dá)到>85.00%,白細(xì)胞計(jì)數(shù)均<2.5×106個(gè)/單位,且全部濾器過(guò)濾時(shí)間 <10 min。見(jiàn)表1。

表1 白細(xì)胞過(guò)濾器濾除檢測(cè)結(jié)果

2.2 過(guò)濾前后的FHb、FIB、FⅧ水平比較 過(guò)濾后,血漿中的FHb 為(0.076±0.016)g/L,高于過(guò)濾前的(0.039±0.019)g/L；血漿中的FIB 為(1.860±0.230)g/L,低于過(guò)濾前的(2.010±0.290)g/L；血漿中的FⅧ為(91.100±7.900)%,低于過(guò)濾前的(95.300±9.200)%,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 過(guò)濾前后的FHb、FIB、FⅧ水平比較()

表2 過(guò)濾前后的FHb、FIB、FⅧ水平比較()

注：與過(guò)濾前比較,aP<0.05

3 討論

全血或紅細(xì)胞懸液通過(guò)去白細(xì)胞濾器過(guò)濾后,國(guó)內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)中都對(duì)過(guò)濾后血液成分中剩余白細(xì)胞計(jì)數(shù)進(jìn)行了限制,標(biāo)準(zhǔn)為≤2.5×106個(gè)/單位［5］,紅細(xì)胞回收率應(yīng)≥85.00%,FHb≤0.530 g/L,每單位全血過(guò)濾時(shí)間≤10 min［6］。選取適當(dāng)?shù)难安课蝗?需要保證最終樣品能夠代表過(guò)濾后產(chǎn)品袋中的真實(shí)情況,又要方便操作,取樣過(guò)程中應(yīng)兼顧血液的安全性和樣本的有效性。白細(xì)胞是血液中的一個(gè)重要組成部分,是人體免疫防御系統(tǒng)的重要構(gòu)成,輸血反應(yīng)的原因中由白細(xì)胞引起的占比最高,臨床實(shí)踐表明白細(xì)胞輸注到異體內(nèi)可能產(chǎn)生有害的副作用,如非溶血性發(fā)熱性輸血反應(yīng)(NHFTR)、人類白細(xì)胞抗原(HLA)同種異體免疫反應(yīng)、血小板輸注無(wú)效等,同時(shí)還有可能引起嗜白細(xì)胞病毒傳染病的感染［7］。相關(guān)研究表明［8］,血液保存過(guò)程中因?yàn)榘准?xì)胞壽命比較短,隨著保存時(shí)間的不斷延長(zhǎng),白細(xì)胞開(kāi)始釋放和生產(chǎn)細(xì)胞因子,而溶血反應(yīng)的發(fā)生多是由于血液制品中存在的高濃度細(xì)胞因子引發(fā)的。去白細(xì)胞濾器是現(xiàn)有去除血液產(chǎn)品中白細(xì)胞的最簡(jiǎn)單、有效的方法,采用的過(guò)濾材料一般具有吸附和濾篩作用,可將血液中的部分微聚體、白細(xì)胞等滯留在過(guò)濾材料中,但不應(yīng)影響其它血液成分的通過(guò),以達(dá)到除去大部分白細(xì)胞的目的。在本實(shí)驗(yàn)中白細(xì)胞殘留量計(jì)數(shù)是很重要的判斷指標(biāo),在過(guò)濾結(jié)束后排氣過(guò)程中可將樣本打入旁路中,既不影響過(guò)濾后的下一步操作,且使用濾器下方導(dǎo)管中血液作為樣本,方便、安全并能夠節(jié)約血液。血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀雖自動(dòng)化程度高,適用于白細(xì)胞含量的快速批量檢測(cè),但對(duì)過(guò)濾后的低白細(xì)胞殘留量標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確［9］,本實(shí)驗(yàn)中所采集的全血,在經(jīng)過(guò)TA-RFB T-200 型去白細(xì)胞過(guò)濾器過(guò)濾后,使用Nageotte 白細(xì)胞計(jì)數(shù)盤進(jìn)行殘余白細(xì)胞計(jì)數(shù),結(jié)果均<2.5×106個(gè)/單位,合格率為100%,可見(jiàn)此款去白細(xì)胞濾器對(duì)血液中白細(xì)胞的去除效果滿意,可以滿足臨床降低或消除白細(xì)胞引起輸血不良反應(yīng)的需要。實(shí)驗(yàn)中所有全血過(guò)濾后的紅細(xì)胞回收率檢測(cè)均>85.00%,過(guò)濾致紅細(xì)胞的損失率符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)中所有抽取的全血充分混勻,沒(méi)有凝塊,避免過(guò)濾不暢等干擾因素［10］,過(guò)程順暢,過(guò)濾時(shí)間均 <10 min,100%達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)要求。紅細(xì)胞通過(guò)濾器的過(guò)程中,通過(guò)濾材孔道時(shí)會(huì)受到流體靜態(tài)壓力、切變率、孔形狀、流速等因素影響,可能會(huì)有一定的損傷［11］。不合格濾器可能導(dǎo)致過(guò)濾后的血漿FHb 超標(biāo),可能與紅細(xì)胞通過(guò)濾層時(shí)所受的切變力有關(guān)［12］。一般若使用的濾器合格,且按要求自然重力過(guò)濾,不會(huì)發(fā)生溶血情況；但如若濾器管路的邊緣扭結(jié),或采血主袋管路上的易折塞入口處等也可導(dǎo)致紅細(xì)胞部分損傷,故應(yīng)對(duì)濾白后血液及時(shí)進(jìn)行質(zhì)量控制。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中過(guò)濾后血漿FHb 含量均<0.530 g/L,且遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于該標(biāo)準(zhǔn),說(shuō)明該濾器對(duì)紅細(xì)胞的損傷在合格范圍內(nèi),且與過(guò)濾前的全血血漿FHb 含量相比較,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。新鮮冰凍血漿中包含各種凝血因子、清蛋白及免疫球蛋白等,臨床上主要應(yīng)用在凝血因子的補(bǔ)充,幾乎包括全血中的全部凝血因子和蛋白,包括不穩(wěn)定的凝血因子(如FⅤ、FⅧ等),因此凝血因子的活性高低決定著新鮮冰凍血漿的質(zhì)量［13］。去白細(xì)胞過(guò)濾器產(chǎn)生作用的機(jī)制主要是因?yàn)樽铚饔?、表面張力和電荷密度等。全血中的凝血因子因其分子大小遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于濾器中濾材的孔徑,濾材阻滯作用不會(huì)對(duì)其產(chǎn)生影響,但濾材的表面張力與電荷密度在過(guò)濾中可能對(duì)凝血因子有一定的吸附作 用［14］。不同濾器中采用的過(guò)濾材料可能具有不同結(jié)構(gòu)和表面特性,吸附作用或其它作用機(jī)制導(dǎo)致的凝血途徑活化,均可能造成不同程度的凝血因子消耗。本實(shí)驗(yàn)中,對(duì)過(guò)濾后的去白全血進(jìn)行檢測(cè),紅細(xì)胞回收率均可達(dá)到>85.00%,白細(xì)胞計(jì)數(shù)均<2.5×106個(gè)/單位,且全部濾器過(guò)濾時(shí)間<10 min。過(guò)濾后,血漿中的FHb 高于過(guò)濾前,FIB、FⅧ低于過(guò)濾前,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

使用不同的血液保養(yǎng)液及濾器中采用的不同濾材都可能對(duì)通過(guò)濾器的血液成分產(chǎn)生質(zhì)量影響,因此在選擇一次性使用白細(xì)胞過(guò)濾器血袋的時(shí)候,應(yīng)綜合考慮采用的血液保養(yǎng)液成分類型、過(guò)濾器去白細(xì)胞效果、過(guò)濾速度、濾材介質(zhì)電荷及粘附作用等。選擇過(guò)濾器的時(shí)候,濾材應(yīng)具有較好的生物學(xué)相容性,使用前應(yīng)評(píng)價(jià)濾器去除白細(xì)胞的效果及對(duì)紅細(xì)胞和凝血因子等有效血液成分的影響,確保去除白細(xì)胞后的血液產(chǎn)品能夠安全、并有效地滿足臨床需求。