昝嘉惠 馬 琴 裴英豪 翟玲玲 李錦馨

（寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院 寧夏銀川 750021）

菊花，中藥名，在植物分類學(xué)中屬于菊科、菊屬的多年生宿根草本植物[1]。品種名的不同對(duì)應(yīng)著不同類型的菊花，其中茶菊性味苦、甘、平，無(wú)毒[2]。隨著干旱形勢(shì)日趨嚴(yán)重，干旱脅迫是植物在生長(zhǎng)過(guò)程常面對(duì)的逆境之一[3]。菊花中豐富的黃酮類、酚酸類、多糖類、揮發(fā)油類、三萜類、核苷類和氨基酸類等多種資源性化學(xué)成分與干旱脅迫的結(jié)果有關(guān)，即對(duì)于菊花來(lái)說(shuō)，干旱會(huì)引起其花中有效成分的改變。因而，本項(xiàng)目從對(duì)丙二醛（MDA）、可溶性糖、類胡蘿卜素的含量變化研究出發(fā)，探究菊花應(yīng)對(duì)干旱脅迫的生理變化。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

采樣地點(diǎn)位于寧夏嘉禾花語(yǔ)生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司菊花種植基地，菊花正常水肥管理，樣品植株選用大小相似的三種不同顏色的茶菊。以浸泡后5 h 為第一次取樣點(diǎn)，之后不澆水，每隔5 h 采樣1 次，共采樣4 次，將采得的樣品進(jìn)行冷凍處理，為下一步的相關(guān)指標(biāo)測(cè)定工作做好準(zhǔn)備。

1.2 茶菊丙二醛含量的測(cè)定

取在冰箱中冷凍的花瓣0.5 g，將其烘干后研磨成粉末，將粉末用5 mL 5%的TCA 溶液分3 次漂洗至10 mL 離心管中，并在離心機(jī)中于3 000 r/min 離心20 min 后，加入等體積0.67%的TBA 溶液于2 mL 的上清液中。充分振蕩后于沸水浴中加熱30 min，之后用水冷卻至室溫，再轉(zhuǎn)移至離心管中以3 000 r/min 離心10 min。以去離子水作為調(diào)零液，取離心后的上清液分別在450 nm、532 nm、600 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值[4]。

組織中MDA 含量計(jì)算公式：

MDA 濃度C（μmol/L）=6.45（OD532-OD600）－0.56OD450[4]；

MDA 含量（μmol/g FW）=C×V/W[4]。

公式中：V為提取液體積（1.8 mL），W為樣品鮮重（0.5 g）。

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

（1）1%蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液：將蔗糖（分析純）于80 ℃下烘干至恒重，取1 g 蔗糖加水溶解，將其與0.5 mL 濃硫酸依次加入100 mL 容量瓶中，并用蒸餾水定容[5]。

（2）100 μg/mL 蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液：精確吸取1 mL 1%蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液至100 mL 容量瓶中，并準(zhǔn)確定容，取11 支20 mL 刻度試管依次編號(hào)0～10，將溶液和水按表1所示加入其中[5]。

表1 100 ug/mL 蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液溶液配置表

1.3 茶菊可溶性糖含量的測(cè)定

選擇蒽酮比色法測(cè)定茶菊中可溶性糖含量。

11 支試管中依次加入0.5 mL 蒽酮乙酸乙酯試劑、5 mL濃硫酸，搖晃均勻后，迅速放入提前準(zhǔn)備好的沸水浴中處理1 min，然后取出靜置，等待其自然冷卻至室溫，以空白做對(duì)照，在630 nm 波長(zhǎng)下測(cè)其吸光值?？v坐標(biāo)為吸光值，橫坐標(biāo)為蔗糖含量，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求出標(biāo)準(zhǔn)線性方程[7]。

1.3.2 可溶性糖的提取

取保存于冰箱中的花瓣0.3 g 烘干，用研缽研磨成粉末后，將20 mL 試管置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，用10 mL 蒸餾水將粉末分3 次沖入。將用塑料薄膜封口的試管放入提前準(zhǔn)備好的沸水中提取兩次，每次30 min，之后將提取液過(guò)濾至25 mL 容量瓶中，多次沖洗試管至無(wú)殘?jiān)媪簦瑴?zhǔn)確定容至刻度。吸取1 mL 的樣品濾液至10 mL 試管中，依次向試管中加入0.5 mL 蒽酮乙酸乙酯、5 mL 濃硫酸，充分振蕩后于沸水浴中處理1 min，取出靜置，冷卻至室溫后，在630 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光值，重復(fù)3 次，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算可溶性糖的含量[5]。

1.3.3 結(jié)果計(jì)算

可溶性糖含量（%）=C×V×N/（a×W×106）×100%。

式中：C為依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得的蔗糖含量（μg）；V為提取液體積（mL）；N為稀釋倍數(shù)；a為測(cè)定用樣品液的體積（mL）；W為樣品重量（g）[5]。

1.4 茶菊類胡蘿卜素含量的測(cè)定

稱取冰箱中的花瓣鮮樣0.2 g 烘干，準(zhǔn)備5 mL 離心管，裝入研缽研磨好的粉末，加入提取劑（丙酮與石油醚體積比1∶4）3 mL。在無(wú)光條件下4 ℃恒溫提取48 h 后，置于離心機(jī)中，4 000 r/min 離心10 min，取上清液。空白對(duì)照為提取劑，調(diào)零，于450 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光值[6]。

類胡蘿卜素含量計(jì)算公式：

A=E1%1cm×C×d

式中：E1%1cm為類胡蘿卜素的消光系數(shù)，使用平均值2 500；C為類胡蘿卜素濃度，單位為g/mL；d為光通過(guò)類胡蘿卜素的距離，為1 cm；A為最大吸收峰的光密度[6]。

1.5 數(shù)據(jù)處理

所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次，其結(jié)果均以“平均值”表示；采用Excel 2007 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，并采用Origin 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果分析

2.1 丙二醛含量變化

如圖1所示，三種茶用菊花在干旱處理的20 h 內(nèi)，丙二醛含量發(fā)生如下變化：白色菊花線形呈鐘形，總趨勢(shì)為上升，且較初始值上升0.3μmol/g FW；黃色菊花線形呈波浪狀，總趨勢(shì)為上升，較初始值上升0.9μmol/g FW；紫色菊花呈下降趨勢(shì)，且較初始值下降4.3μmol/g FW。

圖1 菊花丙二醛含量變化

2.2 可溶性糖含量變化

如圖2所示，三種茶用菊花在干旱脅迫20 h 內(nèi)，可溶性糖含量均發(fā)生了下降，黃色菊花下降最快斜率為-34%，且與紫色菊花均較初始值下降0.01%，白色菊花下降不明顯，僅較初始值下降0.007 9%。

圖2 菊花可溶性糖含量變化

2.3 類胡蘿卜素含量變化

如圖3所示，三種茶用菊花在干旱20 h 內(nèi)，胡蘿卜素含量總體趨勢(shì)均為下降，紫色菊花和白色菊花呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì)，但總體趨勢(shì)為下降，黃色菊花為先上升后下降，紫色菊花下降最明顯，白色菊花最不明顯。

圖3 菊花類胡蘿卜素含量變化

3 討論與結(jié)論

丙二醛、可溶性糖和類胡蘿卜素是與菊花抗氧化能力和外部色彩相關(guān)的生理指標(biāo)，在干旱脅迫下了解菊花生理指標(biāo)的含量變化，可指導(dǎo)其實(shí)踐生產(chǎn)。通過(guò)實(shí)驗(yàn)得出的結(jié)果可知，在可溶性糖含量測(cè)定中，黃色菊花可溶性糖含量下降最多，且與紫色菊花下降量相同，白色菊花的下降量在此測(cè)定中不明顯。干旱脅迫下植物組織中可溶性糖含量應(yīng)出現(xiàn)上升，而這三種菊花的測(cè)定結(jié)果均顯示為下降，推測(cè)原因?yàn)楹粑饔孟牡目扇苄蕴桥c干旱脅迫增加的可溶性糖抵消，總體為呼吸作用消耗的可溶性糖更多，說(shuō)明干旱脅迫的力度不足且時(shí)間不夠長(zhǎng)。對(duì)于丙二醛含量的測(cè)定，黃色菊花和白色菊花中的含量呈下降趨勢(shì)，但是紫色菊花中的含量呈上升狀態(tài)。丙二醛是衡量膜質(zhì)過(guò)氧化的一個(gè)重要指標(biāo)，能反映膜系統(tǒng)的受損傷程度，在干旱脅迫下，應(yīng)出現(xiàn)上升趨勢(shì)，對(duì)于白色菊花和黃色菊花呈下降趨勢(shì)的結(jié)果，可以得出兩種推測(cè)：一是白色菊花和黃色菊花對(duì)干旱脅迫不敏感，二是干旱脅迫力度不夠、時(shí)長(zhǎng)不足。對(duì)于類胡蘿卜素含量的測(cè)定，三種菊花均呈下降趨勢(shì)，符合干旱脅迫下類胡蘿卜素的變化趨勢(shì)，但從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，三者下降比例很少，可得出在進(jìn)行干旱處理時(shí)，干旱脅迫的力度不足且時(shí)間不夠長(zhǎng)，導(dǎo)致結(jié)果并不明顯。以上可以為干旱脅迫對(duì)菊花的處理實(shí)驗(yàn)積累經(jīng)驗(yàn)，為測(cè)定更深層次的生理指標(biāo)奠定基礎(chǔ)。