蓋小君 柴世慶 李玉杰 張棟 邢林林*
(1,山東省煙臺(tái)市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 264000;2,山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 250010)
肺炎克雷伯氏菌為革蘭氏陰性短粗桿菌,有莢膜,無(wú)芽孢,兼性厭氧菌,主要寄生于動(dòng)物和人的呼吸道、腸道及水和谷物等處,為條件致病菌,發(fā)病無(wú)季節(jié)性,常呈地方性流行,亦有散發(fā),主要病變有肺炎及其他器官化膿性病[1],肺炎克雷伯菌是一種重要的腸桿菌科,可引起多種疾病,并且抗生素耐藥性日益嚴(yán)峻。大腸桿菌為革蘭氏陰性無(wú)芽孢的直桿菌,兩端鈍圓,主要寄生在人和動(dòng)物的腸道內(nèi),鴨大腸桿菌病是一種急性敗血性傳染病,各日齡的鴨均易感染,以2~6 周齡雛鴨群多發(fā)。葡萄球菌是革蘭氏陽(yáng)性菌,不形成芽孢和莢膜,呈葡萄串狀排列,該菌在自然環(huán)境中廣泛存在,多種動(dòng)物及人均易感,鴨和鵝一般是由于璞或趾被劃破而感染,急性病例主要癥狀是跗、脛和趾關(guān)節(jié)發(fā)生炎性腫脹,也常見(jiàn)結(jié)膜炎和腹瀉。
熒光定量PCR 儀、禽流感病毒熒光定量PCR 試劑盒、革蘭氏染色液、梅里埃生化及藥敏儀。
2020 年3 月6 日接到濰坊某肉鴨養(yǎng)殖場(chǎng)樣品,品種為櫻桃谷肉鴨,發(fā)病初期個(gè)別鴨子瘸腿,厭食,飲水量增加,眼角有分泌物,病程2~3d 死亡。使用阿莫西林、磺胺嘧啶鈉+黃芪多糖混合飲水后效果不明顯。繼而大群采食量下降,咳嗽,甩脖,腫頭現(xiàn)象明顯增多,拉稀。死亡數(shù)量增加,300 只/d,發(fā)病10d。該養(yǎng)殖場(chǎng)養(yǎng)殖方式為網(wǎng)上飼養(yǎng),養(yǎng)殖規(guī)模30000 只。
肝周炎、腹膜炎、氣囊炎,肝臟輕微腫脹,膽囊充盈,小腸黏膜脫落,內(nèi)包有大量黏液,腸壁變薄,盲腸扁桃體腫脹,直腸末端彌漫性出血。喉頭充血,并有黏液。氣管環(huán)出血,肺臟水腫,氣囊渾濁。心肌肥大,心包積液少量增多。病毒檢測(cè)選取病鴨的肝臟、淋巴結(jié)、脾臟、氣管等樣品送至分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè),通過(guò)核酸提取儀提取核酸,根據(jù)檢測(cè)試劑盒的具體操作步驟,對(duì)于提取的核酸進(jìn)行熒光PCR 檢測(cè)。
在無(wú)菌環(huán)境下,用接種環(huán)蘸取病料于培養(yǎng)皿中劃線培養(yǎng),挑出培養(yǎng)出的菌落進(jìn)行革蘭氏染色,使用顯微鏡觀察細(xì)菌形態(tài)。挑取單菌落,在瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行純化培養(yǎng),用棉棒挑取純化后的單菌落制備0.5~0.63Mc 濃度的菌懸液,根據(jù)儀器操作指南,將菌懸液、鑒定卡片和藥敏卡片分別做好標(biāo)記,裝載上機(jī),5~18h 后讀取結(jié)果。
經(jīng)過(guò)病毒熒光PCR 檢測(cè),病料中禽流感病毒、鴨瘟病毒、鴨黃病毒、副黏病毒未檢出。
革蘭氏染色后油鏡下觀察分離菌株,顯示為兩種陰性桿菌,一種陽(yáng)性球菌。
選取GN 革蘭氏陰性桿菌鑒定卡、GN13 革蘭氏陰性桿菌藥敏卡和GP 革蘭氏陽(yáng)性球菌鑒定卡片和GP67 革蘭氏陽(yáng)性球菌藥敏卡片,裝機(jī)檢測(cè),經(jīng)過(guò)鑒定感染細(xì)菌為大腸桿菌、葡萄球菌和肺炎克雷伯氏菌。篩選的敏感抗生素主要是頭孢噻賽肟鈉、羅紅霉素、替米考星、慶大霉素、多西環(huán)素、粘桿菌素、呋喃唑酮。
(1)保持鴨舍通風(fēng)、干燥,加強(qiáng)舍內(nèi)消毒。保持鴨舍空氣流通,飼養(yǎng)網(wǎng)面干燥,及時(shí)清理病死鴨。每日分別用百毒殺、戊二醛帶鴨消毒一次。
(2)參照藥敏試驗(yàn)結(jié)果對(duì)癥治療。飲水中添加替米考星(1g 兌水20kg)、粘桿菌素(1g 兌水20kg)、雙黃連口服液混合飲水;發(fā)病初期癱瘓的鴨子肌肉注射慶大霉素0.2ml/kg。
(3)治療3d 后鴨群采食量上升,精神狀態(tài)明顯好轉(zhuǎn),死亡數(shù)量有每天死亡200 只/d,降至10 只/d 左右。
隨著我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)逐步發(fā)展,養(yǎng)殖環(huán)境也復(fù)雜多樣,如北方肉鴨養(yǎng)殖多為地面籠養(yǎng),飼養(yǎng)密度大,空氣流通不暢,并且養(yǎng)殖人員在科學(xué)管理、科學(xué)養(yǎng)殖方面的意識(shí)不強(qiáng)或知識(shí)缺乏,導(dǎo)致出現(xiàn)混合感染的概率增加,大大阻礙了我國(guó)鴨養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。另外,由于大量使用抗生素,導(dǎo)致抗生素耐藥情況日趨明顯,普通抗生素藥物殺滅細(xì)菌的效力大大減弱,細(xì)菌耐藥性已成為全球矚目的重要問(wèn)題。2019 年,F(xiàn)an Yang 等從河南省的醫(yī)院和4 種動(dòng)物中共采集了189 株非重復(fù)性肺炎克雷伯菌,189株肺炎克雷伯菌分離株對(duì)15 種抗生素的耐藥率在11.6%~77.8%之間。在豬中檢測(cè)到的藥耐藥率最高,為93.6%,其次是人(90.4%)、雞(88.9%),牛(52.0%)和綿羊(50.0%)[2]。肺炎克雷伯菌的耐藥性在亞洲是一個(gè)明顯的現(xiàn)存危險(xiǎn),需要對(duì)此進(jìn)行強(qiáng)有力的監(jiān)測(cè),以遏制這種威脅。對(duì)于公共衛(wèi)生部門(mén)來(lái)說(shuō),監(jiān)測(cè)和報(bào)告抗微生物菌株的變化非常重要[3]。
因此,在養(yǎng)殖過(guò)程中,首先應(yīng)建立科學(xué)合理的生物安全措施[4],生物安全至關(guān)重要,是防止外來(lái)動(dòng)物疫病的重要屏障,根據(jù)本場(chǎng)情況制定科學(xué)合理的免疫程序,可減少發(fā)病概率,提高產(chǎn)能。另外,應(yīng)定期對(duì)畜舍進(jìn)行衛(wèi)生清潔和消毒,這是防制動(dòng)物疫病的重要手段,鴨群應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,提供充足的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),注意環(huán)境變化,防止因環(huán)境影響,降低鴨群抵抗力。