王志恒，劉曉妍，邱 博，楊浩天，龐國勛△

（1.河北省人民醫(yī)院藥學(xué)部，河北 石家莊050000；2.上海和睦家新城醫(yī)院，上海200120）

當(dāng)胃腸功能嚴重障礙時，腸外營養(yǎng)（PN）可通過胃腸道以外的途徑即靜脈途徑提供機體所需營養(yǎng)物質(zhì)，改善預(yù)后［1］。當(dāng)患者必需的所有營養(yǎng)物質(zhì)均從胃腸外途徑供給時，稱為全腸外營養(yǎng)（TPN）。維生素C是體內(nèi)有效的還原劑，在保護和維持體內(nèi)一些重要抗氧化物質(zhì)處于還原狀態(tài)中起著重要作用［2］。目前，臨床根據(jù)需要，常將維生素C加入TPN液中，為不耐受腸內(nèi)營養(yǎng)及伴有腸內(nèi)營養(yǎng)禁忌的重癥患者提供PN治療［3］。維生素C不穩(wěn)定，極易氧化，受光照、溫度、時間、包裝材料等多種因素影響，其降解速度由氧、光線、吸收和吸附及催化劑決定［4-5］。維生素A、維生素C等遇到空氣會發(fā)生氧化反應(yīng)，遇到紫外線會逐漸分解，而維生素是TPN液中不可缺少的組成部分，故臨床使用TPN液如需加入維生素時，一定要避光輸注［5-6］。本研究中考察了在相同光照及溫度條件下，不同時間點、不同包裝材料對TPN液中維生素C含量的影響，為TPN液的合理應(yīng)用提供參考?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器、試藥與材料

1.1 儀器

New Classic MS型分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司，精度為萬分之一）；TGL-16型高速離心機（山東百歐醫(yī)療科技有限公司）；ACQUITY H-Class型超高效液相色譜(UPLC)儀（美國Waters公司）；FE20型實驗室pH計（梅特勒-托利多儀器＜上海＞有限公司）。

1.2 試藥

脂肪乳氨基酸（17）葡萄糖（11%）注射液（商品名卡文，批號為10MD3889，規(guī)格為每袋1 440 mL），甘油磷酸鈉注射液（商品名格利福斯，批號為80ME569，規(guī)格為每支10 mL∶2.16 g），均購自費森尤斯卡比華瑞制藥有限公司；脂肪乳注射液（C14-24）［商品名英脫利匹特（20%），批號為80MF072，規(guī)格為每瓶250 mL，主要成分為注射用大豆油50 g，注射用卵磷脂3.0 g，注射用甘油5.5 g，適量氫氧化鈉，注射用水］，復(fù)方氨基酸注射液（18AA-Ⅱ）（商品名樂凡命，批號為80MG050，規(guī)格為250 mL，主要成分為氨基酸21.25 g，氮3.5 g），均購自華瑞制藥有限公司；10%葡萄糖注射液（華潤雙鶴藥業(yè)股份有限公司，批號為C201803193，規(guī)格為每瓶100 mL∶10 g/250 mL∶25 g）；濃氯化鈉注射液（石家莊四藥有限公司，批號為Y1805052，規(guī)格為每瓶100 mL∶10 g）；氯化鉀注射液（中國大冢制藥有限公司，批號為8186K2，規(guī)格為每支10 mL∶1.0 g）；葡萄糖酸鈣注射液（成都倍特藥業(yè)有限公司，批號為180202，規(guī)格為每支10 mL∶0.1 g）；硫酸鎂注射液（天津金耀集團湖北天藥藥業(yè)股份有限公司，批號為1805051，規(guī)格為每支10 mL∶2.5 g）；維生素C注射液（上海禾豐制藥有限公司，批號為72180532，規(guī)格為每支5 mL∶1 g，含量＞98%）；維生素C對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為100425-201504，規(guī)格為100 mg，含量為100%）；甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

1.3 材料

三層共擠三腔輸液袋（Biofine膜，費森尤斯卡比華瑞制藥有限公司，批號為10MD3889）；一次性使用靜脈營養(yǎng)輸液袋［乙烯-醋酸乙烯酯共聚物（EVA）材質(zhì)，江蘇康進醫(yī)療器材有限公司，批號為20180905］；一次性使用靜脈營養(yǎng)輸液袋［聚氯乙烯（PVC）材質(zhì)，上海曹楊醫(yī)藥用品廠，批號為20180815］。

2 方法與結(jié)果

2.1 處方

參照TPN液中葡萄糖、氨基酸、脂肪乳及其他成分比例制訂基礎(chǔ)處方（表1），并參考美國食品藥物管理局（FDA）與2003年公布的成人PN多種維生素日需要量推薦建議為200 mg/d［5］，于TPN液中加入維生素C。

2.2 3種包裝材料TPN液配置

在靜脈藥物配置中心，于水平層流臺上，嚴格按無菌操作規(guī)程配置。分別將硫酸鎂注射液、葡萄糖酸鈣注射液、氯化鉀注射液、濃氯化鈉注射液及維生素C注射液加入葡萄糖注射液中，注入營養(yǎng)袋內(nèi)，注入過程中輕輕搖動；將甘油磷酸鈉注射液加入氨基酸注射液中，注入已配置好的營養(yǎng)袋內(nèi)，注入過程中輕輕搖動；將脂肪乳注射液注入營養(yǎng)袋內(nèi)，注入過程中不斷搖動；注入完畢，營養(yǎng)袋排氣封口。將配置好的TPN液分別注于EVA與PVC材質(zhì)一次性使用靜脈營養(yǎng)輸液袋（以下簡稱EVA袋與PVC袋）中。將脂肪乳氨基酸（17）葡萄糖（11%）注射液正放于水平層流臺上，卷起袋子施加壓力，使葡萄糖與氨基酸兩腔垂直封隔打開，2種液體混合均勻；繼續(xù)卷動袋子，施加壓力，使脂肪乳隔室的垂直封隔打開；將脂肪乳氨基酸（17）葡萄糖（11%）注射液上下顛倒3次，即混合完全。將配置完成的2種TPN液分別注于PVC袋（A組）、EVA袋（B組）與三層共擠膜營養(yǎng)袋（C組）中，置于室溫（25℃）日常光照下（模擬正常臨床使用情況）。

表1 全腸外營養(yǎng)液處方（mL）Tab.1 The prescriptions of TPN（mL）

2.3 維生素C含量測定

2.3.1 色譜條件

色譜柱：Zorbax Eclipse XDB C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：5 mmol/L磷酸二氫鉀溶液-甲醇（60∶40，V/V）；流速：0.7 mL/min；檢測波長：266 nm；柱溫：30℃；進樣量：2μL。

2.3.2 溶液制備

取維生素C對照品20 mg，精密稱定，置50 mL棕色容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，得維生素C對照品貯備液；精密吸取1.50 mL維生素C對照品貯備液，置10 mL棕色容量瓶中，加流動相稀釋并定容至刻度，即得對照品溶液。吸取維生素C注射液0.20 mL，按表1處方加入同比例縮小配置的樣品溶液［即20%脂肪乳注射液（C14-24）17.70 mL，復(fù)方氨基酸注射液（18AA-Ⅱ）20.50 mL，10%葡萄糖注射液61.80 mL，甘油磷酸鈉注射液0.48 mL，葡萄糖酸鈣注射液0.15 mL，硫酸鎂注射液0.13 mL，氯化鉀注射液1.25 mL，濃氯化鈉注射液1.04 mL］，吸取1.50 mL，置10 mL棕色容量瓶中，加流動相稀釋并定容至刻度，吸取適量轉(zhuǎn)移至離心管中，12 000 r/min離心10 min，取上清液，0.22μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。按供試品溶液制備方法制備去除維生素C的陰性對照品溶液。

2.3.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗：分別精密吸取2.3.2項下溶液，按2.3.1項下色譜條件進樣分析，記錄色譜圖（圖1）。結(jié)果陰性對照無干擾，表明方法專屬性良好。

線性關(guān)系考察：分別精密吸取2.3.2項下維生素C對照品貯備液0.125，0.25，0.5，1.0，1.5，3.0 mL，置10 mL棕色容量瓶中，加流動相稀釋并定容至刻度，得終濃度為5.0，10.0，20.0，40.0，60.0，80.0μg/mL的維生素C溶液，按2.3.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以待測成分色譜峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、對照品質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=1.282 210 4X+2.830 510 3，r=0.999 9(n=6）。結(jié)果維生素C質(zhì)量濃度在5.0～80.0μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：取2.3.2項下對照品溶液，按2.3.1項下色譜條件連續(xù)進樣測定6次，記錄峰面積。結(jié)果維生素C峰面積的RSD為1.75%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗：按2.3.2項下方法平行制備6份供試品溶液，按2.3.1項下色譜條件下進樣測定。結(jié)果維生素C含量的平均值為58.9μg/mL，RSD為2.37%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗：取同一批（批號為72180532）維生素C注射液，精密量取6份，每份50μL，置10 mL棕色容量瓶中，取維生素C對照品10 mg，精密稱定，分別加入6份維生素C注射液中，加流動相稀釋至刻度，準(zhǔn)確稀釋100倍，按2.3.1項下色譜條件進樣測定，并計算含量和回收率。結(jié)果見表2。

圖1 超高效液相色譜圖1.vitamin CA.Reference solution B.Test solution C.Negative reference solutionFig.1 UPLC chromatograms

表2 維生素C加樣回收試驗結(jié)果（n=6）Tab.2 Recovery test of vitamin C（n=6）

2.4 穩(wěn)定性考察

外觀考察：分別于制備后0，2，4，6，8，24 h時對2.2項下各組TPN液取樣，肉眼觀察溶液。結(jié)果3組TPN液顏色均無變化，無分層、沉淀、絮凝現(xiàn)象發(fā)生。

pH值測定：分別于制備后0，2，4，6，8，24 h時對2.2項下各組TPN液取樣，平行3份，使用pH計測量pH值。結(jié)果見表3。3組各時間點組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；3組各時間點組內(nèi)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

表3 TPN液pH值測定結(jié)果（±s，n=3）Tab.3 Determination results of pH value of TPN（±s，n=3）

表3 TPN液pH值測定結(jié)果（±s，n=3）Tab.3 Determination results of pH value of TPN（±s，n=3）

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維生素C含量測定：分別于制備后0，2，4，6，8，24 h時吸取2.2項下各組TPN液2.0 mL，置10 mL容量瓶中，稀釋至刻度，依法制備供試品溶液，按2.3.1項下色譜條件進樣測定含量，計算不同時間各組溶液中維生素C的相對含量（以每組0 h含量計為100%，計算各時間點的相對百分含量）。結(jié)果見表4。可見，3組維生素C的含量均隨時間的延長而逐漸減少，A組（PVC袋）TPN液中維生素C含量下降最明顯，在室溫下放置2 h時降至91%，6 h時降至71%，24 h時降至33%；B組（EVA袋）維生素C含量下降較緩慢，4 h時降至90%，6 h時降至86%，24 h時降至43%；C組（三層共擠膜營養(yǎng)袋）中維生素C含量變化最小，放置24 h時僅降至91%。

表4 TPN中維生素C相對百分含量測定結(jié)果（±s，%，n=3）Tab.4 Determination of relative percentage content of vitamin C in TPN（±s，%，n=3）

表4 TPN中維生素C相對百分含量測定結(jié)果（±s，%，n=3）Tab.4 Determination of relative percentage content of vitamin C in TPN（±s，%，n=3）

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3 討論

TPN液經(jīng)靜脈途徑為患者提供水、葡萄糖、氨基酸、脂肪乳、電解質(zhì)、多種微量元素、維生素及某些藥理營養(yǎng)素（如谷氨酰胺、ω-3脂肪酸等）或藥物（如胰島素），所有這些添加物和添加順序、添加方式及包裝材料均可能影響TPN液的穩(wěn)定性和相容性［4，7-8］。在進行混合、儲藏及輸注過程中，制劑穩(wěn)定性有所下降，若實際輸注的營養(yǎng)成分含量不達標(biāo)，或因成分不穩(wěn)定而發(fā)生某些物理化學(xué)變化，會對患者身體造成損傷，甚至威脅生命。目前，影響TPN液穩(wěn)定性的因素包括各營養(yǎng)成分的降解及脂肪乳的穩(wěn)定性、TPN液的各項參數(shù)(如pH值、不溶性微粒等)，以及營養(yǎng)物質(zhì)間的穩(wěn)定性［9-10］。

TPN液成分復(fù)雜，影響維生素C含量的因素較多，本研究中以5 mmol/L磷酸二氫鉀溶液-甲醇（60∶40，V/V）為流動相，采用UPLC法短時間完成一次含量分析，相比2015年版《中國藥典（二部）》中的碘量法和滴定法［11］，分離效果及分析效率均更優(yōu)。通過方法學(xué)驗證，本研究中所建立的含量測定方法合理準(zhǔn)確、簡便可行。

pH值是影響TPN液穩(wěn)定性的重要因素。當(dāng)pH＜5時，會使脂肪乳喪失穩(wěn)定性；當(dāng)pH值偏高時，維生素C和維生素B6等結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，易失效［12］，pH值控制在5.0～6.5時可保持TPN液的相對穩(wěn)定［10］。本研究中，3組TPN液的pH值范圍為5.50±0.02～5.70±0.02，變化不明顯，介于穩(wěn)定范圍內(nèi)，表明不同材質(zhì)營養(yǎng)袋及維生素C的加入對TPN液的pH值影響較小。

配置TPN液需將多種注射液混合，調(diào)配過程中易殘余部分溶液，使實際溶液體積與理論不符，故將各組0 h時維生素C含量記為100%，計算不同時間點的相對百分含量，以減小誤差。不適宜的營養(yǎng)袋材質(zhì)可能引起TPN液中各活性成分的遷移、附著、吸附，甚至發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，影響其療效［4］。結(jié)果表明，所有材質(zhì)營養(yǎng)袋中維生素C在24 h內(nèi)含量均呈下降趨勢。其中，PVC材質(zhì)營養(yǎng)袋對維生素C含量變化影響最顯著，可能是由于PVC材料較強的吸附性及較差的密封性，導(dǎo)致維生素C的吸附與氧化。EVA材質(zhì)營養(yǎng)袋中維生素C放置4 h時下降10%，可能與EVA相較于三層共擠膜氧氣更易滲透進入，加速維生素C的氧化有關(guān)。三層共擠膜營養(yǎng)袋放置24 h后維生素C含量變化最小，說明相較于其他2種材質(zhì)，其更適合用于含維生素C的TPN液的保存。由于本試驗未對高、中、低不同濃度維生素C的穩(wěn)定性進行考察，維生素C的濃度對自身穩(wěn)定性是否有影響仍有待進一步研究。