張友冬

摘 要 目的：驗證總有機碳法測定鹽酸林可霉素清潔殘留物的準(zhǔn)確性。方法：根據(jù)總有機碳法中測定值與濃度正相關(guān)的特性來判定林可霉素殘留量。結(jié)果：該檢驗方法在0.5～2.0 μg/ml濃度范圍有較好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2=0.998 6，檢測限與定量限分別為0.504 9 和1.530 3 μg/ml，最低擦拭回收率為73.5%。結(jié)論：該方法簡便、快捷、準(zhǔn)確，適合林可霉素注射液生產(chǎn)結(jié)束清潔后殘留量的檢測。

關(guān)鍵詞 總有機碳法 林可霉素 清潔殘留 驗證 方法學(xué)

中圖分類號：R951 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1006-1533（2021）09-0067-04

Determination of lincomycin hydrochloride residue in cleaning verification by TOC method

ZHANG Youdong*

（Shanghai Sine-Jinzhu Pharmaceutical Co.， Ltd.， Shanghai 201506， China）

ABSTRACT Objective： To validate the accuracy of determination of lincomycin hydrochloride residue after cleaning by total organic carbon （TOC） method. Methods： The residue concentrations were determined based on the positive correlation between the measured value and the concentration in the TOC method. Results： A good linear relationship was shown when lincomycin hydrochloride concentrations were in the range of 0.5-2.0 mg/ml， with correlation coefficient R2=0.998 6. The limits of detection and quantification were 0.504 9 and 1.530 3 mg/ml， with minimum wipe recovery rate 73.5%. Conclusion： This method is simple， quick and accurate and is suitable for the detection of the cleaning residue after lincomycin hydrochloride production.

KEy WORDS total organic carbon method； lincomycin hydrochloride； cleaning residue； validation； methodology

藥品的生產(chǎn)過程中，由于不同產(chǎn)品共用一條生產(chǎn)線，因此在更換產(chǎn)品時如不注意極易造成微量交叉污染，需要對生產(chǎn)條線重新進(jìn)行清潔驗證，其前提是需要有合適的方法對目標(biāo)化合物進(jìn)行檢驗，即檢驗分析方法學(xué)驗證。在我們的生產(chǎn)線上，根據(jù)產(chǎn)品清潔的難易程度及綜合溶解度和濃度檢測[1]，發(fā)現(xiàn)鹽酸林可霉素是最難清潔的殘留藥物。按照清潔驗證分別采用MTDD法、10 ppm法和LD50法[2]進(jìn)行計算，選擇最低殘留濃度為≤1.72 mg/ml，在此殘留濃度下我們通過HPLC方法測試，無法滿足方法學(xué)驗證要求，通過對總有機碳（TOC）法測定林可霉素殘留物的分析方法驗證開發(fā)[3]，以保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

1 材料和方法

1.1 儀器

HTY-DI1500總有機碳分析儀（浙江泰林生物技術(shù)有限公司）；BASA124S分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 試藥

鹽酸林可霉素標(biāo)準(zhǔn)品（批號130432-201911）、蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品（批號111507-201704）和1，4-對苯醌標(biāo)準(zhǔn)品（101197-201904）均購自中國食品藥品檢定研究院。

1.3 方法

根據(jù)《藥品生產(chǎn)驗證指南》采用10 ppm法，以日治療量的1/1 000及基于毒性半數(shù)致死量確認(rèn)最低殘留檢測限度為1.72 mg/ml，用鹽酸林可霉素標(biāo)準(zhǔn)品（以C18H37N5O9計）配制成一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用總有機碳（TOC）測試儀檢測不同濃度溶液所對應(yīng)的TOC響應(yīng)值，將所測得的TOC響應(yīng)值和鹽酸林可霉素濃度關(guān)系式建立TOC測定值與鹽酸林可霉素含量之間的線性關(guān)系[4-8]。

1.3.1 系統(tǒng)適用性實驗

使用蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品（111507-201704）配制成質(zhì)量濃度為0.5 mg/L的蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液，作為易氧化的有機物，并測定其響應(yīng)值（Rs）。使用1，4-對苯醌標(biāo)準(zhǔn)品（101197-201904）配制成質(zhì)量濃度為0.5 mg/L的1，4-對苯醌標(biāo)準(zhǔn)溶液，作為系統(tǒng)適用性難氧化的有機化合物，并測定其響應(yīng)值（Rss）。同時測定用于配制兩瓶標(biāo)準(zhǔn)溶液的空白試劑注射用水的響應(yīng)值（Rw）。當(dāng)響應(yīng)效率R=（Rss-Rw）/（Rs-Rw）×100%達(dá)到85%～115%，則符合要求。

1.3.2 鹽酸林可霉素的校準(zhǔn)曲線

用注射用水配制鹽酸林可霉素標(biāo)準(zhǔn)品母液的質(zhì)量濃度為100 mg/ml，然后稀釋成系列供試液，測定每種濃度的溶液總有機碳值，并將林可霉素溶液濃度為橫坐標(biāo)、總有機碳值為縱坐標(biāo)作線性圖。

1.3.3 擦拭回收率

稱取林可霉素標(biāo)準(zhǔn)品適量，用注射用水分別配制成質(zhì)量濃度為68.8、86.0、103.2 mg/ml的鹽酸林可霉素溶液。

分別精密量取上述溶液1.0 ml，均勻涂布在劃有多個與設(shè)備表面材質(zhì)相同的10 cm×10 cm方塊的不銹鋼板上，每種濃度各涂3塊，于40 ℃恒溫干燥箱中烘干6 h后取出，放冷。用潤濕的棉簽用力且平穩(wěn)緩慢地逐一擦拭10 cm×10 cm方塊的不銹鋼板表面，在向前移動的同時將其從一邊移到另一邊并覆蓋整個表面，翻轉(zhuǎn)棉簽頭，將棉簽頭的另一面也在10 cm×10 cm方塊的不銹鋼板表面上與前次方向垂直擦拭整個表面（圖1）。擦拭完后將棉簽頭小心剪下，分別置50 ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

1.3.4 準(zhǔn)確度

分別精密量取上述68.8、86.0、103.2 mg/ml三種濃度的林可霉素溶液1.0 ml各3份，置于50 ml量瓶中，用注射用水稀釋至刻度，搖勻。按照TOC測試儀操作規(guī)程，測試低、中、高3個濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液樣品的TOC值。

1.3.5 精密度

精密量取上述86.0 mg/ml的鹽酸林可霉素溶液5 ml置于250 ml量瓶中，用注射用水稀釋至刻度，搖勻。按照TOC測試儀操作規(guī)程，連續(xù)測試?yán)碚摑舛葹?.72 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液樣品6次，記錄TOC值。

2 結(jié)果

2.1 儀器性能確認(rèn)

系統(tǒng)適用性實驗結(jié)果表明0.5 mg/L蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液與1，4-對苯醌標(biāo)準(zhǔn)溶液響應(yīng)效率分別為98.9%與98.6%，符合響應(yīng)效率R達(dá)到85%～115%要求（表1）。

2.2 鹽酸林可霉素的校準(zhǔn)曲線

采用TOC法測定不同濃度下的鹽酸林可霉素溶液總有機碳值，將表2數(shù)據(jù)經(jīng)線性回歸分析，其回歸方程y=0.356 8x+0.054 6，R2=0.998 6，相關(guān)系數(shù)R2>0.98[2]。檢測限：LOD=3.3 SD/B；定量限：LOQ=10 SD/B（SD為校正曲線的截距作為標(biāo)準(zhǔn)差；B為校正曲線的斜率）[3]。通過計算得出檢測限和定量限分別為0.504 9和1.530 3 mg/ml，表明這兩者均低于鹽酸林可霉素注射液實際殘留檢測限度。

按照TOC測試儀操作規(guī)程，測試供試品的TOC值。由于配制鹽酸林可霉素溶液含有試劑空白水和鹽酸林可霉素標(biāo)準(zhǔn)品中的有機雜質(zhì)，所以直接用線性關(guān)系式計算鹽酸林可霉素濃度，棉簽、鋼板、試管、及鹽酸林可霉素中有機雜質(zhì)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于空白試劑注射用水的TOC值，故忽略不計。當(dāng)y=0時，x=0.153 mg/L即為標(biāo)準(zhǔn)溶液配制背景TOC含量，來源于空白試劑水及鹽酸林可霉素標(biāo)準(zhǔn)品中有機雜質(zhì)。

2.3 擦拭回收率

考察了在三種濃度下TOC測試值與理論濃度的回收率，結(jié)果證實本方法的回收率較高（表3），能夠滿足回收率>50%且RSD<20%的要求。

2.4 準(zhǔn)確度

選擇3種不同濃度的樣品進(jìn)行測試，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定鹽酸林可霉素含量，實驗結(jié)果能夠滿足準(zhǔn)確度RSD≤1%的要求（表4）。

2.5 精密度

選擇理論殘留限度作為精密度濃度的測試標(biāo)準(zhǔn)，平行測定6次，實驗結(jié)果表明，RSD為1.23%，符合準(zhǔn)確度RSD≤2%驗證檢驗要求（表5）。

3 討論

鹽酸林可霉素（以C18H37N5O9計）分子量為461.02，其含碳百分比為46.85%，TOC可以在一個很高的靈敏度條件下檢測總有機碳。TOC分析儀可以檢測所有的有機殘留，包括培養(yǎng)基和淸洗工藝中的降解物質(zhì)。由于TOC檢測的是所有有機成分，很難區(qū)分檢測的物質(zhì)是產(chǎn)品有機殘留還是其他有機混合物，所以，TOC方法代表的是“最差情況”；另一方面，在取樣和測試的過程中也有可能會引入污染物，所以所有的取樣人員必須經(jīng)過嚴(yán)格的培訓(xùn)并掌握淸洗取樣的技術(shù)，尤其要注意取樣工具不要對檢測結(jié)果帶來干擾。本研究建立的這種非特定方法的優(yōu)點是靈敏度高、且對多成分化合物有效，缺點是缺乏識別具體分析物的專屬性、測定結(jié)果可受其他殘留物的干擾；文獻(xiàn)報道的一些特定方法（高效液相法、滴定法）靈敏度高、能用于相關(guān)化合物的定量測定，但其缺點是不能檢查更大范圍的化合物、研究成本高、結(jié)果也可能受殘留物干擾[9]。

參考文獻(xiàn)

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