薛云松，鄧德耀，李麗莉，周林華，李宜錚，顧津伊，劉建梅

(云南省第二人民醫(yī)院檢驗科，云南 昆明 650000)

0 引言

隨著科學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)也在不斷進(jìn)步，同時醫(yī)學(xué)檢驗儀器也日新月異。為滿足患者和臨床科室的需求，我科室使用強(qiáng)生Vitros350全自動干式生化分析儀進(jìn)行急診生化部分項目的檢測。根據(jù)CNAS-CL02：2012《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》[1]和衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 420-2013《臨床實驗室對商品定量試劑盒分析性能的驗證》[2]的要求，未經(jīng)修改而使用的已確認(rèn)的檢驗程序應(yīng)在常規(guī)使用前經(jīng)過實驗室的獨立驗證；當(dāng)同樣的檢驗應(yīng)用不同程序或設(shè)備，或在不同地點進(jìn)行，或以上各項均不同時，應(yīng)有確切機(jī)制以驗證整個臨床適用區(qū)間內(nèi)檢驗結(jié)果的可比性。為此，我們對在用的強(qiáng)生Vitros350全自動干式生化分析儀的性能進(jìn)行驗證，以確定其是否符合臨床要求。

1 材料與方法

1.1 儀器

美國強(qiáng)生Vitros 350全自動干式生化分析儀。

1.2 試劑

強(qiáng)生公司原裝配套干片試劑及校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，全部實驗過程使用同一批號的試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，且都在有效期內(nèi)。

1.3 樣本來源

本院健康體檢人員新鮮血清和Vitros 350配套的正常、異常水平質(zhì)控品和多水平濃度校準(zhǔn)品。

1.4 評價內(nèi)容

根據(jù)美國臨床實驗室修正法規(guī)((Clinical Laboratory Improvement Amendments，CLIA’88)，描述一個檢測系統(tǒng)分析性能的指標(biāo)包括：精密度、正確度、患者結(jié)果可報告范圍、分析靈敏度、分析特異性、參考區(qū)間、其它必須的性能七個方面[3]。根據(jù)實際工作中急診生化臨床申請較多的項目，我們選擇對K、Ca、GLU、AMYL、BUN、AST 6個項目的精密度、正確度、線性、參考區(qū)間四個方面進(jìn)行驗證。所有實驗均在本科室常規(guī)環(huán)境下完成。

1.4.1 批內(nèi)精密度實驗

參考CLSI EP15-A2[4]文件，同一天內(nèi)連續(xù)運(yùn)行兩個濃度水平質(zhì)控品各20次，記錄檢測結(jié)果，計算批內(nèi)精密度的均值、SD和CV。并計算精密度指數(shù)=驗證SD/廠商SD，精密度指數(shù)小于等于1，或者實測CV≤1/4允許總誤差要求，允許總誤差參考臨床生物化學(xué)常規(guī)項目分析質(zhì)量指標(biāo)[5]，兩者符合其一即表明結(jié)果可接受。

1.4.2 批間精密度實驗

參考CLSI EP15-A2[4]文件，連續(xù)5天測試兩個水平質(zhì)控品，每天各檢測3次，記錄檢測結(jié)果，計算批間精密度的均值、SD和CV。并計算精密度指數(shù)=驗證SD/廠商SD，精密度指數(shù)小于等于1，或者實測CV≤1/3允許總誤差要求，允許總誤差參考臨床生物化學(xué)常規(guī)項目分析質(zhì)量指標(biāo)[5]，兩者符合其一即表明結(jié)果可接受。

1.4.3 正確度實驗

評價期間確保儀器正常運(yùn)轉(zhuǎn)，室內(nèi)質(zhì)控在控，參考CLSI EP15-A2[4]文件，在儀器上檢測與項目校準(zhǔn)時不同批號的定值標(biāo)準(zhǔn)品(多水平)，每個水平重復(fù)2次，計算均值，并與靶值進(jìn)行比較，按相對偏倚(%)=(均值-靶值)/靶值×100%計算均值與靶值的相對偏倚(%)，偏倚要小于臨床生物化學(xué)常規(guī)項目分析質(zhì)量指標(biāo)[5]中允許總誤差的1/2。

1.4.4 線性實驗

參考CLSI EP6-A[6]文件，收集高濃度的標(biāo)本盡可能的接近線性范圍上限，將高濃度(H)和低濃度(L)樣品各一份按：5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H關(guān)系各自配制混合，形成6個濃度系列評價樣品，將實測值與理論值做比較，將理論值設(shè)為x，實測值設(shè)為y，計算回歸方程：y=bx+a，驗證線性范圍。檢測結(jié)果要滿足相關(guān)系數(shù)(r2)＞0.95，b值在0.97～1.03范圍內(nèi)，a接近于0。

1.4.5 參考區(qū)間驗證實驗

參考CLSI C28-A3c[7]文件的要求，選擇20個男女比例各半能夠代表實驗室的健康總體的血清標(biāo)本，連續(xù)上機(jī)測定?？紤]性別和年齡比例，同批測定，計算R值(落在參考范圍內(nèi)的樣本數(shù)/總的試驗樣本數(shù))，R值≥0.95為判斷標(biāo)準(zhǔn)。檢測項目的報告參數(shù)95%的檢測值在參考范圍內(nèi)為合格。

2 結(jié)果

2.1 批內(nèi)精密度驗證結(jié)果

K、Ca、GLU、AMYL、BUN、AST的正常水平的CV值在0.68%-2.43%之間，異常水平的CV值在0.71%-1.56%之間，批內(nèi)精密度結(jié)果均符合要求，儀器的批內(nèi)精密度良好。詳見表1。

表1 批內(nèi)精密度檢測結(jié)果

2.2 批間精密度驗證結(jié)果

K、Ca、GLU、AMYL、BUN、AST的正常水平的CV值在1.6%-2.72%之間，異常水平的CV值在0.74%-2.09%之間，批間精密度結(jié)果均符合要求，儀器的批間精密度良好。詳見表2。

表2 批間精密度檢測結(jié)果

2.3 正確度驗證結(jié)果

K、Ca、GLU、AMYL、BUN、AST六個項目的偏倚值均小于各項目的允許偏倚，正確度檢測結(jié)果均在相應(yīng)的定值質(zhì)控品標(biāo)識的允許范圍內(nèi)。詳見表3。

表3 正確度檢測結(jié)果

2.4 線性驗證結(jié)果

K、Ca、GLU、AMYL、BUN、AST六個項目的相關(guān)系數(shù)(r2)值均＞0.95，而b值均在0.97～1.03范圍之內(nèi)，表明線性驗證結(jié)果可接受。詳見表4。

表4 線性范圍檢測結(jié)果

2.5 參考區(qū)間驗證結(jié)果

通過檢測20例健康體檢者的血清，男女各10例；K、Ca、GLU、AMYL、BUN、AST檢測結(jié)果均在參考范圍之內(nèi)，大于允許值90%，因此我室目前的參考區(qū)間經(jīng)驗證可用。詳見表5。

表5 參考區(qū)驗證結(jié)果

3 討論

根據(jù)CNAS-CL02：2012《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》[1]要求，實驗室應(yīng)確定設(shè)備在安裝和常規(guī)使用中能達(dá)到要求的性能標(biāo)準(zhǔn)，并且符合檢驗所要求的條件。精密度是指在獨立條件下獲得的檢測結(jié)果間的一致程度，是檢測系統(tǒng)分析性能的重要指標(biāo)之一[8]，也是檢測系統(tǒng)最基本的性能要求。從表1和表2可以看出強(qiáng)生Vitros 350所測得的批內(nèi)、批間精密度結(jié)果均小于相關(guān)要求，說明該儀器驗證的精密度性能與廠家聲明具有一致性。正確度反映儀器系統(tǒng)偏差大小，即大量測定的均值與真值的接近程度[9]，用偏倚表示。從表3可看出該儀器在本實驗室內(nèi)測得的結(jié)果其偏倚均小于臨床生物化學(xué)常規(guī)項目分析質(zhì)量指標(biāo)中相應(yīng)項目的允許總誤差的1/2，說明該儀器測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。線性是反映實驗方法性能特征的重要指標(biāo)，也是保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的重要條件，只有標(biāo)本含量與測定結(jié)果呈線性，才能保證測定結(jié)果的準(zhǔn)確可靠，是評價試劑檢測性能的重要指標(biāo)之一[10]。本實驗室線性范圍驗證的結(jié)果與廠家聲明的最高、最低水平非常接近，相關(guān)系數(shù)(r2)均＞0.95，a值均在0.97—1.03的范圍之內(nèi)，線性驗證結(jié)果可接受，可滿足臨床患者的樣本檢測需求。參考區(qū)間是指在上、下限參考限之間的參考值分布范圍，用于評估人群數(shù)值的指定百分位數(shù)(通常為95%)范圍。臨床實驗室應(yīng)建立本實驗室的參考范圍，在應(yīng)用該參考范圍前先對其進(jìn)行必要的驗證[11]。本實驗室參考區(qū)間的驗證結(jié)果95%均在參考區(qū)間范圍內(nèi)，說明本實驗室的參考區(qū)間經(jīng)驗證可接受。本實驗室對精密度、正確度、線性范圍和參考區(qū)間的驗證結(jié)果均符合廠家聲明，本儀器可應(yīng)用于臨床。

強(qiáng)生Vitros 350干式生化分析儀可24小時運(yùn)行；操作簡便，使用前無需試劑預(yù)處理，不需純水清洗處理系統(tǒng)，無需反應(yīng)杯，每個標(biāo)本所有項目檢測只需一個一次性吸頭，避免了濕化學(xué)檢測中常見的交叉污染；而且標(biāo)本需要量小，滿足兒童和老年人不易采集標(biāo)本的患者，而且檢測速度快，可連續(xù)、隨機(jī)上樣并具有急診插入功能，可真正實現(xiàn)隨機(jī)樣本分析，特別適用于急診生化樣本的檢測；檢驗科所有工作人員經(jīng)過培訓(xùn)后都能熟練操作，能很好的滿足臨床對急診病人的診療需求。但檢測系統(tǒng)并不是固定不變的，受多種因素的影響，實驗室工作人員必須嚴(yán)格按照實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行操作，及時對儀器進(jìn)行維護(hù)和保養(yǎng)，開展規(guī)范的室內(nèi)質(zhì)量控制，參加室間質(zhì)量評價計劃；才能為臨床提供及時、準(zhǔn)確、可靠的檢驗結(jié)果。