河南省駐馬店市食品藥品檢驗(yàn)所（463000）薛毅博 孫紅濤 王佳佳

附圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

附圖2 高效液相色譜法色譜圖

糖精鈉學(xué)名叫鄰磺酰苯酰亞胺鈉，其甜度是蔗糖的200倍左右。這種物質(zhì)除了能夠在味覺上能夠嘗出甜的味道之外，不會(huì)參與到機(jī)體代謝中，也不會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生營養(yǎng)價(jià)值。雖然服用糖精鈉不會(huì)引起任何不適，但是服用較多會(huì)在一定程度上影響其腸胃消化酶的分泌，從而降低小腸吸收，導(dǎo)致食欲不佳。因此需要限制其應(yīng)用，通過對(duì)中成藥物中的糖精鈉含量檢測，控制糖精鈉含量，能夠保證不會(huì)影響患者的消化功能[1]?，F(xiàn)階段臨床應(yīng)用高效液相色譜法檢測具有分離快、靈敏度高等優(yōu)勢，能夠顯著提升中成藥品檢驗(yàn)的工作效率。本研究僅以三金片為載體探討了中成藥物中糖精鈉含量檢測中高效液相色譜法的應(yīng)用，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 樣品、儀器與試藥

1.1 樣品 三金片粉碎，委托第三方制作不同糖精鈉含量的樣品5個(gè)。樣品1糖精鈉含量0.05mg/g，樣品2糖精鈉含量0.10mg/g，樣品3糖精鈉含量0.25mg/g，樣品4糖精鈉含量0.50mg/g，樣品5糖精鈉含量0.80mg/g。1.2 儀器 高效液相色譜（型號(hào)：安捷倫1260型）、離心機(jī)（型號(hào)：CH12型）、KQ-250型超聲波振蕩儀、稱量天平（型號(hào)：賽多利斯MSA225S，規(guī)格：200g/0.1mg）。

1.3 試藥 亞鐵氰化鉀500g分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠；乙酸鋅500g分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠；甲醇500ml色譜純，山東西亞化學(xué)工業(yè)有限公司。

2 方法與條件

2.1 色譜條件 應(yīng)用安捷倫1260型高效液相色譜系統(tǒng)，配備可變波長紫外可見檢測器，C18色譜柱（150mm×4.6mm，5μm）；將標(biāo)準(zhǔn)使用液在190～370nm的波長下進(jìn)行光譜掃描，確定最大檢測波長為230nm；流動(dòng)相：CH30H（色譜純）-0.02mol/L乙酸銨（7.5∶92.5）。流速為0.8mL/min；柱溫35℃；進(jìn)樣量：10μL。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備 糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備：稱取經(jīng)過120℃烘干4h后的糖精鈉（來源：中國食品藥品檢定研究院 500mg/支），精密稱取0.1172g，置100ml容量瓶加純化水定容，混勻，將其作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。糖精鈉中間標(biāo)準(zhǔn)溶液：將儲(chǔ)備溶液用純化水進(jìn)行稀釋，配成濃度為200mg/L的中間標(biāo)準(zhǔn)溶液。糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：將糖精鈉中間標(biāo)準(zhǔn)溶液配置成濃度為0mg/L、1.00mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L、100mg/L、200mg/L的標(biāo)準(zhǔn)使用溶液。

2.3 樣品溶液制備 取樣品1至樣品5，分別精密稱取5g的樣品加入至50ml容量瓶中，超聲提取10分鐘，加入亞鐵氰化鉀（江蘇采薇生物科技有限公司）溶液（0.25mol/L）2ml，乙酸鋅溶液（上?？道噬锟萍加邢薰?，250ml）（1mol/L）2ml，用水稀釋至刻度混勻，用0.45μm微孔濾膜進(jìn)行過濾。取空白三金片，精密稱取5g的樣品3份分別置50ml容量瓶中，分別添加10.0mg/L、5.0mg/L及2.5mg/L不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液10ml，命名為糖精鈉1、糖精鈉2及糖精鈉3。

2.4 線性關(guān)系考察 將糖精鈉中間標(biāo)準(zhǔn)溶液配置成濃度為0mg/L、1.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L、100mg/L、200mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣，以樣品峰面積為縱軸、標(biāo)品濃度為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.5 回收率測定 糖精鈉1、糖精鈉2及糖精鈉3進(jìn)行回收實(shí)驗(yàn)，應(yīng)用外標(biāo)法定量，每個(gè)添加水平單獨(dú)測3次，測定回收率。

2.6 準(zhǔn)確度測定 對(duì)樣品1到樣品5，含不同濃度糖精鈉的樣品進(jìn)行了平行分析，準(zhǔn)確度以回收率計(jì)算。

2.7 檢出限和定量限 測定方式：應(yīng)用基線噪音方式測定。

3 結(jié)果

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線 將標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣，以樣品峰面積為縱軸、標(biāo)品濃度為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到Y(jié)=24.72x+11.57，R2=0.999，見附圖1。樣品中糖精鈉的圖譜見附圖2（保留時(shí)間7.782分鐘為糖精鈉峰）。

3.2 準(zhǔn)確度 對(duì)5份樣品進(jìn)行測定，計(jì)算回收率，詳見附表1。

附表1 準(zhǔn)確度對(duì)比

3.3 回收率 分別加入不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的同一樣品，平均回收率為100.2%。詳見附表2。

附表2 回收率實(shí)驗(yàn)

3.4 檢出限和定量限 將標(biāo)準(zhǔn)溶液逐步稀釋進(jìn)樣，以3倍信噪比為檢出限，10倍信噪比為定量限，確定檢出限為0.3μg/ml，定量限為0.8μg/ml。

4 討論

三金片具有清熱解毒、利濕通淋以及補(bǔ)虛益腎等作用，多應(yīng)用于治療急慢性腎盂腎炎、慢性腎盂腎炎急性發(fā)作及尿路感染等。但是長期以來因缺乏穩(wěn)定特異的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照物質(zhì)，中成藥物很少有以糖精鈉為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定量質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。臨床有研究顯示，通過對(duì)動(dòng)物進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，糖精鈉可以誘發(fā)癌癥，但是并沒有相關(guān)研究顯示糖精鈉能夠誘發(fā)人類致癌[2]。但是大量使用也會(huì)導(dǎo)致身體出現(xiàn)不適，因此控制中成藥物糖精鈉的含量十分重要。

目前藥品含量和有關(guān)物質(zhì)測定多采用高效液相色譜法檢測，這種方法是將液體當(dāng)成流動(dòng)相，然后使用高壓輸液系統(tǒng)檢測[3]。而且在藥品生產(chǎn)中，若生產(chǎn)環(huán)境產(chǎn)生一定變化，極有可能導(dǎo)致其原料中出現(xiàn)一些附加成分，產(chǎn)生有害物質(zhì)，一旦超出相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)就會(huì)降低藥品中的有效成分，致使中成藥的質(zhì)量不合格[4]。因此需嚴(yán)格控制藥物附加成分，通過應(yīng)用高效液相色譜法檢驗(yàn)其含量具有常規(guī)檢驗(yàn)方法不具備的優(yōu)勢。此外，高效液相色譜法在質(zhì)量檢測中起到了十分重要的作用，有利于為中成藥物質(zhì)量提供一定的保障[5]。

目前高效液相色譜法應(yīng)用于食品、藥品等行業(yè)的監(jiān)測中，有研究表明，高效液相色譜法在鑒別曲安奈德和頭孢拉定具有良好的效果。而且對(duì)于相似藥物難以區(qū)分時(shí)，應(yīng)用高效液相色譜方法檢測可以有效進(jìn)行區(qū)分，如云防風(fēng)、水防風(fēng)等藥物，經(jīng)檢測后發(fā)現(xiàn)，其藥理作用存在顯著差異[6][7]。通過應(yīng)用高效液相色譜法對(duì)中成藥物中的糖精鈉進(jìn)行檢測可以保證藥物的安全性。本研究的結(jié)果顯示，取樣量5g，定容至50ml的條件下，進(jìn)樣量10μL，柱溫35℃，糖精鈉含量0.05mg/g～0.8mg/g的范圍內(nèi)，測量結(jié)果有較高的準(zhǔn)確度。表示應(yīng)用高效液相色譜法可以有效檢測出糖精鈉含量，其檢測結(jié)果可靠。由于中成藥物成分較為復(fù)雜，糖精鈉檢驗(yàn)難度也比較大，應(yīng)用高效液相色譜法能夠降低中成藥物的分離難度，有效測定中成藥物中的有效成分。本研究檢測三金片中的糖精鈉可以有效實(shí)現(xiàn)中成藥物各成分的分離，有利于推動(dòng)中成藥物質(zhì)量檢驗(yàn)工作的規(guī)范化發(fā)展。

通過應(yīng)用高效液相色譜法檢測中成藥物中的糖精鈉含量，避免中成藥物中的復(fù)雜成分對(duì)其產(chǎn)生的干擾，其檢測具有較高的準(zhǔn)確度和回收率，對(duì)臨床應(yīng)用具有十分重要的意義[8]。在本研究中通過對(duì)中成藥物的糖精鈉含量進(jìn)行檢測，其準(zhǔn)確度、回收率都比較高。這也在一定程度上說明使用高效液相色譜法具有優(yōu)勢，而且使用高效液相色譜法其操作簡便、效果可靠，本次研究通過這種方式對(duì)中成藥中糖精鈉進(jìn)行了含量測定，測定結(jié)果穩(wěn)定且準(zhǔn)確度高，能夠作為糖精鈉質(zhì)量控制的指標(biāo)。

綜上所述，高效液相色譜法在檢測中成藥物中的糖精鈉含量具有較高的準(zhǔn)確度和回收率，而且該方式操作比較方便，在臨床藥物檢驗(yàn)中值得大力推廣。