任琦，許妍，劉桂鳳，徐蘭，鄧維

1.江西省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，江西 南昌 330029；2.解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第九〇八醫(yī)院，江西 南昌 330002

柏子養(yǎng)心丸處方來源于《古今醫(yī)統(tǒng)》卷七葉引《集驗(yàn)方》。上世紀(jì)八十年代初期多家企業(yè)獲得當(dāng)?shù)匦l(wèi)生局批準(zhǔn)并進(jìn)行生產(chǎn)，為國(guó)家基本藥物?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)收載于《中國(guó)藥典》2020 年版一部，處方由炙黃芪、黨參、當(dāng)歸、川芎、朱砂等十三味藥組成，具補(bǔ)氣、安神之功效，用于心悸易驚、失眠多夢(mèng)等癥［1-3］。方中朱砂為硫化物類礦物辰砂族辰砂，主含硫化汞（HgS），具有清心鎮(zhèn)驚，明目，解毒之功效，用于心悸易驚，失眠多夢(mèng)，癲狂發(fā)瘋，小兒驚風(fēng)等癥［4-5］?！吨袊?guó)藥典》2020 年版一部朱砂品種項(xiàng)下規(guī)定：本品含硫化汞（HgS）不得低于96%。因此，含朱砂中藥制劑的總汞含量較高，而通過測(cè)定制劑中硫化汞（HgS）的含量，可以評(píng)價(jià)制劑中所投朱砂的真?zhèn)渭巴稑恿渴欠駵?zhǔn)確，因此有必要對(duì)柏子養(yǎng)心丸中總汞進(jìn)行測(cè)定。而柏子養(yǎng)心丸現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)僅有朱砂的顯微鑒別，未對(duì)其特征性成分加以控制，難以有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，故本研究采用微波消解-電感耦合等離子體-質(zhì)譜法［6-17］建立柏子養(yǎng)心丸中總汞含量測(cè)定方法，以期為柏子養(yǎng)心丸的質(zhì)量評(píng)價(jià)供參考依據(jù)，保證臨床用藥安全。

1 儀器與試藥

Agilent 7700 電感耦合等離子體-質(zhì)譜儀（美國(guó)Agilent Technologies 有限公司）；Sartorius BSA 124SCW 電子天平（德國(guó)Sartorius 公司）；MARS-xpress微波消解儀（美國(guó)CEM 有限公司）；Milli-Q Direct 16 超純水儀（Millipore 中國(guó)有限公司）；GST25-20趕酸儀（上海博通化學(xué)科技有限公司）。

元素內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液（209Bi 內(nèi)標(biāo)元素）：濃度為100 μg/mL，來源于Agilent，批號(hào)：5188-6625；調(diào)諧溶液：來源于安捷倫科技股份有限公司，批號(hào)為5184-3566；汞標(biāo)準(zhǔn)溶液：濃度為1 000 μg/mL，來源于中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，批號(hào)：GBW 08617 13011；硝酸：來源于MERCK，批號(hào)：K48901 356713；超純水：由Milli-Q 超純水儀制得。

7 批柏子養(yǎng)心丸來源于7 個(gè)企業(yè)（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號(hào)：15035315，國(guó)藥準(zhǔn)字Z11020080，規(guī)格：每100 粒重10 g；上海華源制藥安徽廣生藥業(yè)有限公司，批號(hào)：121201，國(guó)藥準(zhǔn)字Z34021073，規(guī)格：每瓶裝60 g；江西藥都樟樹制藥有限公司，批號(hào)：150403，國(guó)藥準(zhǔn)字Z36021835，規(guī)格：每瓶裝60 g；九芝堂股份有限公司，批號(hào)：201412037，國(guó)藥準(zhǔn)字Z43020150，規(guī)格：每瓶裝120 g；湖北諾得勝制藥有限公司，批號(hào)：150102，國(guó)藥準(zhǔn)字Z42020282，規(guī)格：每瓶裝60 g；蕪湖張恒春藥業(yè)有限公司，批號(hào)：1503071，國(guó)藥準(zhǔn)字Z34020946，規(guī)格：每瓶裝36 g；南京同仁堂藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)：140910，國(guó)藥準(zhǔn)字Z32020029，規(guī)格：每瓶裝60 g）。

2 方法與結(jié)果

2.1 儀器設(shè)置條件

電感耦合等離子體-質(zhì)譜儀設(shè)置條件，射頻功率：1 600 W；反應(yīng)模式：氦模式；載氣：氬氣；載氣流速：0.79 L/min；碰撞氣體：氦氣；氦氣流速：4.5 mL/min；泵速：0.10 rps；采樣錐孔徑：1.0 mm；截取錐孔徑：0.4 mm；離子透鏡1∶3.5 V；離子透鏡2∶-99.5 V；數(shù)據(jù)采集次數(shù)：3 次。

微波消解程序：消解功率800 W，25 min 內(nèi)升溫至150 ℃，保持5 min，再以5 ℃/min 升至180 ℃，保持25 min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液的制備取柏子養(yǎng)心丸0.5 g，精密稱定，置消解罐中，加硝酸6 mL，置微波消解儀中進(jìn)行消解，消解完全后，消解罐自然冷卻至室溫，將消解液轉(zhuǎn)入50 mL 量瓶中，用水少量多次洗滌消解罐，洗液合并于量瓶中，用水稀釋至刻度，即得。再精密吸取上述溶液100 μL，置250 mL 容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。同法同時(shí)制備試劑空白樣品溶液。

2.2.2 內(nèi)標(biāo)溶液的制備精密量取209Bi 內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL，置100 mL 容量瓶中，用2%硝酸稀釋至刻度，搖勻，即得209Bi 的內(nèi)標(biāo)溶液（濃度為1 μg/mL）。

2.2.3 汞標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液的制備取汞標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（標(biāo)準(zhǔn)值為1 000 μg/mL）1 mL，置100 mL 量瓶中，用2%硝酸稀釋至刻度，搖勻，即得汞的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（濃度為10 μg/mL）。

2.2.4 汞標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的制備精密量取汞標(biāo)準(zhǔn)溶液儲(chǔ)備液0、0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，分別置50 mL 量瓶中，用2%硝酸稀釋至刻度，搖勻，即得。（濃度分別為0、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、5.0ng/mL）

2.3 測(cè)定法

采用在線內(nèi)標(biāo)法，用三通管將含209Bi 內(nèi)標(biāo)溶液與供試品溶液后進(jìn)入電感耦合等離子體-質(zhì)譜儀。測(cè)定時(shí)以209Bi 作為內(nèi)標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)樣管始終插入內(nèi)標(biāo)溶液中，依次從樣品管中吸入各個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，以測(cè)量值為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.4 線性關(guān)系考察

取“2.2.4”項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，按“2.1”項(xiàng)下儀器設(shè)置條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄儀器響應(yīng)值。以汞元素質(zhì)量濃度（ng/mL）為橫坐標(biāo)，與測(cè)量值為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性擬合，繪制，得汞元素線性回歸方程Y=0.002 2X+4.996 8×10-4，r=0.996 3。結(jié)果表明汞質(zhì)量濃度在0～5.0 ng/mL 范圍內(nèi)與測(cè)量值線性關(guān)系良好。

2.5 檢測(cè)限試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下空白樣品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下儀器設(shè)置條件重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定11 次，計(jì)算儀器響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差，3 倍標(biāo)準(zhǔn)偏差對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度即為檢測(cè)限，結(jié)果汞的檢出限為0.011 1 ng/mL。

2.6 精密度試驗(yàn)

取“2.2.4”項(xiàng)下汞元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度3 ng/mL），按“2.1”項(xiàng)下儀器設(shè)置條件重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定6 次，記錄儀器響應(yīng)值，測(cè)定結(jié)果分別為3.020、3.013、3.002、3.109、3.015、3.121 ng/mL，RSD 為1.8%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

稱取柏子養(yǎng)心丸（上海華源制藥安徽廣生藥業(yè)有限公司，批號(hào)：121201）0.5 g，精密稱定，共取6份，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下儀器設(shè)置條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄儀器響應(yīng)值。結(jié)果見表1，6 份樣品中汞的平均含量為186 868 ng/g，RSD 為1.3%（n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

表1 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

稱取柏子養(yǎng)心丸（上海華源制藥安徽廣生藥業(yè)有限公司，批號(hào)：121201）0.25 g，精密稱定，共取6 份，采用加樣回收試驗(yàn)，加入標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度為5 μg/mL）50 mL，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備，再按“2.1”項(xiàng)下儀器設(shè)置條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

計(jì)算公式：回收率=（測(cè)得總量-樣品中的量）÷添加量×100%

2.9 樣品中總汞的測(cè)定

稱取7 批柏子養(yǎng)心丸樣品各0.5 g，精密稱定，分別按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下儀器設(shè)置條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算樣品總汞的含量（mg/kg），結(jié)果見表3。

表3 樣品中總汞的測(cè)定結(jié)果（mg/kg）

3 討論

本次試驗(yàn)結(jié)果可知，參照《中國(guó)藥典》2020年版一部對(duì)部分藥材重金屬及有害元素的限度規(guī)定，汞不得超過0.2 mg/kg，根據(jù)柏子養(yǎng)心丸的用法與用量：水蜜丸一次6 g，小蜜丸一次9 g，2 次/d。按每日服用量折算，總汞的限度：水蜜丸不得過0.002 4 mg/d，小蜜丸0.003 6 mg/d。結(jié)果7 批樣品總汞含量均大于擬定的限度，表明柏子養(yǎng)心丸中總汞含量都非常高。但有研究表明［4-5］，朱砂在體內(nèi)不能被完全溶解吸收，占給藥量的98.5%以硫化汞（HgS）形式隨糞便排出體外，而1.5%的可溶性汞鹽才是能被人體所吸收的成分，也是朱砂中有毒的成分。因此有待進(jìn)一步研究柏子養(yǎng)心丸中可溶性汞的毒性風(fēng)險(xiǎn)，為柏子養(yǎng)心丸的安全性評(píng)價(jià)供參考依據(jù)，保證其臨床用藥安全。