蘭清秀 ，柯斌榕 ，馬 璐 ，盧政輝 **，范青海

（1．福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，福建 福州 350014；2．特色食用菌繁育與栽培國(guó)家地方聯(lián)合工程研究中心，福建 福州 350014；3．新西蘭第一產(chǎn)業(yè)部植物與環(huán)境保護(hù)實(shí)驗(yàn)室，新西蘭 奧克蘭 1140）

害長(zhǎng)頭螨（Dolichocybe perniciosa） 隸屬于蛛形綱（Arachnida）蜱螨亞綱（Acari）絨螨目（Trombidiformes） 長(zhǎng)頭螨科（Dolichocybidae），是食用菌的重要害螨之一；主要為害金針菇（Flammulina velutipes）、黑木耳 （Auricularia auricula）、毛木耳（Auricularia polytricha）、香菇 （Lentinula edodes）、銀耳 （Tremella fuciformis） 和靈芝 （Ganoderma lingzhi）等木生型食用菌[1]。

我國(guó)學(xué)者鄒萍對(duì)害長(zhǎng)頭螨的形態(tài)特征進(jìn)行了詳細(xì)描述，并對(duì)其生活史、為害習(xí)性和防治方法進(jìn)行了簡(jiǎn)單闡述[2]。害長(zhǎng)頭螨屬膨腹型螨類(lèi)，其生活史與大部分螨類(lèi)有明顯差別，一生只有卵和成螨2個(gè)時(shí)期，無(wú)幼螨期和若螨期。成螨發(fā)育時(shí)后端膨大，形成膨腹體，膨腹體內(nèi)產(chǎn)生數(shù)十粒至數(shù)百粒卵；卵在母體內(nèi)直接發(fā)育為成螨，當(dāng)膨腹體內(nèi)絕大部分成螨從后半體端部鉆出，母體發(fā)育終止[3]。18℃～28℃是害長(zhǎng)頭螨較適宜的繁殖發(fā)育溫度。適宜的濕度范圍較廣，溫度25℃，22%～92%相對(duì)濕度下，害長(zhǎng)頭螨均能完成膨腹繁殖[4]。該螨繁殖速度快，耐寒和耐饑能力強(qiáng)，喜溫暖和潮濕的環(huán)境；當(dāng)環(huán)境干燥時(shí)，會(huì)轉(zhuǎn)入休眠狀態(tài)，肉眼難以發(fā)現(xiàn)，一旦條件適宜，將會(huì)迅速爆發(fā)。該螨的危害貫穿于食用菌栽培整個(gè)周期，即可為害栽培種，還能侵染母種和原種[3]。害長(zhǎng)頭螨不僅取食菌絲和子實(shí)體，還能取食和傳播木霉、黑孢霉、鐮刀菌等雜菌，一旦發(fā)生，常令栽培者束手無(wú)策，造成重大經(jīng)濟(jì)損失[5-7]。由于害長(zhǎng)頭螨喜歡鉆入培養(yǎng)料中取食，形成膨腹體進(jìn)行繁殖，藥劑不易直接接觸到螨。

針對(duì)害長(zhǎng)頭螨的防治，目前主要是在菌絲培養(yǎng)階段定時(shí)噴施消毒劑，如采用“炔螨特”進(jìn)行空間消毒，減少蟲(chóng)源，并在開(kāi)袋后使用阿維菌素加聯(lián)苯菊酯噴霧等方法進(jìn)行防治，但藥劑防治常導(dǎo)致菌絲和子實(shí)體損傷，防治效果不佳[8-9]。食用菌生產(chǎn)者對(duì)該螨的防控處于被動(dòng)狀態(tài)，害長(zhǎng)頭螨的潛在威脅十分突顯，然而我國(guó)目前對(duì)食用菌膨腹型螨類(lèi)的生物學(xué)特性研究較少，急需加強(qiáng)有關(guān)膨腹型螨類(lèi)繁殖發(fā)育規(guī)律和爆發(fā)為害預(yù)防措施的研究。

有關(guān)害長(zhǎng)頭螨在不同溫度、濕度和寄主條件下的生長(zhǎng)發(fā)育情況、雌成螨膨腹體的形成和壽命、抗逆能力、爆發(fā)性發(fā)生原因等的研究?jī)H見(jiàn)少量報(bào)道[1-3]。主要原因在于害長(zhǎng)頭螨未膨腹時(shí)個(gè)體微小，雌螨長(zhǎng)約為0.17 mm、寬約為0.10 mm，雄螨長(zhǎng)約為0.14 mm、寬約為0.08 mm[1]。害長(zhǎng)頭螨形成膨腹體后，輕輕觸碰就可能導(dǎo)致破裂。然而目前未見(jiàn)可行的觀察方法，操作起來(lái)非常困難。為找到簡(jiǎn)便的觀察方法，經(jīng)過(guò)反復(fù)試驗(yàn)，摸索出了一種便于觀察害長(zhǎng)頭螨發(fā)育繁殖過(guò)程的新方法切孔法。通過(guò)詳細(xì)介紹該方法，旨在明晰害長(zhǎng)頭螨的繁殖發(fā)育特征，以及為膨腹型螨類(lèi)的研究提供技術(shù)參考。

1 試驗(yàn)材料

1.1 供試螨

害長(zhǎng)頭螨，從福建省福州市羅源縣金針菇菌包中獲得，純化后接入長(zhǎng)滿(mǎn)金針菇菌絲的玻璃培養(yǎng)皿或試管中，置于25℃、相對(duì)濕度為（75±5）%的無(wú)光照培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

1.2 供試食用菌

試驗(yàn)用金針菇為福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所保存種。將食用菌菌絲接入直徑3 cm、高1 cm，內(nèi)含PDA（馬鈴薯∶葡萄糖∶瓊脂=10∶1∶1） 培養(yǎng)基的塑料培養(yǎng)皿中，置于25℃、相對(duì)濕度為（75±5）%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)皿，備用。

1.3 試驗(yàn)方法

先將食用菌菌絲，接入裝有已滅菌的PDA培養(yǎng)基的小培養(yǎng)皿上，待菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)，在長(zhǎng)滿(mǎn)菌絲的培養(yǎng)基中間切一個(gè)直徑為1 cm的圓孔，使圓孔壁傾斜30°～45°，然后用經(jīng)過(guò)削細(xì)的鴨羽毛尖端（約0.2 mm），輕輕挑取1只或30只害長(zhǎng)頭螨雌成螨至圓孔中。培育條件為溫度25℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 害長(zhǎng)頭螨個(gè)體培養(yǎng)

將1只害長(zhǎng)頭螨雌螨接入長(zhǎng)有金針菇菌絲的培養(yǎng)皿，重復(fù)20次。害長(zhǎng)頭螨雌螨個(gè)體培養(yǎng)發(fā)育周期見(jiàn)表1。

表1 害長(zhǎng)頭螨雌螨個(gè)體培養(yǎng)發(fā)育周期Tab.1 The reproductive cycle of Dolichocybe perniciosa female by individual feeding

從表1可以看出，24 h后超過(guò)60%的螨已固定位置取食。其余螨繼續(xù)爬行，少數(shù)螨死亡。第3天，螨的活動(dòng)趨于穩(wěn)定，固定取食率達(dá)90%以上，膨腹率逐漸升高。第10天開(kāi)始，膨腹體開(kāi)始產(chǎn)出少量成螨，膨腹率在第15天達(dá)最高。溫度25℃，相對(duì)濕度為（75±5）%條件，個(gè)體培養(yǎng)害長(zhǎng)頭螨，以有成螨爬出為標(biāo)準(zhǔn)，完成一代最快為10 d。

2.2 害長(zhǎng)頭螨群體培養(yǎng)

溫度25℃，將從同一膨腹體內(nèi)剛爬出的30只害長(zhǎng)頭螨雌螨接入內(nèi)含金針菇菌絲，且中間切有小圓孔的培養(yǎng)皿內(nèi)，重復(fù)4次。害長(zhǎng)頭螨雌螨群體培養(yǎng)發(fā)育周期見(jiàn)表2和圖1。

表2 害長(zhǎng)頭螨雌螨群體培養(yǎng)發(fā)育周期Tab.2 The reproductive cycle of Dolichocybe perniciosa female by group feeding

從表2和圖1可以看出，24 h后，雌螨陸續(xù)開(kāi)始固定取食，固定在菌絲表面取食，最快48 h開(kāi)始膨腹；第6天，可清晰觀察到菌絲表面的膨腹體（圖1a）。也可能固定在圓孔環(huán)壁上取食并膨腹，這時(shí)后端膨大的膨腹體剛好落在中間小圓孔內(nèi)（圖1b），通過(guò)生物顯微鏡便可清晰地觀察到膨腹體內(nèi)卵發(fā)育至成螨的整個(gè)過(guò)程。試驗(yàn)條件下，群體培養(yǎng)害長(zhǎng)頭螨，完成一代最快需要6 d～7 d[4]。

圖1 害長(zhǎng)頭螨膨腹體Fig.1 Physogastric body of Dolichocybe perniciosa

3 討論與結(jié)論

在食用菌栽培過(guò)程中，害螨常與害蟲(chóng)、病菌混合發(fā)生。目前已知對(duì)食用菌造成較嚴(yán)重危害的主要有粉螨科（Acaridae）、跗線螨科（Tarsonemidae）、矮蒲螨科（Pygmephoridae）、薄口螨科（Histiostomatidae） 和長(zhǎng)頭螨科（Dolichocybidae） 等螨類(lèi)。其以若螨、成螨直接取食菌絲或子實(shí)體，甚至把菌絲吃光，同時(shí)傳播大量病菌，造成不發(fā)菌或出現(xiàn)“退菌”現(xiàn)象，蛀食食用菌子實(shí)體根部形成空洞，影響鮮菇品質(zhì)，造成重大經(jīng)濟(jì)損失。

食用菌上發(fā)生的大部分的螨類(lèi)一生有卵期、幼螨期、前若螨期、后若螨期和成螨期5個(gè)時(shí)期。螨類(lèi)常見(jiàn)的繁殖方式有兩性生殖和孤雌生殖。然而害長(zhǎng)頭螨是膨腹型螨類(lèi)，屬營(yíng)卵胎生，當(dāng)其膨腹前即固定取食，不再移動(dòng)位置，這與其他螨類(lèi)的發(fā)育繁殖方式完全不同[10-12]。

試驗(yàn)表明，害長(zhǎng)頭螨群體培養(yǎng)時(shí)完成一代的時(shí)間比個(gè)體培養(yǎng)時(shí)間短，推測(cè)害長(zhǎng)頭螨喜群體生活，這也符合生產(chǎn)中害長(zhǎng)頭螨一旦爆發(fā)就成片為害的特點(diǎn)。如果雌螨不在圓孔的環(huán)壁上取食，可將已固定取食的膨腹體連同菌絲塊一起挑至新的切有上述圓孔培養(yǎng)皿中，繼續(xù)培養(yǎng)，即可清晰地觀察到害長(zhǎng)頭螨在膨腹體內(nèi)由卵發(fā)育至成螨的生長(zhǎng)發(fā)育全過(guò)程，便于得到同一時(shí)期的大量螨源。

在實(shí)際操作過(guò)程中，經(jīng)過(guò)重復(fù)驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)害長(zhǎng)頭螨常在環(huán)壁上固定取食，這便于害長(zhǎng)頭螨的觀察和試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)。然而將1只在菌絲表面已經(jīng)固定取食的害長(zhǎng)頭螨膨腹體連同菌絲塊一起挑至新的切有上述圓孔的培養(yǎng)皿中時(shí)，有些膨腹體經(jīng)移動(dòng)后發(fā)育延遲，有些則可正常發(fā)育，由此推斷害長(zhǎng)頭螨個(gè)體對(duì)環(huán)境的變化有不同的敏感度，個(gè)體發(fā)育間可能存在差異。同樣的環(huán)境條件下，害長(zhǎng)頭螨的膨腹體卻形態(tài)多樣，且個(gè)體的膨腹速度不完全一致[13]，導(dǎo)致這些情況的原因還不明確，有待進(jìn)一步探究。

此外，試驗(yàn)觀察到害長(zhǎng)頭螨取食白色的菌絲后，體色轉(zhuǎn)為白色，按常規(guī)方法將害長(zhǎng)頭螨接入到長(zhǎng)滿(mǎn)白色菌絲的培養(yǎng)皿或菌袋中，需觀察害長(zhǎng)頭螨膨腹體內(nèi)卵至成螨的具體發(fā)育過(guò)程很困難，無(wú)法準(zhǔn)確判斷膨腹體內(nèi)的卵和成螨的數(shù)量，無(wú)法獲得試驗(yàn)所需的同一時(shí)期大量螨源，從而批量挑取成螨。這種觀察新方法突破了這些難點(diǎn)。適用于膨腹型螨類(lèi)，特別是取食食用菌菌絲的膨腹型螨類(lèi)，如害長(zhǎng)頭螨、申菇長(zhǎng)頭螨、木耳盧西螨[14-15]的生物學(xué)特性研究，具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。