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        一例鴨混合感染的細菌分離鑒定與藥敏分析

        2021-12-01 21:06:23蓋小君柴世慶李玉杰張棟邢林林
        中國畜禽種業(yè) 2021年4期
        關鍵詞:鴨群革蘭氏克雷伯

        蓋小君 柴世慶 李玉杰 張棟 邢林林*

        (1,山東省煙臺市動物疫病預防與控制中心 264000;2,山東省動物疫病預防與控制中心 250010)

        肺炎克雷伯氏菌為革蘭氏陰性短粗桿菌,有莢膜,無芽孢,兼性厭氧菌,主要寄生于動物和人的呼吸道、腸道及水和谷物等處,為條件致病菌,發(fā)病無季節(jié)性,常呈地方性流行,亦有散發(fā),主要病變有肺炎及其他器官化膿性病[1],肺炎克雷伯菌是一種重要的腸桿菌科,可引起多種疾病,并且抗生素耐藥性日益嚴峻。大腸桿菌為革蘭氏陰性無芽孢的直桿菌,兩端鈍圓,主要寄生在人和動物的腸道內,鴨大腸桿菌病是一種急性敗血性傳染病,各日齡的鴨均易感染,以2~6 周齡雛鴨群多發(fā)。葡萄球菌是革蘭氏陽性菌,不形成芽孢和莢膜,呈葡萄串狀排列,該菌在自然環(huán)境中廣泛存在,多種動物及人均易感,鴨和鵝一般是由于璞或趾被劃破而感染,急性病例主要癥狀是跗、脛和趾關節(jié)發(fā)生炎性腫脹,也常見結膜炎和腹瀉。

        1 材料與方法

        1.1 試驗材料

        熒光定量PCR 儀、禽流感病毒熒光定量PCR 試劑盒、革蘭氏染色液、梅里埃生化及藥敏儀。

        1.2 臨床癥狀

        2020 年3 月6 日接到濰坊某肉鴨養(yǎng)殖場樣品,品種為櫻桃谷肉鴨,發(fā)病初期個別鴨子瘸腿,厭食,飲水量增加,眼角有分泌物,病程2~3d 死亡。使用阿莫西林、磺胺嘧啶鈉+黃芪多糖混合飲水后效果不明顯。繼而大群采食量下降,咳嗽,甩脖,腫頭現(xiàn)象明顯增多,拉稀。死亡數(shù)量增加,300 只/d,發(fā)病10d。該養(yǎng)殖場養(yǎng)殖方式為網(wǎng)上飼養(yǎng),養(yǎng)殖規(guī)模30000 只。

        1.3 剖檢病變

        肝周炎、腹膜炎、氣囊炎,肝臟輕微腫脹,膽囊充盈,小腸黏膜脫落,內包有大量黏液,腸壁變薄,盲腸扁桃體腫脹,直腸末端彌漫性出血。喉頭充血,并有黏液。氣管環(huán)出血,肺臟水腫,氣囊渾濁。心肌肥大,心包積液少量增多。病毒檢測選取病鴨的肝臟、淋巴結、脾臟、氣管等樣品送至分子生物學實驗室進行檢測,通過核酸提取儀提取核酸,根據(jù)檢測試劑盒的具體操作步驟,對于提取的核酸進行熒光PCR 檢測。

        1.4 細菌分離鑒定及藥敏分析

        在無菌環(huán)境下,用接種環(huán)蘸取病料于培養(yǎng)皿中劃線培養(yǎng),挑出培養(yǎng)出的菌落進行革蘭氏染色,使用顯微鏡觀察細菌形態(tài)。挑取單菌落,在瓊脂培養(yǎng)基上進行純化培養(yǎng),用棉棒挑取純化后的單菌落制備0.5~0.63Mc 濃度的菌懸液,根據(jù)儀器操作指南,將菌懸液、鑒定卡片和藥敏卡片分別做好標記,裝載上機,5~18h 后讀取結果。

        2 結果

        2.1 病毒學檢測結果

        經過病毒熒光PCR 檢測,病料中禽流感病毒、鴨瘟病毒、鴨黃病毒、副黏病毒未檢出。

        2.2 細菌鏡檢結果

        革蘭氏染色后油鏡下觀察分離菌株,顯示為兩種陰性桿菌,一種陽性球菌。

        2.3 細菌鑒定及藥敏結果

        選取GN 革蘭氏陰性桿菌鑒定卡、GN13 革蘭氏陰性桿菌藥敏卡和GP 革蘭氏陽性球菌鑒定卡片和GP67 革蘭氏陽性球菌藥敏卡片,裝機檢測,經過鑒定感染細菌為大腸桿菌、葡萄球菌和肺炎克雷伯氏菌。篩選的敏感抗生素主要是頭孢噻賽肟鈉、羅紅霉素、替米考星、慶大霉素、多西環(huán)素、粘桿菌素、呋喃唑酮。

        2.4 治療措施

        (1)保持鴨舍通風、干燥,加強舍內消毒。保持鴨舍空氣流通,飼養(yǎng)網(wǎng)面干燥,及時清理病死鴨。每日分別用百毒殺、戊二醛帶鴨消毒一次。

        (2)參照藥敏試驗結果對癥治療。飲水中添加替米考星(1g 兌水20kg)、粘桿菌素(1g 兌水20kg)、雙黃連口服液混合飲水;發(fā)病初期癱瘓的鴨子肌肉注射慶大霉素0.2ml/kg。

        (3)治療3d 后鴨群采食量上升,精神狀態(tài)明顯好轉,死亡數(shù)量有每天死亡200 只/d,降至10 只/d 左右。

        3 討論

        隨著我國養(yǎng)殖業(yè)逐步發(fā)展,養(yǎng)殖環(huán)境也復雜多樣,如北方肉鴨養(yǎng)殖多為地面籠養(yǎng),飼養(yǎng)密度大,空氣流通不暢,并且養(yǎng)殖人員在科學管理、科學養(yǎng)殖方面的意識不強或知識缺乏,導致出現(xiàn)混合感染的概率增加,大大阻礙了我國鴨養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。另外,由于大量使用抗生素,導致抗生素耐藥情況日趨明顯,普通抗生素藥物殺滅細菌的效力大大減弱,細菌耐藥性已成為全球矚目的重要問題。2019 年,F(xiàn)an Yang 等從河南省的醫(yī)院和4 種動物中共采集了189 株非重復性肺炎克雷伯菌,189株肺炎克雷伯菌分離株對15 種抗生素的耐藥率在11.6%~77.8%之間。在豬中檢測到的藥耐藥率最高,為93.6%,其次是人(90.4%)、雞(88.9%),牛(52.0%)和綿羊(50.0%)[2]。肺炎克雷伯菌的耐藥性在亞洲是一個明顯的現(xiàn)存危險,需要對此進行強有力的監(jiān)測,以遏制這種威脅。對于公共衛(wèi)生部門來說,監(jiān)測和報告抗微生物菌株的變化非常重要[3]。

        因此,在養(yǎng)殖過程中,首先應建立科學合理的生物安全措施[4],生物安全至關重要,是防止外來動物疫病的重要屏障,根據(jù)本場情況制定科學合理的免疫程序,可減少發(fā)病概率,提高產能。另外,應定期對畜舍進行衛(wèi)生清潔和消毒,這是防制動物疫病的重要手段,鴨群應加強飼養(yǎng)管理,提供充足的營養(yǎng)物質,注意環(huán)境變化,防止因環(huán)境影響,降低鴨群抵抗力。

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