王巖 梁靜

（河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科，河南 洛陽 471003）

冷凍切片是將術(shù)間組織冷凍至硬塊并將其切片，并作為診斷依據(jù)的有效方法。因其制作方便、快捷，故多用于術(shù)間病理診斷[1-2]。然而，診斷進(jìn)程受切片制作時長及染色效果影響，如固定液選擇種類、染色劑設(shè)備、固定時長等[3-4]。目前，無水乙醇、95%乙醇、冷甲醇、無水乙醇乙醚混合液是臨床常見冷凍液，其中冷甲醇是相關(guān)報道中最受認(rèn)可的固定液，其固定效果較為理想，且染色結(jié)果穩(wěn)定可靠，便于操作。但臨床對冷甲醇的固定時間尚無定論，且冷甲醇用于不同組織冷凍切片染色質(zhì)量的研究也相對少見。本研究擬分析冷甲醇固定時間與不同至組織冷凍切片染色質(zhì)量關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

抽取2018年5月至2020年5月我院病理科獲得明確石蠟切片病理診斷結(jié)果的119例冷凍標(biāo)本，其中乳腺結(jié)節(jié)45例、卵巢腫物41例、甲狀腺腫物19例、肺部結(jié)節(jié)14例。根據(jù)冷甲醇固定時間分為A組（40s）、B組（60s）、C組（80s），A組（n＝39例）：乳腺結(jié)節(jié)、卵巢腫物、甲狀腺腫物、肺部節(jié)結(jié)分別為14例、6例、5例、14例；B組（n＝39）：乳腺結(jié)節(jié)、卵巢腫物、甲狀腺腫物、肺部節(jié)結(jié)分別為15例、7例、5例、12例；C組（n＝41）：乳腺結(jié)節(jié)、卵巢腫物、甲狀腺腫物、肺部節(jié)結(jié)分別為16例、6例、4例、15例，三組冷凍標(biāo)本比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究符合2013 年修訂的《赫爾辛基宣言》的要求。

1.2 方法

制片：放置冷甲醇固定液于冷凍機(jī)（品牌：深圳安億達(dá)有限公司；型號：AYD-05A）內(nèi)進(jìn)行預(yù)冷，制冷溫度為-10℃~50℃，同時將術(shù)間取下組織速凍，使用美國櫻花OCT冷凍切片包埋劑（品牌：美國櫻花SAKURA；貨號：4583；產(chǎn)品規(guī)格：118 ml/支），使用期間要清楚包埋劑所生成的氣泡。待組織物變硬后，使用切片機(jī)（英國Campden Instruments，型號：7000 smz /5100 mz）切片，設(shè)置厚度為6～77 μm，連切5張，按A、B、C組冷甲醇固定時間實施，水洗；蘇木素染色時間為50 s，使用自來水清洗，碳酸鉀水溶液（0.05%）于15 s后返藍(lán)，伊紅（1%）20 s，梯度酒精脫水，二甲苯I、II均15 s透明，最后選擇中性樹膠進(jìn)行封片。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 比較三組不同冷凍標(biāo)本的染色情況

選擇我科讀片經(jīng)驗≥5年醫(yī)師，根據(jù)石蠟切片評定標(biāo)準(zhǔn)[5]，評估全部冷凍切片，并給予評分。0分：無法區(qū)分細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞核膜模糊，核質(zhì)難以對比，且染色質(zhì)較為松散；1分：細(xì)胞形態(tài)及其內(nèi)部結(jié)構(gòu)均較為完整，細(xì)胞核膜、核質(zhì)染色達(dá)到區(qū)別標(biāo)準(zhǔn)；2分：細(xì)胞形態(tài)及其內(nèi)部結(jié)構(gòu)、核膜均完整、清晰，核質(zhì)染色區(qū)分顯著，但染色質(zhì)未明顯收縮。

1.3.2 比較三組不同冷凍標(biāo)本的病理分型診斷結(jié)果

以石蠟切片病理診斷結(jié)果為診斷金標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）表示，組間比較采用t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組不同冷凍標(biāo)本的染色情況

將石蠟切片作為對照組。B、C冷凍標(biāo)本質(zhì)量優(yōu)于A組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），詳見表1。

表1 三組不同冷凍標(biāo)本的染色情況（±SD，分）

表1 三組不同冷凍標(biāo)本的染色情況（±SD，分）

注：與對照組相比，*P＜0.05；與A組相比，aP＜0.05。

組別 乳腺結(jié)節(jié) 卵巢腫物 甲狀腺腫物 肺部節(jié)結(jié) A組（n＝39） 0.11±0.01* 1.33±0.14* 0.22±0.01* 0.20±0.02* B組（n＝39） 1.54±0.15a 1.53±0.20 1.47±0.12a 1.52±0.20a C組（n＝41） 1.61±0.10a 1.46±0.18 1.55±0.15a 1.46±0.18a 對照組（n=119） 1.58±1.13 1.50±0.19 1.51±0.13 1.49±0.19

2.2 三組不同冷凍標(biāo)本的病理分型

以石蠟切片病理診斷結(jié)果為診斷金標(biāo)準(zhǔn)，A組、B組、C組乳腺結(jié)節(jié)病理分型診斷準(zhǔn)確率分別為85.71%（12/14）、93.33%（14/15）、100.00%（16/16）；卵巢腫物病理分型診斷準(zhǔn)確率分別為66.67%（4/6）、71.43%（5/7）、83.33%（5/6）；肺部節(jié)結(jié)節(jié)病理分型診斷準(zhǔn)確率分別為85.71%（12/14）、91.67%（11/12）、86.67%（13/15）。三組不同冷凍標(biāo)本病理分型診斷準(zhǔn)確率比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討論

本研究B、C冷凍標(biāo)本質(zhì)量優(yōu)于A組，說明乳腺結(jié)節(jié)、卵巢腫物、甲狀腺腫物、肺部節(jié)結(jié)使用冷甲醇固定液時，不同時間所呈現(xiàn)的染色質(zhì)量不一，其中冷甲醇固定時間為60 s、80 s時，不同組織冷凍切片染色質(zhì)量均較優(yōu)。石蠟切片能準(zhǔn)確定位組織細(xì)胞，長期保存標(biāo)本，維持較好組織細(xì)胞形態(tài)，但保真性較差，易在組織固定、脫水、透明等環(huán)節(jié)中影響抗原性質(zhì)，且操作步驟比石蠟切片更為繁瑣。冷凍切片對抗原保真顯著，且染色過程簡單，適合新鮮組織制片，且固定、染色效果均較佳，多應(yīng)用于手術(shù)中的快速病理診斷[3-4]。此外，B、C組冷凍標(biāo)本在達(dá)到最佳制片情況下有效檢出冷凍標(biāo)本的不同病理分型，說明若冷凍切片質(zhì)量達(dá)標(biāo)，同一病理組織使用同一固定液后，其病理分型固定時間基本接近。同時，本研究以石蠟切片病理診斷結(jié)果為診斷金標(biāo)準(zhǔn)，A組、B組、C組乳腺結(jié)節(jié)、卵巢腫物及肺部節(jié)結(jié)節(jié)病理分型診斷準(zhǔn)確率均高于75%，三組不同冷凍標(biāo)本病理分型診斷準(zhǔn)確率比較無顯著差異，可能與本研究標(biāo)本數(shù)量尤其是不同病理分型冷凍標(biāo)本數(shù)量較少有關(guān)。此外，切片質(zhì)量還與其他環(huán)節(jié)有關(guān)，如切片固定后使用冷風(fēng)干燥可降低脫片概率。但也有與之相反結(jié)論，認(rèn)為無論冷風(fēng)或熱風(fēng)均無法降低脫片概率，且冷熱風(fēng)有損切片染色質(zhì)量，尤其是淋巴組織[5]。因此，本研究認(rèn)為，冷甲醇固定時間為60s、80s時，不同組織冷凍切片染色質(zhì)量均較優(yōu)，但其對最終診斷結(jié)果的影響不顯著。而最佳冷凍切片需要探索固定時間、液體、材料等諸多環(huán)節(jié)，尋找最佳組織并將其合力，才能為臨床診斷提供較好依據(jù)。