劉晶　劉澤楷　劉燕茹

摘要：近幾年來(lái)，由于子宮頸癌等前期疾病的發(fā)生率明顯提高，女性癌癥死亡的主要因素之一仍然是子宮頸癌。子宮頸癌一般多發(fā)于三十至六十多歲的婦女，近年來(lái)子宮頸癌的發(fā)生女性也越來(lái)越年輕化了。所以，關(guān)于宮頸癌的預(yù)防、診斷與治療，已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)界廣泛研究的話題。由于臨床人體實(shí)驗(yàn)具有局限性，導(dǎo)致宮頸癌發(fā)病機(jī)制的研究和新藥的研發(fā)十分困難，需要進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步的研究。本綜述主要介紹子宮頸癌的病理基礎(chǔ)和動(dòng)物模型的建立以及適宜的動(dòng)物模型。

關(guān)鍵詞：子宮頸癌;動(dòng)物模型

宮頸癌（Cervical Cancer，CC）是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，據(jù)世界衛(wèi)生組織2018年統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，全球?qū)m頸癌每年新發(fā)病例近57萬(wàn)人，死亡病例約31.1萬(wàn)例。其中，我國(guó)每年有10.6萬(wàn)新發(fā)宮頸癌病例，并有約4.8萬(wàn)例死亡。當(dāng)前，宮頸癌的發(fā)病逐漸趨于年輕化，嚴(yán)重影響了女性的健康及生活質(zhì)量。

1子宮頸癌的病理基礎(chǔ)

子宮頸癌是出現(xiàn)在女性子宮頸部分的惡性病變癌癥。從肉眼看可分四種類：糜爛型、外生菜花型、內(nèi)生浸潤(rùn)型、潰瘍型。子宮頸癌的組織學(xué)檢查種類主要以鱗狀細(xì)胞癌為主，而原發(fā)性子宮頸腺癌則較為罕見(jiàn)。目前調(diào)查指出，對(duì)經(jīng)性傳播的HPV的病毒感染是子宮頸癌發(fā)生發(fā)展的最重要原因，但它并不是子宮頸癌產(chǎn)生的唯一原因。尤其是與HPV-16、18、31、33、58等和宮頸癌產(chǎn)生有關(guān)的，是高風(fēng)險(xiǎn)亞型。其主要作用機(jī)理是HPV的E6和E7基因與宮頸上皮細(xì)胞的基因體融合后，使惡性腫瘤生長(zhǎng)抑制基因p53和視網(wǎng)膜識(shí)別母細(xì)胞瘤基因RB等失活，改變細(xì)胞的周期和DNA的修復(fù)，誘導(dǎo)基因組不穩(wěn)定，最終導(dǎo)致細(xì)胞永生化和惡性轉(zhuǎn)變。此外，E6和E7基因的表達(dá)還可改變細(xì)胞信號(hào)通路，PI3K/Akt信號(hào)級(jí)聯(lián)在HPV誘導(dǎo)的癌變中起著非常重要的作用，PI3K-AKT信號(hào)通路異常會(huì)可引起腫瘤與糖尿病等多種疾病的發(fā)生。另外，PI3K/AKT信號(hào)還可通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞存活、生長(zhǎng)、增殖、遷移和能量代謝，繼而影響細(xì)胞生物學(xué)作用。該通路的異常激活可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的惡性表型和治療耐藥性，F(xiàn)OXC1可通過(guò)PI3K-AKT信號(hào)通路，促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞增殖及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化;PI3K/AKT/mTOR信號(hào)級(jí)聯(lián)、HPV癌基因表達(dá)的調(diào)節(jié)以及HPV陽(yáng)性癌細(xì)胞對(duì)E6/E7抑制的表型反應(yīng)之間亦存在復(fù)雜的相互作用。

2動(dòng)物模型的建立

在研究與開(kāi)發(fā)宮頸癌新療法的臨床前期階段，建立適合的體外、體內(nèi)模型十分必要，通過(guò)相應(yīng)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，可針對(duì)性地確定各治療藥物、方案抑制宮頸癌的效果和毒副作用。近年來(lái)，腫瘤衍生細(xì)胞系因其易操作性且通過(guò)體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可使宮頸癌細(xì)胞快速增殖，適于大規(guī)模處理，然而，此類細(xì)胞系通常不能在體內(nèi)或體外重現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的微環(huán)境，其模擬宮頸癌特征的能力有限且不能反映其腫瘤細(xì)胞復(fù)雜的異質(zhì)性，繼而導(dǎo)致細(xì)胞系模型實(shí)驗(yàn)的結(jié)果與臨床試驗(yàn)的結(jié)果存在較大差異，因此，宮頸癌細(xì)胞系模型不被認(rèn)為是預(yù)測(cè)新藥研發(fā)與治療的最合適模型。

鑒于上述原因，提出借助建立動(dòng)物宮頸癌模型，使用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)在合適的動(dòng)物體內(nèi)，恢復(fù)了某些人體病癥。經(jīng)過(guò)研究病變的復(fù)制過(guò)程，我們可以探究病變的原因、發(fā)展、變化，以及開(kāi)發(fā)新藥。研究腫瘤必須依靠有效的研究方法和相應(yīng)的模型。由于腫瘤的病理變化是極其復(fù)制的過(guò)程，受許多因素的影響與制約，因此對(duì)于腫瘤發(fā)病機(jī)制的研究不可能完全利用人體去完成，建立相應(yīng)的動(dòng)物模型是必要的。

動(dòng)物的癌癥模型主要包括以下四種：誘發(fā)性癌癥模型、自發(fā)性腫瘤模型、轉(zhuǎn)基因腫瘤模型和可移植性癌癥模型。其中種植腫瘤模型的應(yīng)用頻次較高，其優(yōu)勢(shì)可以總結(jié)為以下幾個(gè)：模型制備方法簡(jiǎn)便、成本低、接種成活率高、易于可觀的診斷效果，所以在動(dòng)物試驗(yàn)中移植腫瘤模型較為普遍。而誘發(fā)性腫瘤模型的制備方法非常簡(jiǎn)單，且重復(fù)性較好，但由于誘發(fā)性腫瘤個(gè)體差異很大，導(dǎo)致病程不同，不適用于藥物篩選[1]。自發(fā)性瘤模型曾應(yīng)用于慢性治療實(shí)驗(yàn)中，成瘤的效率低且不固定，復(fù)制難度較大。轉(zhuǎn)基因腫瘤模型可以從大分子水平上對(duì)宮頸癌基因展開(kāi)深入研究，是一種新的科研途徑，其應(yīng)用前景很大，但是因?yàn)榘嘿F，實(shí)驗(yàn)技術(shù)要求高，不適合普遍應(yīng)用[2]。如使用6～8周齡雌性非肥胖糖尿病/重癥聯(lián)合免疫缺陷（non-obese diabetes/severe combined immuno deficiency，NOD/SCID）和重度免疫缺陷（immunodeficiency，NOG）兩種免疫缺陷小鼠進(jìn)行建模，NOD/SCID小鼠具有接受血液惡性腫瘤和人實(shí)體瘤的優(yōu)點(diǎn)，但其壽命較短，胸腺瘤發(fā)病率高[3]。NOG重度免疫缺陷小鼠基于NOD/SCID建立，不僅缺乏功能性B和T淋巴細(xì)胞而且自然殺傷細(xì)胞完全喪失[4]。

宮頸癌模型的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以鼠最為普遍。首先，鼠的宮頸癌發(fā)展過(guò)程與人子宮頸癌發(fā)展過(guò)程相似，從低度增生發(fā)展到不典型增生，最后轉(zhuǎn)變?yōu)榘Ｆ浯?，雌激素在鼠宮頸癌的發(fā)展中起協(xié)同作用，與流行病學(xué)證實(shí)的雌激素在人子宮頸癌中的作用相一致。后者往往表現(xiàn)為長(zhǎng)期服用口服避孕藥或多產(chǎn)的婦女，其宮頸癌的患病風(fēng)險(xiǎn)增加。最后，因?yàn)樯锊町惡蛯?duì)機(jī)體的免疫反應(yīng)的存在，人宮頸癌腫瘤細(xì)胞很難在普通哺乳動(dòng)物體內(nèi)培養(yǎng)并存活，但由于裸鼠既無(wú)胸腺，也無(wú)生長(zhǎng)發(fā)育形成的T淋巴細(xì)胞，因此不會(huì)產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)，從而保存了人類癌癥的部分病理學(xué)、生物特征，并成為研究人類惡性腫瘤生物特征和篩選抗腫瘤新藥的理想工具。但因?yàn)槁闶笊眢w太過(guò)脆弱，對(duì)治療的耐受性較差，對(duì)飼養(yǎng)條件要求高等，且實(shí)驗(yàn)花費(fèi)高昂等原因，故并不便于廣泛使用[5]。

建立人宮頸癌動(dòng)物模型有著很多種方式，其中目前應(yīng)用較多的方式為小鼠皮下接種癌細(xì)胞，其模型復(fù)制概率為90.20%[6]。其中，背皮下接種應(yīng)用最多。方法為將宮頸組織或細(xì)胞懸液移植背部皮下，以靠近頭部的成功率高。有文獻(xiàn)報(bào)道，皮下種植瘤易于觀察，但很少發(fā)生轉(zhuǎn)移，主要以局部擴(kuò)散為主。但其操作簡(jiǎn)單，潛伏期短，腫瘤生長(zhǎng)速度快。原位移植瘤相較皮下接種，出現(xiàn)的浸潤(rùn)概率更高，然而，由于將人宮頸癌細(xì)胞或組織移植到小鼠子宮需要腹部切口，其位置較深，操作存在很大的技術(shù)難度。但存在著裸鼠皮下移植瘤也可以發(fā)生淋巴結(jié)和肺轉(zhuǎn)移的文獻(xiàn)證明。目前結(jié)果還尚且不統(tǒng)一，因此在實(shí)際應(yīng)用時(shí)，根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、條件以及各種建模方法的利弊去選擇最適合的方法。

在移植前宮頸癌細(xì)胞株篩選上，可采用來(lái)源于鼠的U14癌細(xì)胞，因?yàn)閁14癌細(xì)胞是一個(gè)有持久性、穩(wěn)定性、不可逆性和普遍性特點(diǎn)的可以構(gòu)建鼠宮頸癌模型的細(xì)胞[7]。由于鼠源性腫瘤細(xì)胞和人源性腫瘤細(xì)胞之間的生物特征存在著很大差別，而且又和臨床的實(shí)際狀況相距甚遠(yuǎn)，所以試驗(yàn)結(jié)果對(duì)臨床使用的參考價(jià)值相對(duì)較小。將人宮頸癌HELA細(xì)胞接種在具備正常免疫功能的鼠身上形成的人宮頸癌移植腫瘤模型成瘤率最高，有著與人宮頸腫瘤的組織形態(tài)學(xué)和生物學(xué)特征相同的特性，而且移植腫瘤的生長(zhǎng)發(fā)育情況、回聲類型和血供變化也大致具備人宮頸癌的一般超聲表現(xiàn)特征[8]。

3小結(jié)

子宮頸癌的診斷及防治一直是目前醫(yī)學(xué)工作者科研的難點(diǎn)。通過(guò)建立宮頸癌模式，動(dòng)物將能夠更好地研究宮頸癌的發(fā)病演變過(guò)程和診斷，對(duì)早期宮頸癌的診斷和防治的深入研究將產(chǎn)生促進(jìn)性影響。同時(shí)在一定程度上，對(duì)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)科研還是對(duì)臨床醫(yī)學(xué)工作研究都具有重要意義。理想的動(dòng)物模型要求在發(fā)生部位、類型、病因及發(fā)病機(jī)制、生物學(xué)行為特性等方面都要符合所研究的人類腫瘤。我們所構(gòu)建的模型動(dòng)物必須符合下列要求：構(gòu)建在具備正常免疫功能的哺乳動(dòng)物身上;可以反映機(jī)體的抗腫瘤免疫;同時(shí)具備與人子宮頸癌的組織學(xué)類型與生物行為相同的特征即可。該模型會(huì)隨著宮頸癌防治水平的提高而不斷發(fā)展和完善，進(jìn)一步的滿足實(shí)驗(yàn)研究需求，未來(lái)將希望看到更多的可以滿足不同需求的理想宮頸癌動(dòng)物模型。

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