楊曉華，劉方方，張楓琳，易 鑫，陳 林，束 剛，王麗娜，朱曉彤，高 萍，江青艷，王松波

(華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 廣東省動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)調(diào)控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州 510642)

過(guò)多的能量攝入會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物軀體不同部位的脂肪沉積。研究報(bào)道稱，肥胖會(huì)引起內(nèi)分泌及代謝異常，如代謝率降低[1]、高胰島素血癥[2]和孕酮產(chǎn)生過(guò)剩[3]，伴隨著發(fā)情周期紊亂[4-5]、多囊卵巢綜合征(PCOS)[6-7]和不孕癥[8-9]。在動(dòng)物生產(chǎn)中，脂肪沉積會(huì)影響母豬繁殖性能，如降低發(fā)情率、受胎率和仔豬出生成活率等[10-11]。因此，預(yù)防肥胖可以提高母豬繁殖性能，降低女性生殖疾病的發(fā)病率，改善動(dòng)物繁殖性能和人類健康。

根據(jù)功能的差異，脂肪組織通常分為3種類型，即白色脂肪組織(white adipose tissue,WAT)、褐色脂肪組織(brown adipose tissue,BAT)和米色脂肪組織。白色脂肪組織主要負(fù)責(zé)能量?jī)?chǔ)存[12]；褐色脂肪組織通過(guò)解偶聯(lián)蛋白1 (uncoupled protein 1,UCP1)解偶聯(lián)氧化磷酸化來(lái)消耗能量[13]；米色脂肪組織分布在白色脂肪組織中，具有褐色樣表型，此過(guò)程稱為褐色化[14]。BAT激活/產(chǎn)熱和WAT褐色化在治療肥胖中具有潛在作用[15-17]，并且BAT激活能夠改善生殖障礙[18-20]。一些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如白藜蘆醇(resveratrol)[21]、蘆丁(rutin)[22]、葉綠醇(phytol)[23]和視黃酸(retinoic acid)[24]已被證明可以激活BAT產(chǎn)熱和WAT褐色化。因此，通過(guò)營(yíng)養(yǎng)干預(yù)促進(jìn)BAT產(chǎn)熱和WAT褐色化是預(yù)防肥胖相關(guān)生殖功能障礙的有利策略。

魚油中富含大量的n-3多不飽和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid,PUFA)，即二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)。n-3 PUFA有多種益處，包括抗炎[25]和預(yù)防心血管疾病[26]，而添加魚油能有效預(yù)防肥胖的發(fā)生[27-28]。此外，n-3 PUFA已被證明可以改善PCOS大鼠的卵巢發(fā)育，并對(duì)PCOS的生化特性如FSH和脂聯(lián)素發(fā)揮有益作用[29]。然而，魚油是否能夠緩解高脂飲食導(dǎo)致的發(fā)情周期紊亂尚不清楚。

因此，本研究旨在探究日糧魚油對(duì)高脂飲食導(dǎo)致的發(fā)情周期紊亂和機(jī)體代謝的影響，研究結(jié)果有望揭示魚油在改善肥胖相關(guān)繁殖異常方面的調(diào)控作用，為其在動(dòng)物生產(chǎn)和人類健康中的應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取36只4周齡的C57BL/6 J雌性小鼠(購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，在溫度(23±3)℃、濕度(70±10)%的條件下，進(jìn)行12 h的光-暗循環(huán)試驗(yàn)。適應(yīng)1周后，將小鼠隨機(jī)分為3組(n=12)：對(duì)照組、高脂組和高脂+魚油組。對(duì)照組飼喂標(biāo)準(zhǔn)嚙齒動(dòng)物飼料(AIN-93G)，高脂組和高脂+魚油組分別飼喂的高脂日糧(脂肪提供60%能量)和添加5%魚油(等能替代豬油)的高脂日糧。本試驗(yàn)日糧魚油添加量是根據(jù)Halade等[30]試驗(yàn)中使用的日糧魚油添加量(5%)所確定。小鼠日糧成分組成和脂肪酸組成見(jiàn)表1、表2。試驗(yàn)期21周。在不同飼養(yǎng)階段，對(duì)小鼠體組成、整體代謝、褐色脂肪溫度、直腸(體核)溫度和發(fā)情周期等進(jìn)行檢查。試驗(yàn)結(jié)束后，用二氧化碳麻醉小鼠，眼球取血分離血清，用ELISA試劑盒檢測(cè)FSH和E2水平。此外，采集皮下脂肪、腹部脂肪和肩胛間褐色脂肪，稱重后保存于-80 ℃冰箱，以便進(jìn)一步分析。

表1 試驗(yàn)日糧組成Table 1 The composition of experimental diets g·kg-1日糧

表2 不同飼糧的脂肪酸組成Table 2 Fatty acid composition of different diets %

1.2 材料和試劑

魚油由廣州市優(yōu)百特飼料科技有限公司提供。促卵泡激素和雌二醇檢測(cè)試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所，β-actin抗體購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，UCP1和Cyto C抗體購(gòu)自CST公司。

1.3 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.3.1 體組成 在12周齡時(shí)，用動(dòng)物體成分和核磁共振成像系統(tǒng)分析儀(MesoQMR23-060H型,Niumag Corporation公司)測(cè)定小鼠的體脂含量和脂肪分布。

1.3.2 紅外熱成像和體核(直腸)溫度測(cè)定 18周齡的小鼠在25 ℃或4 ℃環(huán)境中暴露4 h，自由飲食和飲水。采用紅外數(shù)字熱像儀獲取小鼠的紅外圖像，并用紅外數(shù)字熱像儀(E60型，F(xiàn)LIR公司)快速報(bào)告軟件對(duì)iBAT溫度進(jìn)行分析。用直腸探頭連接數(shù)字溫度計(jì)測(cè)量小鼠的直腸溫度。

1.3.3 發(fā)情周期鑒定 對(duì)20周齡雌性小鼠進(jìn)行連續(xù)8 d陰道涂片的細(xì)胞學(xué)檢查，每天觀察一次陰道涂片細(xì)胞類型，確定發(fā)情周期所處階段。固定小鼠，用移液槍吸取20 μL生理鹽水至小鼠陰道，反復(fù)抽吸5次后，將液體均勻涂至整個(gè)載玻片，涂片自然干燥后，用甲醇固定3 min，瑞氏染液染色5～8 min，流水緩慢沖洗，吉姆薩染液染色 8 min，最后用自來(lái)水漂洗，自然干燥，封片，待檢。各階段的分辨方法如下：發(fā)情期(estrous,E)的卵泡會(huì)成熟排卵，均為無(wú)核角化細(xì)胞或有少量上皮細(xì)胞；發(fā)情前期(proestrus,P)的卵泡快速生長(zhǎng)，可見(jiàn)大量有核上皮細(xì)胞，少量角化細(xì)胞；發(fā)情后期(metestrus,M)的黃體生成，具有一半的上皮細(xì)胞和一半的白細(xì)胞，前者的細(xì)胞核較大，且半透明、有皺褶；發(fā)情間期(diestrus,D)的黃體退化，可見(jiàn)大量白細(xì)胞及少量黏膜和上皮細(xì)胞。

1.3.4 整體代謝 在16周齡時(shí)，采用綜合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物監(jiān)測(cè)系統(tǒng)(CLAMS)(Promethion Metabolic Screening Systems，美國(guó)Sable Systems International公司)測(cè)定小鼠的產(chǎn)熱和耗氧量等代謝參數(shù)。小鼠稱重后，提前將小鼠放于代謝籠適應(yīng)2 d后，測(cè)定代謝參數(shù)1 d，期間自由采食和采水。試驗(yàn)結(jié)束后，小鼠稱重。根據(jù)前后體重的平均，統(tǒng)計(jì)第3天白天(12 h)和黑夜(12 h)的代謝參數(shù)。

1.3.5 蘇木精-伊紅(HE)和免疫組化(IHC)染色 剪取一塊脂肪于多聚甲醇固定24～36 h，脫水后用石蠟包埋，切片(5 μm)，貼片，烘干，用蘇木精和伊紅染色，或用UCP1抗體進(jìn)行免疫組化染色，拍照。

1.3.6 組織RNA提取和實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè) 按照廣州美基生物科技公司RNA 快速提取試劑盒內(nèi)的說(shuō)明書提取腹股溝白色脂肪和肩胛間褐色脂肪RNA。主要步驟為：組織加入裂解液后，勻漿，靜置，氯仿抽提，離心，吸上清，加無(wú)水乙醇，過(guò)柱，清洗，加入無(wú)核酸水溶解RNA。按照以下反轉(zhuǎn)錄步驟(購(gòu)自日本TaKaRa公司)反轉(zhuǎn)成cDNA，主要為：體系一(RNA+oligod(T)18)預(yù)變性70 ℃，5 min，結(jié)束后立即放至冰盒；體系二(預(yù)變性得到的RNA+dNTP+RNase+2×Buffer+M-MLV RTase+DEPC水)溫育(37 ℃，90 min)后滅活反轉(zhuǎn)錄酶(70 ℃，7 min)。反應(yīng)結(jié)束后，將樣品取出后，置于-20 ℃冰箱中保存。

通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)組織中的UCP1、PRDM16、PGC1α、Cidea和Elovl3基因的mRNA表達(dá)，引物序列如表3所示。試驗(yàn)步驟主要為：cDNA樣品稀釋5倍(20 μL cDNA+80 μL DEPC水)，配置引物工作液(引物母液上下游各10 μL+80 μL DEPC水)，點(diǎn)樣(20 μL體系：3 μL已稀釋的cDNA+6.5 μL無(wú)核酸水+0.5 μL引物工作液+10 μL SYBR green)，貼膜后離心、上機(jī)，反應(yīng)程序如表4。最后分析數(shù)據(jù)，根據(jù)公式計(jì)算各目的基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量(以β-actin為內(nèi)參基因)：目的基因mRNA相對(duì)表達(dá)量=2(Ct 目的基因-Ct 內(nèi)參基因)。

表3 qPCR檢測(cè)的引物Table 3 Primers used for the qPCR assay

表4 qPCR反應(yīng)程序Table 4 Reaction process for the qPCR assay

1.3.7 蛋白質(zhì)印跡法 使用RIPA裂解液裂解脂肪組織，勻漿，離心后取上清，使用BCA法測(cè)定蛋白濃度，根據(jù)濃度，用5X SDS對(duì)樣品進(jìn)行進(jìn)行等質(zhì)量蛋白分裝，并99 ℃變性10 min。利用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白，試驗(yàn)步驟主要為：配置分離膠和濃縮膠(根據(jù)美國(guó)Bio-Rad公司的Western blot快速制膠試劑盒制膠)，將分離膠和濃縮膠注入板中，插梳子，靜置凝固30 min后，將膠用電泳夾子夾緊放入電泳槽，將電泳液倒入電泳槽，拔梳子，點(diǎn)樣，跑電泳(120 V，60 min)，準(zhǔn)備PVDF膜(轉(zhuǎn)膜前15 min PVDF膜用預(yù)冷的甲醇活化)和轉(zhuǎn)膜液，轉(zhuǎn)膜(橫流90 mA，65 min(70 ku以下的蛋白分子)或90 min(70 ku以上的蛋白分子))，轉(zhuǎn)膜結(jié)束后將條帶取出，用TBST在搖床上清洗5次，用6%脫脂奶粉封閉2.5 h，TBST洗5次條帶，4 ℃過(guò)夜孵育一抗(UCP1(1∶2 000)、Cyto C(1∶2 000)和β-actin(1∶2 000))，TBST洗5次條帶，用二抗室溫孵育1.5 h 后洗滌，曝光。并用Image J軟件分析條帶灰度。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

所有數(shù)據(jù)均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM)”表示。使用Sigmaplot 14軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用單因素方差分析(one-way ANOVA)對(duì)各組均值進(jìn)行差異分析，采用Duncan’s法進(jìn)行多組數(shù)據(jù)之間的比較，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 日糧魚油降低小鼠體脂含量和白色脂肪重量

與對(duì)照組相比，飼喂高脂日糧小鼠的脂肪含量增加了21個(gè)百分點(diǎn)，但魚油的攝入逆轉(zhuǎn)了HFD引起的脂肪含量增加，比高脂組降低了10個(gè)百分點(diǎn)(P<0.05，圖1A、B)。與此結(jié)果一致，日糧魚油能顯著減少HFD導(dǎo)致的皮下和腹部脂肪的增加(P<0.05)，分別減少了1.1和2.8個(gè)百分點(diǎn)(圖1C)，且BAT的重量明顯高于對(duì)照組和高脂組小鼠(P<0.05，圖1C)。綜上所述，日糧魚油顯著降低雌性小鼠的體脂含量和白色脂肪重量。

2.2 日糧魚油緩解高脂日糧導(dǎo)致的雌性小鼠發(fā)情周期紊亂

與對(duì)照組相比，HFD能延長(zhǎng)小鼠的發(fā)情周期(8～10 d)，并降低發(fā)情期的時(shí)間比例，增加發(fā)情間期的時(shí)間比例(P<0.05)。而日糧魚油將發(fā)情周期縮短到正常天數(shù)(4～5 d)，并且恢復(fù)HFD導(dǎo)致的發(fā)情期縮短和發(fā)情間期延長(zhǎng)(P<0.05，圖2A、B)。通過(guò)計(jì)算各組正常發(fā)情小鼠與異常發(fā)情小鼠的比率發(fā)現(xiàn)，高脂組的正常發(fā)情小鼠的比率只有18%，而日糧魚油顯著增加正常發(fā)情的小鼠比率(75%)(P<0.05，圖2C)。同時(shí)日糧魚油能夠增加HFD導(dǎo)致的血清FSH和E2水平的降低(P<0.05，圖2D、E)。綜上表明，日糧魚油可以緩解HFD導(dǎo)致的雌性小鼠發(fā)情周期紊亂。

A.體組成；B.脂肪分布；C.不同部位脂肪組織指數(shù)。柱子上方，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下同A.Body composition;B.Fat distribution;C.Adipose tissue index of different parts.Above the column,different lowercase letters indicate significant differences (P<0.05).The same as below圖1 日糧魚油對(duì)小鼠體脂含量和白色脂肪重量的影響Fig.1 Effects of dietary fish oil on fat content and WAT mass of mice

A.發(fā)情周期對(duì)比圖，橫坐標(biāo)1～8表示天數(shù)；B.發(fā)情周期統(tǒng)計(jì)圖；C.發(fā)情比率統(tǒng)計(jì)圖；D.促卵泡激素水平；E.雌二醇水平A.Comparison of estrous cycles，1-8 in the abscissa indicates the number of days;B.Statistical graph of estrous cycles;C.Statistical graph of estrus rate;D.The level of FSH;E.The level of E2圖2 日糧魚油緩解高脂日糧誘導(dǎo)雌性小鼠的發(fā)情周期紊亂Fig.2 Dietary fish oil alleviated HFD-induced estrous cycle irregularity in female mice

2.3 日糧魚油改善高脂日糧導(dǎo)致的雌性小鼠能量代謝異常

為探究魚油緩解HFD導(dǎo)致的發(fā)情周期紊亂是否與機(jī)體能量代謝有關(guān)，本研究測(cè)定了各組小鼠的代謝狀態(tài)。結(jié)果顯示，HFD降低小鼠的耗氧量和產(chǎn)熱量，而日糧魚油恢復(fù)了HFD導(dǎo)致的耗氧量和產(chǎn)熱量的降低(P<0.05，圖3B～E)。同時(shí)，添加魚油使小鼠的直腸溫度顯著升高(P<0.05，圖3A)，與能量代謝增加的表型一致。綜上所述，日糧添加魚油能增強(qiáng)高脂飼喂小鼠的能量消耗和直腸溫度，表明魚油能夠改善HFD導(dǎo)致的小鼠能量代謝異常。

A.直腸溫度統(tǒng)計(jì)圖；B、C.耗氧量統(tǒng)計(jì)圖；D、E.熱量統(tǒng)計(jì)圖A.Statistical graph of rectum temperature;B,C.Statistical chart of oxygen consumption;D,E.Statistical chart of heat圖3 日糧魚油可改善高脂飼喂雌性小鼠能量代謝的異常Fig.3 Dietary fish oil improved the abnormal of energy metabolism in HFD-fed female mice

2.4 日糧魚油促進(jìn)高脂飼喂小鼠的BAT產(chǎn)熱

由于能量消耗的增加與BAT激活/產(chǎn)熱有關(guān)，本研究進(jìn)一步探索日糧添加魚油能否促進(jìn)高脂日糧飼喂小鼠的BAT產(chǎn)熱。根據(jù)圖4A和4B所示，在25 ℃下，高脂小鼠的iBAT溫度與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)，但在4 ℃冷刺激下，高脂小鼠的iBAT溫度顯著降低(P<0.05)。而無(wú)論是25 ℃或4 ℃，魚油均能促進(jìn)高脂日糧飼喂小鼠的iBAT產(chǎn)熱，且增加產(chǎn)熱標(biāo)志基因(UCP1，PRDM16，PGC1α，Cidea，Elovl3)和蛋白(UCP1和Cyto C)的表達(dá)(P<0.05，圖4C～E)。以上結(jié)果表明，魚油通過(guò)增加BAT產(chǎn)熱基因和蛋白的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)高脂飼喂小鼠的機(jī)體代謝產(chǎn)熱。

A.肩胛間褐色脂肪溫度紅外圖像；B.肩胛間褐色脂肪溫度統(tǒng)計(jì)圖；C.肩胛間褐色脂肪產(chǎn)熱標(biāo)志基因的mRNA表達(dá)；D、E.肩胛間褐色脂肪產(chǎn)熱標(biāo)志基因的蛋白表達(dá)A.Infrared images of iBAT temperature;B.Statistical chart of iBAT temperature;C.The mRNA expression of genes related to thermogenic program in the iBAT;D,E.The relative protein expression of genes related to thermogenic program in the iBAT圖4 日糧魚油促進(jìn)高脂飲食誘導(dǎo)雌性小鼠的iBAT產(chǎn)熱Fig.4 Dietary fish oil increased iBAT thermogenesis in HFD-fed female mice

2.5 日糧魚油促進(jìn)高脂飼喂小鼠的iWAT褐色化

WAT褐色化也能促進(jìn)機(jī)體產(chǎn)熱。因此，本研究探討了魚油對(duì)iWAT褐色化的影響。HE染色結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，高脂飼喂小鼠中iWAT的脂肪細(xì)胞內(nèi)脂滴變大，數(shù)量減少。然而，添加魚油顯著降低了脂肪細(xì)胞內(nèi)脂滴大小，數(shù)量增加(圖5A)。由UCP1免疫組化染色觀察可知，高脂飼喂小鼠中iWAT的UCP1陽(yáng)性染色變淺，而添加魚油UCP1陽(yáng)性染色加深(圖5A)。與IHC結(jié)果一致，添加魚油可顯著增加iWAT中UCP1、Cyto C等產(chǎn)熱標(biāo)志基因的蛋白表達(dá)(P<0.05，圖5B、C)。以上結(jié)果表明，日糧魚油可促進(jìn)高脂飼喂小鼠中iWAT的褐色化。

A.腹股溝白色脂肪UCP1的HE染色(上)和免疫組化圖(下)；B、C.腹股溝白色脂肪脂肪產(chǎn)熱標(biāo)志基因的蛋白表達(dá)A.Representative HE staining (upper)and immunohistochemistry for UCP1 (lower)of images of iWAT;B，C.The relative protein expression of genes related to thermogenic program in the iWAT圖5 日糧魚油促進(jìn)高脂飲食誘導(dǎo)雌性小鼠的iWAT褐色化Fig.5 Dietary fish oil promoted iWAT browning in HFD-fed female mice

3 討 論

3.1 日糧魚油對(duì)高脂飼喂小鼠脂肪沉積的影響

有文獻(xiàn)報(bào)道，魚油可以降低動(dòng)物體重和脂肪沉積，預(yù)防肥胖[28,31-32]。與這些研究一致，本試驗(yàn)結(jié)果表明，魚油可逆轉(zhuǎn)高脂日糧導(dǎo)致的脂肪含量和白色脂肪重量的增加。也有研究發(fā)現(xiàn)，魚油能增加倉(cāng)鼠[33]和大鼠[34]的iBAT重量，與本試驗(yàn)結(jié)果一致。

3.2 日糧魚油對(duì)高脂飼喂小鼠繁殖性能的影響

大量的研究報(bào)道，肥胖或高脂飲食會(huì)對(duì)雌性繁殖性能產(chǎn)生不利影響，如大鼠[35]和小鼠[20]的發(fā)情周期紊亂。與這些研究結(jié)果一致，本試驗(yàn)結(jié)果表明，高脂飲食導(dǎo)致雌性小鼠發(fā)情周期紊亂，降低正常發(fā)情率。一直以來(lái)，肥胖被認(rèn)為與女性月經(jīng)紊亂有關(guān)[36]?；隰~油的抗肥胖作用，本研究推測(cè)，魚油可以緩解高脂日糧導(dǎo)致的發(fā)情周期紊亂。與假設(shè)一致，本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧魚油可以緩解高脂日糧導(dǎo)致的發(fā)情周期紊亂。同樣，有報(bào)道稱，富含EPA或DHA的飲食能促進(jìn)大鼠排卵[37]，且增加山羊排出卵泡的數(shù)量和大小[38]。

發(fā)情周期是動(dòng)物繁殖過(guò)程的重要部分，受生殖激素的調(diào)控，然而，不規(guī)律的發(fā)情周期往往伴隨著FSH和E2等生殖激素的變化。本研究中，飼喂高脂日糧的小鼠血清FSH和E2水平顯著降低。有報(bào)道指出，超重女性血清的FSH水平低于正常體重的女性[39]。有趣的是，本研究中添加魚油提高了高脂飼喂小鼠血清中FSH和E2的水平，與此結(jié)果一致，有報(bào)道稱DHA增加了牛卵巢顆粒細(xì)胞中的E2濃度[40]。但Bauer等[41]發(fā)現(xiàn)，魚油降低了正常體重而非肥胖女性在整個(gè)月經(jīng)周期間的血清FSH水平。本研究與Bauer等[41]研究的結(jié)果差異可能是由于研究對(duì)象的不同。上述結(jié)果說(shuō)明，攝入富含魚油的高脂日糧可以預(yù)防高脂飲食導(dǎo)致的雌性小鼠發(fā)情周期紊亂和生殖激素的改變。

3.3 日糧添加魚油對(duì)高脂飼喂小鼠BAT產(chǎn)熱和WAT褐色化的影響

本研究還進(jìn)一步探索了魚油緩解高脂日糧引起的發(fā)情周期紊亂的機(jī)制。肥胖往往伴隨著能量平衡的變化。因此，本研究通過(guò)檢測(cè)小鼠的機(jī)體代謝產(chǎn)熱發(fā)現(xiàn)，日糧添加魚油增加了耗氧量和產(chǎn)熱量，并提高了高脂日糧導(dǎo)致的直腸溫度降低。與此結(jié)果一致，有研究表明，魚油增加了小鼠的耗氧量[27,42]和直腸溫度[42]。由于動(dòng)物可以通過(guò)BAT的UCP1解偶聯(lián)氧化磷酸化來(lái)增加產(chǎn)熱，因此，本研究檢測(cè)了小鼠BAT的溫度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，魚油提高了iBAT的溫度，并伴隨著褐色脂肪細(xì)胞標(biāo)志基因和蛋白的表達(dá)的增加，說(shuō)明魚油可促進(jìn)BAT的激活/產(chǎn)熱。在人類皮下脂肪細(xì)胞培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)，與體重較輕的人相比，肥胖個(gè)體的UCP1基因表達(dá)降低[43]。此外，有研究表明，魚油可改善iBAT中UCP1的表達(dá)[28]。基于已有的研究，BAT的移植[44]或BAT激活[45]有利于改善PCOS。同時(shí)，本試驗(yàn)結(jié)果顯示，日糧添加魚油顯著增加BAT的含量。因此，本研究揭示了魚油促進(jìn)的BAT激活或產(chǎn)熱可能有助于緩解發(fā)情周期的紊亂。

除了BAT產(chǎn)熱，WAT產(chǎn)熱/WAT褐色化也有助于增加機(jī)體產(chǎn)熱[46]。報(bào)道顯示，添加魚油可誘導(dǎo)iWAT中UCP1的上調(diào)[42,47]，EPA可增加皮下脂肪細(xì)胞中UCP1基因的表達(dá)[48]。與該報(bào)道一致，本試驗(yàn)結(jié)果顯示，日糧魚油促進(jìn)了iWAT中UCP1基因和蛋白的表達(dá)。但Pahlavani等[49]發(fā)現(xiàn)，高脂日糧添加EPA(45%的能量來(lái)自脂肪)并沒(méi)有促進(jìn)iWAT中UCP1蛋白的表達(dá)。兩者研究結(jié)果的差異可能是由于魚油的添加量和來(lái)源不同，或膳食脂肪含量不同。上述結(jié)果表明，魚油促進(jìn)WAT褐變可能也與增強(qiáng)產(chǎn)熱和改善發(fā)情周期紊亂有關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)，魚油能夠顯著增加血清中E2的水平。而有研究表明，E2的增加會(huì)通過(guò)雌激素受體ER-α抑制神經(jīng)肽Y(neuropeptide Y,NPY)的分泌[50]。NPY是能量消耗的主要調(diào)節(jié)因子，通過(guò)抑制BAT活性而降低能量消耗[51]。并且，在Hu等[45]的研究中發(fā)現(xiàn)，BAT的激活能夠改善PCOS，其機(jī)制可能是BAT分泌的細(xì)胞因子脂聯(lián)素改善了胰島素抵抗，進(jìn)而改善了PCOS。因此，魚油可能通過(guò)增加E2的水平，抑制了NPY的表達(dá)，從而削弱了NPY對(duì)BAT活性的抑制作用，最終BAT的激活介導(dǎo)脂聯(lián)素緩解發(fā)情周期紊亂。

4 結(jié) 論

綜上所述，日糧魚油可緩解高脂日糧導(dǎo)致的發(fā)情周期紊亂和代謝產(chǎn)熱降低，其可能與BAT激活/產(chǎn)熱和WAT褐色化過(guò)程有關(guān)。本研究揭示了魚油在改善肥胖相關(guān)生殖異常方面的潛在應(yīng)用，為改善動(dòng)物繁殖性能和人類健康提供理論和試驗(yàn)基礎(chǔ)。