欒真杰，李朵，李佩佩，趙景陽，孟曉萍，孫菁

亞臨界流體萃取馬藺籽油的成分及抗氧化活性研究

欒真杰1，2，李朵1，2，李佩佩1，2，趙景陽1，孟曉萍1，孫菁1

1.青海省青藏高原特色生物資源研究重點實驗室，中國科學院西北高原生物研究所，青海 西寧 810008； 2.中國科學院大學，北京 100049

優(yōu)化馬藺籽油亞臨界流體萃取法的提取條件，分析所得籽油的成分，評價其抗氧化活性。采用響應面法優(yōu)化亞臨界流體萃取法提取馬藺籽油的條件，并分別參照國家標準及行業(yè)標準測定所得籽油的理化常數(shù)及總多酚含量，采用氣質(zhì)聯(lián)用法分析籽油脂肪酸的組成及相對含量，利用DPPH法和FRAP法評價馬藺籽油的抗氧化活性。亞臨界流體萃取法提取馬藺籽油的優(yōu)化條件為液料比6 mL/g、萃取5次、萃取溫度42.29 ℃、萃取時間22.41 min，在此條件下馬藺籽油得率的理論值為13.250%。所得籽油的不皂化物含量為1.28%，酸值為0.124 mg/g，皂化值為198.077 mg/g，過氧化值為4.346 mmol/kg。籽油的總多酚含量為146.64 mg/kg。籽油濃度為14 mg/mL時，DPPH自由基清除率最大，為71.42%，IC50為12.033 mg/mL；籽油濃度為168 mg/mL時，總抗氧化能力最強，為0.420 7 mmol/L FeSO4當量。亞臨界流體萃取法所得馬藺籽油具有較高含量的總多酚及較強的抗氧化活性。

亞臨界流體萃取法；響應面法；馬藺籽油；成分分析；抗氧化活性；總多酚

馬藺Pall. var.（Fisch.）Koidz.為鳶尾科鳶尾屬多年密叢生草本植物，生于海拔2200～4900 m的旱山坡、高山草地、荒地、濕地，我國西北、華北、東北及華東各省均有分布，朝鮮、蒙古、俄羅斯及中亞和西亞地區(qū)也有分布[1]，是一種鹽生植物，可用于改造利用鹽漬環(huán)境[2]。馬藺為重要的藏藥資源，以種子入藥，味辛性平，具有解痙止痛、驅(qū)蟲、生肌斂瘡等功效[3]，可退燒、解毒，用于治療闌尾炎、齲齒及食物中毒引起的瀉痢等[4]。馬藺籽種仁部分含有大量油細胞[5]，據(jù)報道超臨界萃取法馬藺籽油得率為11.15%[6]，超聲波提取法籽油得率為10.56%[7]，索氏提取法籽油得率為3%～12%[8]。研究表明，馬藺籽油的脂肪酸成分主要為油酸及亞油酸，不皂化物主要為豆甾醇、β-谷甾醇及菜油甾醇等甾醇類化合物，籽油的總多酚含量較高，具有較強的抗氧化活性[6]。

亞臨界流體萃取技術(shù)是根據(jù)相似相溶原理，利用亞臨界狀態(tài)溶劑分子與固體原料充分接觸中發(fā)生的分子擴散作用，使物料中可溶成分遷移至萃取溶劑中，再經(jīng)減壓蒸發(fā)脫溶獲得目標提取物的新型萃取技術(shù)。隨著亞臨界流體萃取理論及相關(guān)設(shè)備的不斷發(fā)展，該技術(shù)已廣泛應用于植物油料、動物原料、微生物原料及其加工副產(chǎn)物，并取得了相應的工業(yè)成果[9]。通過測定不同提取方法所得巴西堅果油的成分，發(fā)現(xiàn)通過亞臨界流體萃取法獲得的油中生物活性化合物含量較高[10]。本研究采用響應面法優(yōu)化亞臨界流體萃取法提取馬藺籽油的條件，分析所得籽油的脂肪酸組成及相對含量，并測定總多酚含量，在此基礎(chǔ)上采用DPPH法及FRAP法評估籽油的抗氧化活性，為該植物資源的進一步開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

CBE-T-5L亞臨界流體雙溶劑萃取實驗室成套設(shè)備，河南省亞臨界技術(shù)有限公司；Thermo TRACE 1300系列-TSQ 8000Evo三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀，美國賽默飛世爾科技公司；Cary60紫外分光光度計，美國安捷倫科技有限公司；Milli-Q純水機，德國默克集團；ZFJ-200中草藥粉碎機，江陰市跨越機械有限公司；二醇基固相萃取小柱（500 mg/3 mL），天津博進科技有限公司。

福林酚為BR生物試劑；氦氣為食品級；對照品菜油甾醇（純度＞98%，批號190107）、β-谷甾醇（純度＞98%，批號181217）、豆甾醇（純度＞95%，批號190608），北京世紀奧科生物技術(shù)有限公司；沒食子酸（純度＞98%，批號18032703）、抗壞血酸（純度＞98%，批號170709），成都普菲德生物技術(shù)有限公司；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH，純度＞98%，批號C36912133EE24），APExBIO公司?？偪寡趸芰z測試劑盒（A015-3 FRAP法，批號20200702），南京建成生物工程研究所，使用危險品包括濃硫酸（白銀良友化學試劑有限公司，批號20190102）。石油醚（60～90 ℃）、氫氧化鉀、氫氧化鈉、正己烷、酚酞、乙醇、碘化鉀、淀粉、硫代硫酸鈉、冰乙酸、堿性藍6B、碳酸鈉、無水硫酸鈉、甲醇、無水乙醇等均為國產(chǎn)分析純，總多酚測定中所用甲醇及正己烷為色譜純。

馬藺籽產(chǎn)自青?；ブh，購于青海藥材市場，經(jīng)中國科學院西北高原生物研究所盧學峰研究員鑒定為鳶尾科鳶尾屬馬藺Pall. var.（Fisch.）Koidz.的干燥成熟種子，篩除碎殼、殘葉等雜質(zhì)后，置于50 ℃烘箱中烘干至恒重，用多功能粉碎機碎皮，過20目篩，除去種皮，得到馬藺籽種仁，將種仁用中草藥粉碎機粉碎后過40目篩，裝于自封袋中，4 ℃冷藏備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 亞臨界流體萃取工藝優(yōu)化

取馬藺籽種仁粉300.00 g，裝袋封口，放入萃取密封罐，抽空萃取罐與分離罐的空氣，加入萃取劑丁烷，水浴加熱，萃取一定時間。將萃取液放入分離罐，回收溶劑，放出提取物，稱重，計算馬藺籽油得率。馬藺籽油得率（%）＝馬藺籽油質(zhì)量÷原料質(zhì)量×100%。

2.1.1 單因素試驗

2.1.1.1 夾帶劑濃度

在萃取溫度35 ℃、萃取時間25 min、萃取次數(shù)3次、液料比5 mL/g的條件下，分別選擇無夾帶劑及95%、100%乙醇為夾帶劑進行試驗，結(jié)果無夾帶劑及95%、100%乙醇為夾帶劑的馬藺籽油得率分別為8.78%、11.28%、9.86%，因此選擇95%乙醇為夾帶劑進行后續(xù)試驗。

2.1.1.2 液料比

在萃取溫度35 ℃、萃取時間25 min、萃取次數(shù)3次、95%乙醇為夾帶劑的條件下，考察液料比分別為4、5、6、7、8 mL/g對馬藺籽油得率的影響。當液料比為4～7 mL/g時，馬藺籽油得率隨液料比增加而逐漸增大；液料比超過7 mL/g時，馬藺籽油得率明顯下降。因此，選擇液料比6～8 mL/g進行響應面優(yōu)化試驗。

2.1.1.3 萃取次數(shù)

在液料比為5 mL/g、萃取時間25 min、萃取溫度35 ℃、95%乙醇為夾帶劑的條件下，考察萃取次數(shù)為1、2、3、4、5次對馬藺籽油得率的影響。馬藺籽油得率隨萃取次數(shù)增多而逐漸增大，萃取1～3次時馬藺籽油得率上升較快，萃取4～5次時馬藺籽油得率上升較慢。因此，選擇萃取次數(shù)為1～5次進行響應面優(yōu)化試驗。

2.1.1.4 萃取溫度

在液料比為5 mL/g、萃取時間25 min、萃取次數(shù)3次、95%乙醇為夾帶劑的條件下，考察萃取溫度為30、35、40、45、50 ℃時對馬藺籽油得率的影響。萃取溫度為30～40 ℃時，馬藺籽油得率隨萃取溫度升高而逐漸增大；萃取溫度超過40 ℃后，馬藺籽油得率逐漸趨于平穩(wěn)且有所下降。因此選擇萃取溫度為30～50 ℃進行響應面優(yōu)化試驗。

2.1.1.5 萃取時間

在液料比為5 mL/g、萃取溫度40 ℃、萃取次數(shù)3次、95%乙醇為夾帶劑的條件下，考察萃取時間為15、20、25、30、35、40 min對馬藺籽油得率的影響。萃取時間為15～20 min時，馬藺籽油得率隨萃取時間增加而逐漸增大；當萃取時間超過20 min時，馬藺籽油得率反而下降；在萃取時間20 min處有明顯的峰值。因此，選擇萃取時間為15～25 min進行響應面優(yōu)化試驗。

2.1.2 響應面試驗

根據(jù)單因素試驗結(jié)果，選取液料比（A）、萃取次數(shù)（B）、萃取溫度（C）和萃取時間（D）為變量，將每個變量按低、中、高級別分別指定為-1、0、+1，以馬藺籽油得率（Y）為響應值，采用Box-Behnken試驗對提取工藝進行優(yōu)化，因素水平見表1，試驗設(shè)計及結(jié)果見表2。

表1 響應面試驗因素水平

水平液料比/（mL/g）A萃取次數(shù)B萃取溫度/℃C萃取時間/minD -1613015 0734020 +1855025

表2 響應面試驗設(shè)計及結(jié)果

試驗號ABCDY/% 17340209.09 26140205.92 37340208.15 473402011.79 575502010.88 68330209.23 77140153.73 875401511.43 983502010.37 106330209.32 117350258.16 126340157.89 137150203.53 147530207.87 157330255.74 168340156.96 1765402011.58 187350157.36 196350209.16 208140207.06 218340257.62 2285402012.14 2375402513.41 247330155.25 2573402010.82 267340209.95 277140255.02 287130202.06 2963402510.42

采用Design-Expert11.1.2.0軟件對響應面試驗結(jié)果進行回歸擬合，結(jié)果見表3?？梢钥闯?，在所選取的各因素水平范圍內(nèi)，B因素（萃取次數(shù)）對馬藺籽油得率的影響極為顯著，AB、AC、AD、BC、BD、CD所對應的值均大于0.1，表明4個因素之間的兩兩交互作用不明顯。根據(jù)值的大小，得到4個因素對馬藺籽油得率的影響順序為B因素（萃取次數(shù)）＞C因素（萃取溫度）＞D因素（萃取時間）＞A因素（液料比）。擬合回歸方程為：＝9.96－0.075＋3.33＋0.83＋0.65－0.15＋0.32－0.47＋0.39＋0.17＋0.078＋0.472－1.162－1.872－1.362。

表3 回歸模型方差分析

方差來源平方和自由度均方F值P值 模型189.151413.515.910.001 0 A0.0710.070.030.864 7 B133.181133.1858.26＜0.000 1 C8.3118.313.640.077 2 D5.0115.012.190.161 1 AB0.0910.090.040.849 4 AC0.4210.420.180.675 2 AD0.8710.870.380.546 2 BC0.5910.590.260.618 5 BD0.1210.120.050.822 8 CD0.0210.020.010.919 8 A21.4611.460.640.437 7 B28.6818.683.800.071 6 C222.63122.639.900.007 1 D212.02112.025.260.037 8 殘差32.00142.29 失擬項23.88102.391.180.475 0 純誤差8.1242.03 總誤差221.1528

由表3可知，該模型影響極顯著（＝0.001 0），且其失擬項不顯著（＝0.475 0），決定系數(shù)2＝0.855 3，表明模型相關(guān)度較好，校正決定系數(shù)2adj＝0.710 6。經(jīng)響應面回歸分析得到的最優(yōu)提取工藝條件為液料比6 mL/g、萃取5次、萃取溫度42.29 ℃、萃取時間22.41 min，在此條件下，馬藺籽油得率的理論值達到13.250%。

2.2 馬藺籽油理化特性分析

參照中華人民共和國國家標準《動植物油脂酸值和酸度的測定》（GB/T 5530－2005）、《動植物油脂皂化值的測定》（GB/T 5534－2008）、《動植物油脂過氧化值的測定》（GB/T 5538－2005）、《動植物油脂不皂化物測定第2部分：己烷提取法》（GB/T 5535.2－2008）分別測定馬藺籽油酸值、皂化值、過氧化值和不皂化物含量。結(jié)果顯示，馬藺籽油酸值為0.124 mg/g，皂化值為198.077 mg/g，過氧化值為4.346 mmol/kg，不皂化物含量為1.28%?？梢钥闯?，馬藺籽油的酸值與皂化值的差值很大，預測油品在劣化之后形成油泥沉淀的可能性比較大。

2.3 馬藺籽油脂肪酸成分分析

參照《食品安全國家標準：食品中脂肪酸的測定》（GB 5009.168－2016）方法對馬藺籽油進行甲酯化處理。采用氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）對馬藺籽油脂肪酸成分進行分析。分析條件：毛細管色譜柱為安捷倫DB-FFAP柱（100 m×0.25 mm ID，0.25 μm）；進樣口溫度280 ℃；載氣為氦氣；進樣量為1.0 μL；分流比20∶1；程序升溫50 ℃保持1 min，以25 ℃/min升溫至175 ℃，再以4 ℃/min升溫至230 ℃，保持5 min；電離方式為電子轟擊離子源（EI）；柱頭壓力230 kPa；傳輸線溫度280 ℃。通過檢索NIST14標準譜庫，分析圖譜中的主要成分，并采用面積歸一化法定量。亞臨界流體萃取法所得馬藺籽油脂肪酸主要為油酸（19.28%）及亞油酸（65.23%），不飽和脂肪酸總含量為86.602%，含量最高的飽和脂肪酸為棕櫚酸（6.050%），見表4。

表4 馬藺籽油脂肪酸組成及相對含量

序號脂肪酸相對含量/% 序號脂肪酸相對含量/% 1月桂酸0.038 10花生酸0.849 2肉豆蔻酸0.049 11α-亞麻酸0.382 3棕櫚酸6.050 1211-二十碳一烯酸0.032 4棕櫚油酸0.081 13二十一烷酸0.131 5十七烷酸0.041 14二十碳二烯酸0.074 6十七碳一烯酸0.083 15二十二烷酸0.143 7硬脂酸1.104 16二十三烷酸1.468 8油酸19.280 17二十碳五烯酸1.440 9亞油酸65.230 18二十四烷酸0.294

2.4 馬藺籽油不皂化物中甾醇含量測定

2.4.1 分析條件

氣相色譜條件：J&W DB-5MS UI毛細管色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；進樣口溫度275 ℃；進樣量為1.0 μL，分流比為10∶1；載氣為高純氦氣，流速1.0 mL/min；程序升溫初始溫度180 ℃，以15 ℃/min升溫至280 ℃，保持25 min。

質(zhì)譜條件：EI離子源，電子能量70 eV；離子源溫度230 ℃；四極桿溫度150 ℃；傳輸線溫度280 ℃；質(zhì)量范圍35～650 amu，全掃描方式；溶劑延遲2 min。

2.4.2 對照品溶液制備

分別稱取7.70 mg菜油甾醇、11.12 mg豆甾醇和10.28 mg β-谷甾醇于3個10 mL容量瓶中，用正己烷溶解并定容，配成甾醇對照品溶液。從上述3種對照品溶液中分別準確移取0.4 mL于2 mL離心管中，混勻，即得3種甾醇的混合對照品溶液，進樣測定。以峰面積為縱坐標，甾醇濃度為橫坐標，制作標準曲線，得到回歸方程。菜油甾醇：＝1.914 42×107＋8.495 44×107（＝0.999 18）；豆甾醇：＝2.506 25×107－1.454 65×107（＝0.999 78）；β-谷甾醇：＝1.474 98×107＋4.055 37×107（＝0.994 11）。

2.4.3 供試品溶液制備與樣品測定

將按照“2.2”項下方法制得的不皂化物溶于5 mL正己烷中，進行GC-MS分析。根據(jù)各對照品回歸方程計算菜油甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇的含量。結(jié)果亞臨界流體萃取法所得馬藺籽油中菜油甾醇含量為1620 mg/kg，豆甾醇含量為145 mg/kg，β-谷甾醇含量為18 860 mg/kg。

2.5 馬藺籽油總多酚含量測定

參照中華人民共和國糧食行業(yè)標準《糧油檢驗：植物油中多酚的測定分光光度法》（LS/T 6119－2017）對馬藺籽油的總多酚含量進行測定。

2.5.1 供試品溶液制備

準確稱取2 g（精確至0.001 g）樣品溶于6 mL正己烷中，將該溶液以1.0 mL/min流速通過二醇基固相萃取柱，再用10 mL正己烷淋洗萃取柱，棄去全部流出液，最后用10 mL甲醇洗脫，收集全部洗脫液，于45 ℃水浴中弱氮氣吹干，殘渣溶于2 mL甲醇-水溶液中，渦旋振蕩1 min，-18 ℃冷凍16 h，4 ℃、10 000 r/min離心5 min，取上清液，待測。

2.5.2 對照品溶液制備

配制濃度為1.0 mg/mL的沒食子酸對照品貯備液，用移液槍分別移取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL貯備液于100 mL容量瓶中，分別用純水定容至刻度，搖勻，即得濃度分別為10、20、30、40、50 μg/mL的沒食子酸工作液。

2.5.3 樣品測定

用移液槍分別移取沒食子酸工作液、純水及供試品溶液各1.0 mL于試管中，再依次加入福林酚試劑0.5 mL、7.5%碳酸鈉溶液2.0 mL和純水6.5 mL，渦旋振蕩1 min，70 ℃水浴反應30 min，于波長750 nm處測定吸光度。以沒食子酸工作液的吸光度為縱坐標，沒食子酸濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程＝0.010 04＋0.007 2（＝0.999 58）。將樣品吸光度代入回歸方程，平行試驗3次，計算總多酚平均含量為146.64 mg/kg。

2.6 馬藺籽油抗氧化活性測定

2.6.1 DPPH法

稱取DPPH 0.019 7 g，用無水乙醇定容至250 mL，配制成濃度為0.2 mmol/L的DPPH溶液，4 ℃保存?zhèn)溆谩７Q取馬藺籽油1.12 g，分別配制成濃度為28、14、7、3.5、0.875 mg/mL的馬藺籽油溶液。分別量取不同濃度的樣品溶液2 mL和DPPH溶液2 mL于試管中，避光反應30 min，于波長517 nm處測定吸光度。以2 mL無水乙醇和2 mL DPPH溶液為空白對照，計算DPPH自由基清除率。DPPH自由基清除率（%）＝[1－（Asample－Asample blank）/Acontrol]×100%。式中，Asample為DPPH與樣品混合溶液吸光度，Asample blank為不含DPPH的樣品溶液吸光度，Acontrol為空白對照溶液吸光度。

不同濃度馬藺籽油DPPH自由基清除率見圖1。在濃度為0.875～28 mg/mL范圍內(nèi)，馬藺籽油的DPPH自由基清除率隨濃度升高而增大，在14 mg/mL時達到最大，為71.42%。采用SPSS25軟件計算馬藺籽油DPPH自由基清除率的IC50值為12.033 mg/mL。

圖1 不同濃度馬藺籽油DPPH自由基清除率

2.6.2 FRAP法

按總抗氧化能力檢測試劑盒（A015-3 FRAP法）說明制備FRAP反應工作液，并于37 ℃水浴30 min，依次加入7、14、28、56、112、168、224、280 mg/mL馬藺籽油溶液，37 ℃反應5 min，測定反應液在波長593 nm處的吸光度，每個樣品重復3次。以純水為空白對照，以FeSO4?7H2O為對照品，分別配制濃度為0.15、0.30、0.60、0.90、1.20、1.50 mmol/L的溶液，以吸光度為縱坐標，對照品濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程＝0.314 32＋0.069 87（＝0.997）。將樣品溶液的吸光度代入回歸方程，用與樣品溶液抑制率相同的FeSO4濃度（mmol/L）表示樣品的總抗氧化能力，結(jié)果見圖2。馬藺籽油濃度在7～280 mg/mL范圍內(nèi)，其總抗氧化能力先升高后降低，在濃度為168 mg/mL時總抗氧化能力達到最高，為0.420 7 mmol/L FeSO4當量。

圖2 不同濃度馬藺籽油總抗氧化能力

3 討論

在亞臨界流體萃取法提取馬藺籽油的過程中，萃取壓力、溫度、時間、次數(shù)均為影響馬藺籽油得率的關(guān)鍵因素[11-12]。本研究采用響應面法優(yōu)化提取條件時發(fā)現(xiàn)，液料比在3～8 mL/g范圍內(nèi)，馬藺籽油得率隨液料比的增加呈先上升后下降的趨勢，可能原因是當溶劑量已滿足將馬藺籽油提取完全時，繼續(xù)增大溶劑量會造成提取之后脫溶劑困難，從而導致馬藺籽油得率下降。馬藺籽油得率隨著萃取次數(shù)增加其上升速率逐漸下降，可能由于萃取3次已可萃取出絕大部分馬藺籽油，故繼續(xù)增加萃取次數(shù)則馬藺籽油得率上升緩慢。萃取溫度在40 ℃左右已可萃取絕大部分馬藺籽油，繼續(xù)升高萃取溫度會造成溶劑揮發(fā)過快，液料比降低，從而使馬藺籽油得率下降。單因素試驗結(jié)果表明，馬藺籽油得率隨萃取時間延長而逐漸增大，在20 min處出現(xiàn)峰值。響應面優(yōu)化結(jié)果顯示，亞臨界流體萃取法提取馬藺籽油在最佳條件（液料比6 mL/g、萃取5次、萃取溫度42.29 ℃、萃取時間22.41 min）下，馬藺籽油得率的理論值達到13.250%。

亞臨界流體萃取法所得馬藺籽油的不皂化物含量為1.28%，與超臨界流體萃取法所得籽油不皂化物含量（1.31%）基本相同；酸值為0.124 mg/g，小于超臨界流體萃取法所得籽油酸值（0.239 mg/g）；皂化值為198.077 mg/g，略高于超臨界流體萃取法所得籽油皂化值（193.794 mg/g）；過氧化值為4.346 mmol/kg，低于超臨界流體萃取法所得馬藺籽油的過氧化值（7.026 mmol/kg）[6]。

亞臨界流體萃取法所得馬藺籽油脂肪酸主要為油酸（19.28%）及亞油酸（65.23%），不飽和脂肪酸含量為86.602%，飽和脂肪酸含量最高者為棕櫚酸（6.050%）。該結(jié)果與超臨界流體萃取法所得馬藺籽油的脂肪酸組成基本相同，但亞油酸相對含量明顯高于超臨界流體萃取法所得籽油（41.31%）[6]。亞臨界流體萃取法所得籽油總多酚含量為146.64 mg/kg沒食子酸當量，明顯高于超臨界流體萃取法所得籽油總多酚含量（36.55 mg/kg沒食子酸當量）。在其他常見籽油中，葡萄籽油總多酚含量為26.41～185.62 mg/kg[13]，橄欖油總多酚含量為21.26～26.04 mg/kg[14]。

亞臨界流體萃取法所得馬藺籽油的DPPH自由基清除率最高可達71.42%，其IC50值為12.033 mg/mL，超臨界流體萃取法所得馬藺籽油DPPH自由基清除率為18.99%～88.27%，其IC50值為3.27 mg/mL。FRAP法測定亞臨界流體萃取法所得馬藺籽油總抗氧化活性，在濃度為168 mg/mL時最強，為0.420 7 mmol/L FeSO4當量，而超臨界流體萃取法所得籽油在濃度為168 mg/mL時，總抗氧化活性最強為0.475 9 mmol/L FeSO4當量[6]。

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Study on Composition and Antioxidant Activity ofSeed Oil Extracted by Subcritical Fluid

LUAN Zhenjie1,2, LI Duo1,2, LI Peipei1,2, ZHAO Jingyang1, MENG Xiaoping1, SUN Jing1

To optimize the extraction conditions ofseed oil (ILSO) with subcritical fluid extraction technology; To analyze the composition of the ILSO, and evaluate the antioxidant activity.The response surface methodology was used to optimize the extraction conditions of ILSO by subcritical fluid technology, and the physical and chemical characteristics and total polyphenol content of the ILSO were also determined according to the national standard and industry standard, respectively. The composition and relative content of fatty acid were analyzed by GC-MS. DPPH and FRAP method were used to evaluate the antioxidant activity of ILSO.The optimal conditions for subcritical fluid extraction technology of ILSO were as follows: the liquid to material ratio was 6 mL/g, the extraction frequency was 5 times, the extraction temperature was 42.29 ℃, and the extraction time was 22.41 min. Under these conditions, the theoretical value of oil yield reached 13.250%. It was found that the unsaponifiable content of the obtained seed oil was 1.28%; the acid value was 0.124 mg/g; the saponification value was 198.077 mg/g; the peroxide value was 4.346 mmol/kg. The total polyphenols content of the seed oil was 146.64 mg/kg. When the seed oil concentration was 14 mg/mL, the DPPH free radical scavenging activity reached the maximum value of 71.42%, and IC50value was 12.033 mg/mL. The total antioxidant activity reached the strongest when the concentration of ILSO was 168 mg/mL, which was 0.420 7 mmol/L FeSO4equivalent.The seed oil obtained through subcritical fluid extraction technology in this study has a high content of total polyphenols and strong antioxidant activity.

subcritical fluid extraction technology; response surface methodology;seed oil; component analysis; antioxidant activity; total polyphenols

R284.2

A

1005-5304(2021)04-0101-06

10.19879/j.cnki.1005-5304.202008300

青海省科研基礎(chǔ)條件平臺建設(shè)項目（2020-ZJ-T05）；青海省自然科學基金面上項目（2019-ZJ-904）；青海省高端創(chuàng)新人才千人計劃（2017年）；中國科學院儀器設(shè)備功能開發(fā)技術(shù)創(chuàng)新項目（2022gl09）

孫菁，E-mail：sunj@nwipb.cas.cn

（收稿日期：2020-08-18）

（修回日期：2020-09-08；編輯：陳靜）