乜英青

（青海省貴德縣農(nóng)畜產(chǎn)品質(zhì)量檢驗檢測中心 811799）

沙門氏菌為腸桿菌科革蘭氏陰性桿菌，廣泛存在于人和動物腸道內(nèi)，是一種人畜共患性致病菌，嚴重威脅食品安全，國際獸疫局將其定為B 類傳染病。雞群感染沙門氏菌后可引發(fā)雞白痢、雞傷寒和禽副傷寒等疾病，且可通過垂直感染影響產(chǎn)蛋率和雛雞存活率。隨著我國養(yǎng)雞業(yè)的現(xiàn)代化和規(guī)?；l(fā)展，雞群免疫力逐步下降，依賴疫苗免疫或抗生素藥物來防治，雖然抗生素能有效控制禽沙門氏菌，但由于藥物使用不當造成菌株耐藥性越來越嚴重。本文對貴德縣青源土雞養(yǎng)殖場沙門氏菌進行分離鑒定，并對分離到的菌株進行多種藥物的敏感性試驗，為當?shù)仉u場抗菌藥物的合理使用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 培養(yǎng)基

營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，SS 瓊脂培養(yǎng)基，三糖鐵瓊脂，尿素酶生化鑒定管，蛋白胨水培養(yǎng)基，賴氨酸脫羧酶肉湯和氨基酸脫羧酶對照生化鑒定管均購自青島高科技工業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司。

1.1.2 病料來源

試驗所用菌株來自貴德縣青源土雞養(yǎng)殖場所飼養(yǎng)的病死雞，取其病料組織分離菌株共6 株。

1.1.3 試驗藥物

氧氟沙星、慶大霉素、阿莫西林、頭孢唑啉、頭孢噻肟、頭孢拉定、恩諾沙星、阿米卡星、多西環(huán)素、卡那霉素、林可霉素、磷霉素、呋喃唑酮、復方新諾明共14 種藥敏片均購自杭州濱和微生物試劑有限公司。

1.2 試驗及方法

1.2.1 沙門氏菌分離試驗

在實驗室無菌條件下取病料組織接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和SS 瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)，在37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～22h。在超凈臺內(nèi)挑取0.5mm 單菌落進行革蘭氏染色，顯微鏡下觀察，挑取單個革蘭氏陰性菌落。

1.2.2 沙門氏菌的鑒定試驗

將分離到的革蘭氏陰性短桿菌株進行編號，編名1～6 號，將這6 株菌株分別進行三糖鐵試驗（將待檢菌株接種于三糖鐵瓊脂內(nèi)，在37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～24h 后觀察細菌形態(tài)和產(chǎn)氣情況）、尿素酶試驗（將待檢菌株接種于尿素酶生化鑒定管內(nèi)，在37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～24h 后觀察試管顏色變化，若變紅色或粉紅色為陽性，若顏色不變或變黃色為陰性）、靛基質(zhì)（吲哚）試驗（將待檢菌株接種于蛋白胨水培養(yǎng)基內(nèi)，在37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～24h 后沿試管壁滴加數(shù)滴吲哚試劑，觀察顏色變化，若變紅色為陽性，呈黃色為陰性）、賴氨酸脫羧酶試驗（將待檢菌株分別接種于賴氨酸脫羧酶肉湯和氨基酸脫羧酶對照生化鑒定管內(nèi)，在37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～24h 后觀察培養(yǎng)基和試管顏色變化，若賴氨酸脫羧酶肉湯顏色變紫，而氨基酸脫羧酶對照顏色變黃為陽性，若兩者均變黃為陰性）。

1.2.3 沙門氏菌的藥敏試驗

根據(jù)世界衛(wèi)生組織建議的Kirby-Bauer 紙片法對分離到的6株沙門氏菌進行抗菌藥物敏感性試驗。用滅菌棒將LB 培養(yǎng)物均勻涂布于營養(yǎng)瓊脂平板內(nèi)，室溫放置5min 后將藥敏紙片平貼于瓊脂表面，在37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)16～18h 后觀察抑菌圈直徑。判定結(jié)果為抑菌環(huán)直徑d＞15mm 為高敏感度，抑菌環(huán)直徑10mm＜d＜15mm 為中度敏感，抑菌環(huán)直徑d＜10mm 為耐藥。

2 結(jié)果與分析

2.1 沙門氏菌的分離鑒定結(jié)果

2.1.1 培養(yǎng)特性

將病料組織接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和SS 瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)，于37℃培養(yǎng)18～22h 后發(fā)現(xiàn)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板表面有許多單一，無色透明或半透明的針尖大小菌落，表面光滑、邊緣整齊。SS 瓊脂培養(yǎng)基表面呈灰色或中心呈黑色的圓形菌落。挑取單菌落進行革蘭氏染色，于光學顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)菌株為革蘭氏陰性桿菌，兩端鈍圓，無芽孢，符合沙門氏菌的生長特性。

2.1.2 生化鑒定結(jié)果

由表1 可知，將分離到的6 株沙門氏菌進行生化鑒定試驗，結(jié)果表明，在三糖鐵試驗中，培養(yǎng)基斜面變紅，底層反應呈陽性，產(chǎn)酸，產(chǎn)硫化氫，該結(jié)果提示菌株均為沙門氏菌；在尿素酶試驗中，試管顏色不變或呈黃色，均顯示為陰性；在靛基質(zhì)（吲哚）試驗中，結(jié)果也均為陰性；在賴氨酸脫羧酶試驗中，結(jié)果均為陽性。

2.2 沙門氏菌的藥物敏感性試驗

由表2 可知，分離到的6 株沙門氏菌對阿莫西林、恩諾沙星、卡那霉素、林可霉素和磷霉素的敏感度率為0，表明該雞場的沙門氏菌對這5 種藥物的耐藥性較高，為多重耐藥。而該雞場的沙門氏菌對頭孢噻肟、阿米卡星和多西環(huán)素的敏感率均超過80%，因此，上述幾種藥物可有效治療該雞場沙門氏菌。

表1 分離到的6 株沙門氏菌的生化鑒定試驗結(jié)果

表2 分離到的6 株沙門氏菌的藥物敏感性試驗結(jié)果

3 討論

本研究對分離鑒定到的6 株沙門氏菌進行14 種藥物敏感性試驗。結(jié)果顯示，該區(qū)域雞場沙門氏菌對頭孢噻肟、阿米卡星和多西環(huán)素3 種藥物具有高度敏感，而對阿莫西林、恩諾沙星、卡那霉素、林可霉素和磷霉素具有不同程度的耐藥性。張麗嬌（2020）對煙臺市肉雞養(yǎng)殖場的病雞進行沙門氏菌分離鑒定和藥敏試驗發(fā)現(xiàn)，分離到的沙門氏菌對頭孢噻呋和甲砜霉素高度敏感，對恩諾沙星和環(huán)丙沙星具有一定程度的耐藥性[1]。張阿娥（2018）對洛江區(qū)部分養(yǎng)殖場的病雞進行沙門氏菌分離鑒定和藥敏試驗發(fā)現(xiàn)，分離到的沙門氏菌對阿米卡星和恩諾沙星最為敏感，而阿莫西林和林可霉素等藥物敏感范圍較寬[2]。王曉藝等（2017）對山東省部分市縣養(yǎng)殖場的病雞進行沙門氏菌分離鑒定和藥敏試驗發(fā)現(xiàn)，分離到的沙門氏菌對多西環(huán)素最為敏感，而對阿莫西林、林可霉素和替米考星具有耐藥性[3]。李強（2017）對宿豫區(qū)某散養(yǎng)戶雞場的病雞進行沙門氏菌分離鑒定和藥敏試驗發(fā)現(xiàn)，分離到的沙門氏菌對氧氟沙星、頭孢曲松和鏈霉素最為敏感[4]。上述試驗結(jié)果不一致的原因與不同地區(qū)流行菌株不同及所使用的的抗菌藥物種類不同有關(guān)。本試驗結(jié)果顯示，貴德縣青源土雞養(yǎng)殖場雞源沙門氏菌對阿莫西林、恩諾沙星、卡那霉素、林可霉素和磷霉素的耐藥性較強，說明之前可能存在使用量過多或濫用的現(xiàn)象。因此，筆者建議青海省貴德縣在治療禽沙門氏菌病時需要結(jié)合本地區(qū)藥物敏感試驗結(jié)果再合理選擇抗生素進行治療。為延緩細菌產(chǎn)生耐藥性和緩解細菌的選擇壓力，雞場可以交叉或輪換使用抗生素。在藥物使用的同時需要對雞舍定期消毒，提高雞舍清潔度，定期監(jiān)測沙門氏菌的耐藥性，為合理選擇和使用抗菌藥物提供參考依據(jù)。