王曉娜，叢桂敏，曹作偉

（沈陽市婦嬰醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧 沈陽 110011）

B群鏈球菌（group B streptococcus，GBS）又稱無乳鏈球菌，可引起新生兒敗血癥、腦膜炎，甚至導(dǎo)致新生兒死亡[1]。因此，及時(shí)準(zhǔn)確的篩查圍產(chǎn)期孕婦生殖道中定植的GBS至關(guān)重要。傳統(tǒng)使用普通血瓊脂培養(yǎng)基（bood agar plate，BAP）進(jìn)行篩查，但仍存在一定程度的漏檢率。GBS篩查的新型選擇性顯色培養(yǎng)基（chromogenic medium chromID Strepto B agar，STRB）原理為通過生化反應(yīng)使培養(yǎng)基上的菌落呈現(xiàn)粉紫色，不通過鑒定即可直接篩查出GBS。本研究比較STRB與BAP鑒定GBS的敏感性、特異性及選擇性能，旨在為實(shí)驗(yàn)室快速準(zhǔn)確鑒定GBS提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣本制備 選取2019年1月至2019年6月在本院產(chǎn)科門診就診的35～37 周孕婦陰道拭子標(biāo)本1 500 例，已知GBS菌株10例。

1.2 儀器與試劑 成品BAP購自鄭州安圖生物技術(shù)有限公司，STRB購自鄭州安圖生物技術(shù)有限公司，CO2孵育箱購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司，DL-96Ⅱ細(xì)菌測(cè)定系統(tǒng)購自珠海迪爾生物工程有限公司。

1.3 質(zhì)控菌株 金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25922、白念珠菌ATCC6258均購自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.4 檢測(cè)方法 采用3 區(qū)劃線方法將標(biāo)本接種于BAP 和STRB，置（35±2）℃、CO2孵育箱孵育18～24 h。對(duì)BAP上乳白色、濕潤、?溶血的疑似GBS菌落進(jìn)行觸酶試驗(yàn)、CAMP試驗(yàn)，同時(shí)，采用DL-96Ⅱ細(xì)菌測(cè)定系統(tǒng)進(jìn)行鑒定。對(duì)STRB上粉紫色、濕潤的典型菌落，用DL-96Ⅱ細(xì)菌測(cè)定系統(tǒng)測(cè)定，同時(shí)，使用CAMP試驗(yàn)輔助判定。采用陰性培養(yǎng)基繼續(xù)孵育至48 h，疑似GBS菌落采用上述方法再進(jìn)行鑒定。

1.5 觀察指標(biāo) 比較直接接種血瓊脂培養(yǎng)基和顯色培養(yǎng)基篩查GBS的敏感性、特異性及選擇性能。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 BAP與STRB陽性率、敏感性、特異性比較 在BAP和STRB上接種的已知10例GBS菌株均檢出，檢出率為100.0%。孕產(chǎn)婦標(biāo)本共篩查出125例GBS，陽性率為8.3%（125/1 500）。其中培養(yǎng)24 h后，BAP與STRB陽性率分別為6.2%（94/1 500）和8.1%（122/1 500）；培養(yǎng)48 h后，BAP與STRB陽性率均為8.3%（125/1 500），高于24 h陽性率。STRB與BAP篩查GBS陽性率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=3.911，P＜0.05）。STRB篩查GBS敏感性為97.60%、特異性為99.35%，見表1。

表1 BAP與STRB陽性率、敏感性、特異性比較Table 1 Comparison of the positive rate,sensitivity and specificity between BAP and STRB

2.2 BAP 與STRB 性能比較 BAP 上接種24 h 及48 h 后，分別有32.3%及31.8%的非目標(biāo)菌群被完全抑制。STRB 上接種24 h 及48 h 后，分別有72.6%及70.9%的非目標(biāo)菌群被完全抑制。孵育24 h后，BAP與STRB非目標(biāo)菌群生長密度比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=32.684，P＜0.05），見表2。

表2 BAP與STRB非目標(biāo)菌生長密度比較Table2 Comparison of growth density of non-target bacteria between BAP and STRB

3 討論

GBS是一種有莢膜的革蘭陽性鏈球菌，主要寄居在女性直腸和陰道，妊娠晚期感染GBS可導(dǎo)致新生兒感染、腦膜炎、甚至死亡[1]。因此，妊娠晚期及時(shí)篩查出攜帶GBS對(duì)降低圍產(chǎn)期GBS感染具有重要意義，而合采用適的篩查方法尤為重要。

3.1 不同地區(qū)GBS 定植率 相關(guān)數(shù)據(jù)表明[2]，不同種族、不同地區(qū)妊娠晚期孕婦GBS帶菌率也存在差異，且呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。如非洲為22.4%，歐洲為19.0%[3]，東南亞地區(qū)略低，如日本為8.2%、韓國為8.0%[4]。而國內(nèi)近幾年才對(duì)GBS感染引起的母兒危害才有所了解，僅2011 年《孕前及孕期保健指南》[5]、2015年《胎膜早破的診斷與處理指南》[6]中提到GBS篩查。因此，國內(nèi)關(guān)于GBS感染以及對(duì)孕產(chǎn)婦及胎兒影響的相關(guān)研究較少。各地區(qū)GBS 陽性率差異較大，如澳門地區(qū)為17.1%[7]、銀川地區(qū)為5.09%[8]、北京地區(qū)為8.1%[9]。本研究陽性率為8.3%，低于澳門地區(qū)的數(shù)據(jù)，但高于銀川地區(qū)數(shù)據(jù)，與北京地區(qū)相當(dāng)。分析原因可能與地域分布、人群構(gòu)成比例、生活方式、經(jīng)濟(jì)發(fā)展程度等因素有關(guān)。而檢出率則與多種因素有關(guān)，首先是臨床對(duì)GBS 的重視程度。目前，我國很多地區(qū)即使是經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)城市均未開展妊娠晚期GBS篩查。其次為實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)水平，包括高水平的質(zhì)控水平、專業(yè)的檢驗(yàn)人員等，均在GBS 篩查中起到至關(guān)重要的作用。此外，取材部位、篩查時(shí)間、檢測(cè)方法等均會(huì)影響檢出率。

3.2 不同GBS 培養(yǎng)方法比較 目前，臨床上應(yīng)用最普遍的GBS的檢測(cè)方法為細(xì)菌培養(yǎng)法，也是目前檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。主要通過形態(tài)學(xué)觀察、CAMP試驗(yàn)做出初步的判斷，然后上機(jī)鑒定，但該方法需純培養(yǎng)菌落3～5 d，耗時(shí)較長，此外，操作復(fù)雜，且在血瓊脂培養(yǎng)基上易受到其他菌群如大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌等細(xì)菌的抑制，易受到檢測(cè)環(huán)境、送檢時(shí)間、儲(chǔ)存條件等多種因素影響。而原位雜交、PCR等方法雖然靈敏度較高，但特異性較低，且均需專業(yè)的儀器和技術(shù)人員，成本高、耗時(shí)長，較難在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)推廣[10]；凝膠電泳法特異性較高，但由于GBS 具有多種血清型，易造成漏檢。本研究應(yīng)用的STRB 是一種新型的選擇性顯色培養(yǎng)基，基本原理為在培養(yǎng)基中加入抗生素來抑制其他細(xì)菌的生長，再加入相應(yīng)的反應(yīng)底物使GBS菌落顯顏色，典型GBS菌落為粉紫色，其他細(xì)菌則可被抗生素抑制或少量生長而不產(chǎn)生典型菌落。本研究結(jié)果顯示，培養(yǎng)24 h 后，STRB 上陽性率為8.1%（122/1 500），高于BAP的6.2%（94/1 500），且增加培養(yǎng)時(shí)間后，檢出率均有所提高。同時(shí)，STRB上接種24 h及48 h后，非目標(biāo)菌群完全抑制率（72.6%、70.9%）也高于BAP（32.3%、31.8%）。STRB對(duì)70%以上的樣本均可完全抑制非目標(biāo)菌群的生長，選擇性能較好，結(jié)果易于判斷。與傳統(tǒng)方法相比，無需檢測(cè)儀器，肉眼即可觀察，省去GBS 鑒定步驟，操作簡便，降低培養(yǎng)時(shí)間。

綜上所述，B 群鏈球菌顯色培養(yǎng)基對(duì)于臨床GBS 篩查有良好的敏感性和特異性，可較好的抑制非目標(biāo)菌群，選擇性能良好，結(jié)果易于判斷。與直接使用普通血瓊脂培養(yǎng)基相比可降低漏檢率，值得臨床推廣運(yùn)用。