廣州市增城區(qū)人民醫(yī)院（511300）白艷 吳博

金黃色葡萄球菌（staphylococcus aureus，Sau）是一種常見的革蘭陽性菌，可導(dǎo)致多種感染性疾病的發(fā)生，對人類的生命健康產(chǎn)生了嚴重的威脅。隨著抗菌藥物的不合理使用或是濫用，耐藥菌株層出不窮，而Sau的耐藥性最為突出，其中以耐甲氧西林金葡菌（methicillin-resistant staphylococcus aureus，MRSA）的危害性最大[1]。Sau能夠長期定植于人類的鼻腔中，與其他細菌共生，當(dāng)Sau被轉(zhuǎn)移至呼吸道、手術(shù)切口部位或者血液中，在特定條件下能夠變成致病菌而導(dǎo)致感染的發(fā)生[2]。因此，對鼻腔內(nèi)的Sau定植情況進行篩查，對Sau相關(guān)醫(yī)院感染的控制具有重要作用。常規(guī)細菌培養(yǎng)方式是用于Sau定植篩查的耗時比較長，容易受到多種因素的干擾等[3]，故尋找一種快速、高效的Sau定植篩查方法，是臨床檢驗醫(yī)學(xué)領(lǐng)域重要的研究課題。醫(yī)務(wù)人員會與各類患者進行密切接觸，因此對醫(yī)務(wù)人員鼻腔Sau定植情況進行篩查，意義重大，本研究將通過探討Eswab多功能植絨采樣拭子聯(lián)合顯色培養(yǎng)基快速篩查我院醫(yī)務(wù)人員鼻腔Sau定植的價值，以期為臨床提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對象 以我院的150名醫(yī)務(wù)人員為研究對象，其中男性70例，女性80例，年齡25～55歲，平均為（36.47±4.80）歲，醫(yī)生60名，護士90名。對合并感染、炎癥性疾病、呼吸系統(tǒng)疾病、免疫系統(tǒng)低下、糖尿病等人群予以排除。

1.2 材料與儀器 Eswab多功能植絨采樣拭子（意大利COPAN公司）；MicroScan WalkAway plus 96/40全自動微生物鑒定與藥敏分析系統(tǒng)（貝克曼庫爾特公司）；MRSA選擇性顯色瓊脂培養(yǎng)（法國科瑪嘉公司）；革蘭陽性菌鑒定卡、革蘭氏陽性細菌藥敏卡片（法國梅里埃）；BD Bruker MALDI-Biotyper 全自動微生物鑒定質(zhì)譜分析系統(tǒng)（美國BD公司）；MultiGene Mini PCR儀、化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)（美國Labnet公司）；DNA聚合酶及Loading Marker（上海遠慕生物科技公司）；質(zhì)控菌株（中國科學(xué)院微生物研究所）。

1.3 標本的采集 Eswab多功能植絨采樣拭子包括1個采樣管、1ml液體培養(yǎng)基、1根鼻咽尼龍植絨拭子。使用液體培養(yǎng)基將植絨拭子頭進行濕潤，將植植絨采樣拭子頭插入鼻前孔2cm處，反復(fù)進行3～5次旋轉(zhuǎn)，確保能夠采集到黏膜上皮細胞。采集完成以后將拭子置入采樣管中，將拭子的手持部分進行折斷去除。于室溫下進行保存，在24h內(nèi)進行處理。

1.4 標本的培養(yǎng) 采用全自動微生物鑒定與藥敏分析系統(tǒng)將植絨采樣拭子接種于MRSA選擇性顯色瓊脂培養(yǎng)，35℃條件下進行16h的培養(yǎng)，通過系統(tǒng)軟件對菌落進行觀察。

1.5 Sau的質(zhì)譜鑒定 使用一次性接種環(huán)對單個菌落進行挑取，將菌落在靶板檢測點上進行均勻涂布，得到菌膜，將1μL的基質(zhì)液在菌膜上進行覆蓋；將質(zhì)控菌落在靶板質(zhì)控點進行均勻涂布，待菌落得到干燥以后，使用全自動微生物鑒定質(zhì)譜分析系統(tǒng)進行鑒定，嚴格執(zhí)行操作規(guī)程。

1.6 Sau的耐藥性分析 將菌落采用生理鹽水配置成為麥氏濁度菌懸液（0.5號），采用革蘭陽性菌鑒定卡、革蘭氏陽性細菌藥敏卡片在全自動微生物鑒定與藥敏分析系統(tǒng)上進行藥敏分析。按照美國CLSI抗菌藥物敏感試驗執(zhí)行標準M100 S28對藥敏結(jié)果進行判定：苯唑西林的MIC≥4μg/mL判定為MRSA，苯唑西林的MIC≤2μg/mL判定為甲氧西林敏感的金黃色葡萄球菌（methicillin-sensitive staphylococcus aureus，MSSA）。

1.7 Sau的mecA基因檢測 取菌落用0.5mL的生理鹽水制成菌懸液，離心（1200r/min，10min）獲取上清液，采用PCR儀進行檢測，上游引物5’-TGCCTGTCCTAGTACGATAC-3’，下游引物5’-TTCGAGATCATCGTCCGTAC-3’310bp的長度，按照文獻[4]報道的條件進行檢測；取5μL的PCR產(chǎn)物進行凝膠電泳，以DNA Loading Marker作為參照，加入熒光染料后進行凝膠成像分析。mecA基因（-）判定為MSSA，mecA基因（+）判定為MRSA。

2 結(jié)果

2.1 鼻腔Sau定植快速篩查結(jié)果 150份標本中，35株Sau菌株經(jīng)初篩檢出，Sau定植率為23.3%。35株Sau菌株中，包括18株（51.4%）MSSA菌株及17株（48.6%）MRSA菌株，MRSA定植率為11.3%；Sau菌株的報陽時間為（16.5±3.2）h。

2.2 鼻腔Sau定植快速篩查結(jié)果準確性的驗證結(jié)果 35株Sau菌株經(jīng)過質(zhì)譜鑒定均為18株MSSA菌株及17株MRSA菌株，符合率為100.0%；Sau菌株的耐藥性分析，18株MSSA菌株的苯唑西林MIC≤2μg/mL，17株MRSA菌株的苯唑西林MIC≥4μg/mL，符合率為100.0%；Sau菌株的mecA基因檢測，18株MSSA菌株的mecA基因為陰性，17株MRSA菌株中有1株菌株的mecA基因為陰性，16株菌株的mecA基因為陽性，符合率為97.1%。見附表。

附表 鼻腔Sau定植快速篩查結(jié)果準確性的驗證結(jié)果（株）

3 討論

Sau是人類的一種重要病原菌，能夠引起許多嚴重感染。Sau常定植于鼻腔中，當(dāng)宿主的免疫功能出現(xiàn)障礙時，鼻腔內(nèi)的Sau會轉(zhuǎn)變?yōu)闂l件致病菌，并且可以轉(zhuǎn)移到身體的其他部位，導(dǎo)致感染性疾病的發(fā)生。根據(jù)是否對苯唑西林耐藥，Sau可以分為MSSA與MASA，MRSA耐藥性形成的主要機制是由于金葡菌獲得mecA基因[5]，而MRSA導(dǎo)致的感染比較棘手。目前，醫(yī)療機構(gòu)中MRSA的檢出率越來越高，給醫(yī)院感染的控制工作帶來了挑戰(zhàn)。而醫(yī)務(wù)人員在臨床診療過程中，會與患者進行不同程度的接觸，了解醫(yī)務(wù)人員鼻腔內(nèi)的Sau定植情況，已經(jīng)成為一項新的課題，同時對醫(yī)院感染控制工作的開展具有重大意義。

目前，醫(yī)療機構(gòu)的微生物檢驗工作的自動化水平并不高，在微生物的檢驗過程中，標本的培養(yǎng)及鑒定、耐藥性的分析及基因的檢測等環(huán)節(jié)對報告的時效性進行了限制，因此，提高微生物檢驗工作的效率及時效性是需要解決的關(guān)鍵問題[6]。隨著臨床檢驗醫(yī)學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，實現(xiàn)實驗室的自動化是必然趨勢。Eswab多功能植絨采樣拭子包括1個采樣管、1ml液體培養(yǎng)基、1根鼻咽尼龍植絨拭子，是唯一能在室溫和冰箱溫度下保持需氧菌、厭氧菌和苛養(yǎng)菌生存力長達48h的多用途液基采集儲存系統(tǒng)，用于儲存細菌、病毒、衣原體、脲支原體和支原體的核酸和抗原，其通用性可精簡實驗室中標本管理流程中的所有步驟[7]；MRSA選擇性顯色瓊脂培養(yǎng)中含有選擇性抑制劑，能夠?qū)δ承┢渌毦纳L進行抑制，產(chǎn)色能夠使SA菌落呈現(xiàn)綠色，能夠?qū)A進行直接篩選及鑒定[8]。

本研究探討了植絨采樣拭子聯(lián)合顯色培養(yǎng)基快速篩查醫(yī)務(wù)人員鼻腔Sau定植的價值，結(jié)果顯示：鼻腔Sau定植率與MRSA定植率分別為23.3%、11.3%，說明我院醫(yī)務(wù)人員鼻腔Sau定植率較高，特別是MRSA，對我院醫(yī)院感染工作提出了警示；陽性報告時間在16h左右，遠遠低于傳統(tǒng)培養(yǎng)的3h；鼻腔Sau定植快速篩查與質(zhì)譜鑒定、耐藥性分析及mecA基因檢測的符合率分別為100.0%、100.0%、97.1%，說明該快速篩查方法具有很強的優(yōu)勢。

總之，我院醫(yī)務(wù)人員鼻腔Sau定植率較高，需要采取一定的控制手段。植絨采樣拭子聯(lián)合顯色培養(yǎng)基是一種快速、精準的鼻腔Sau定植篩查方法，臨床價值高。