鮑志國 雷威

肺癌已成為我國發(fā)生率和死亡率最高的惡性腫瘤，其中肺腺癌發(fā)病率占原發(fā)性肺癌的30%左右，因此早期診斷并積極治療對(duì)改善患者預(yù)后具有重要意義[1]。螺旋CT 在檢查及診斷肺癌中具有準(zhǔn)確率高且創(chuàng)傷性小等優(yōu)點(diǎn)[2]。近年來隨著分子生物學(xué)飛速發(fā)展，微小RNA 研究在臨床日益增多，屬于小的非編碼的RNA 能夠靶向調(diào)控mRNA 影響蛋白表達(dá)，形成相應(yīng)的生物學(xué)改變，在不同組織中對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞周期及細(xì)胞分化進(jìn)行影響，還可以作為促癌因子或者抑癌因子參與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程。miR-22-3p 可通過下調(diào)靶基因抑制肝癌的增殖和轉(zhuǎn)移，但其在肺腺癌中的研究較少[3]。本研究分析了肺腺癌中miR-22-3p表達(dá)水平，同時(shí)和CT征象進(jìn)行對(duì)比研究，探討兩者之間的關(guān)系，以期為臨床提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料選取2017年1月～2019年3月我院保存的肺腺癌組織標(biāo)本98例，其中男55例，女43例；年齡＜60歲者45例，≥60歲者53例；病灶＜3cm 者50例，≥3cm 者48例。同時(shí)選取癌旁組織（距癌組織邊緣＞5cm）30例作為對(duì)照。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)病理學(xué)確診為肺腺癌；②初次發(fā)??；③臨床影像資料保存完整；④術(shù)前無放化療等抗腫瘤治療史。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有其他系統(tǒng)惡性腫瘤；②有心、肝、腎等其他重要臟器疾病。

1.2 方法患者均行平掃加強(qiáng)化掃描，儀器為德國西門子Samatom Sensation 16層螺旋CT機(jī)，從肺尖直至肺底區(qū)域進(jìn)行檢查，掃描參數(shù)設(shè)定：螺距1.08，電壓120kV，電流250mA，重建層厚5mm，掃描時(shí)間為5～7s，矩陣512×512。同時(shí)開展高分辨率靶掃描，參數(shù)設(shè)定：螺距0.64，電壓120kV，電流300mA，重建層厚1mm，掃描時(shí)間為5～7s，矩陣1 024×1 024，按照高分辨算法進(jìn)行計(jì)算。采用雙盲法進(jìn)行閱片，由影像科主治醫(yī)生和副主任醫(yī)師進(jìn)行分析，對(duì)肺結(jié)節(jié)、支氣管開展觀察，若有分歧進(jìn)行討論獲取一致意見。

1.3 RT-PCR檢測(cè)對(duì)肺腺癌腫瘤組織和癌旁組織的總RNA 按照MirNeasy Mini Kit 試劑盒說明書進(jìn)行提取，總RNA 的濃度和純度由紫外分光光度計(jì)檢測(cè)。按照TaKaRa 公司提供的試劑盒說明書上的反應(yīng)條件設(shè)置溫度，在PCR 儀上進(jìn)行cDNA 逆轉(zhuǎn)錄。PCR反應(yīng)過程：激活聚合酶50℃ 2min，預(yù)變性95℃30s；變性95℃ 5s，退火和延伸60% 34s，經(jīng)過40個(gè)循環(huán)擴(kuò)增。按照2-△△CT凹法對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，計(jì)算肺腺癌腫瘤組織和癌旁正常組織中表達(dá)情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 22.0 軟件，miR-22-3p相對(duì)表達(dá)量采用表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，miR-22-3p 相對(duì)表達(dá)量與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、胸膜凹陷征和血管集束征相關(guān)性采用Spearman 秩相關(guān)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α 為0.05。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺腺癌和癌旁組織miR-22-3p表達(dá)比較肺腺癌組織miR-22-3p 相對(duì)表達(dá)量0.544±0.112 明顯低于癌旁組織1.011±0.106，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=20.228，P＜0.05）。

2.2 miR-22-3p表達(dá)與肺腺癌臨床病理資料關(guān)系臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺腺癌組織miR-22-3p 相對(duì)表達(dá)量明顯低于臨床分期Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺腺癌組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 miR-22-3p表達(dá)與肺腺癌臨床病理資料關(guān)系

2.3 miR-22-3p表達(dá)與CT征象的關(guān)系miR-22-3p相對(duì)表達(dá)量與胸膜凹陷征、平掃CT值、血管集束征有一定關(guān)系（P＜0.05），見表2。

表2 miR-22-3p表達(dá)與CT征象關(guān)系

續(xù)表2

2.4 相關(guān)性分析miR-22-3p 相對(duì)表達(dá)量與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、胸膜凹陷征和血管集束征呈負(fù)相關(guān)（r=-0.454、-0.473、-0.357 和-0.360，P＜0.05）。

3 討論

近年來肺癌發(fā)病率呈升高趨勢(shì)，危及患者生命安全，因此對(duì)于肺癌早期診斷、精確分期和合理治療至關(guān)重要[3，4]。對(duì)肺癌進(jìn)行快速有效的早期診斷是降低肺癌病死率的重要手段[5，6]。螺旋CT 檢查在肺癌診斷中發(fā)揮了很大作用，CT 可以顯示某個(gè)斷面組織密度，分辨率高，受組織結(jié)構(gòu)的干擾較小，該方法利用X 線球管連續(xù)性的旋轉(zhuǎn)曝光并配合縱軸的勻速移動(dòng)完成螺旋形空間分布的掃描并進(jìn)行數(shù)據(jù)采集[7]。肺腺癌在管腔內(nèi)呈現(xiàn)息肉狀、菜花樣新生物突起，因此CT 容易出現(xiàn)肺不張征象，而小細(xì)胞肺癌則表現(xiàn)為血管怒張，黏膜粗糙肥厚，容易出現(xiàn)管腔狹窄，但是完全閉塞導(dǎo)致的肺不張較少見[8]。CT值是實(shí)體瘤的密度評(píng)價(jià)指標(biāo)，主要由組織成分決定，由于腫瘤具有豐富的新生血管，缺乏平滑肌細(xì)胞與神經(jīng)支配，僅由不完整基底膜內(nèi)皮細(xì)胞組成，因此利用造影劑進(jìn)入新生血管及裂隙后使病灶強(qiáng)化[9]。

近年來分子生物學(xué)的飛速發(fā)展使血清學(xué)指標(biāo)成為肺腺癌診斷的理想方法，需求更為敏感、可靠的分子生物學(xué)指標(biāo)為臨床提供診療依據(jù)一直是研究的熱點(diǎn)。微小RNA 屬于小的、非編碼RNA，可以結(jié)合靶向mRNA3'非翻譯區(qū)域誘導(dǎo)翻譯機(jī)制，靶向調(diào)控mRNA 影響蛋白的表達(dá)過程，導(dǎo)致相應(yīng)生物學(xué)變化[10]。目前已經(jīng)證實(shí)miR-22-3p 能夠下調(diào)靶基因抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲，在食管癌患者中起到抑癌因子的作用，表達(dá)升高對(duì)延長(zhǎng)患者生存時(shí)間具有重要意義[11]。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)miR-22-3p 對(duì)細(xì)胞的凋亡不會(huì)產(chǎn)生明顯的影響，其在肺腺癌中抑制微小RNA 可以促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞前移和轉(zhuǎn)移，影響肺腺癌發(fā)展。還有學(xué)者利用雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在視網(wǎng)膜母細(xì)胞癌中miR-22-3p 與ENO1 烯醇化酶之間具有結(jié)合位點(diǎn)，其對(duì)ENO1 表達(dá)有直接的負(fù)調(diào)控作用，可以影響視網(wǎng)膜母細(xì)胞癌細(xì)胞增殖過程[12]。

本研究分析miR-22-3p 同肺腺癌CT征象之間的關(guān)系，分葉征是肺腺癌的主要征象，主要是腫瘤生長(zhǎng)不均或多核發(fā)病及相互融合或腫瘤組織受周圍肺組織、血管、支氣管阻擋造成，但是同miR-22-3p表達(dá)之間沒有關(guān)系，這還需要進(jìn)一步分析?？张菡魍瑯邮侵匾飨?，主要是腫瘤結(jié)節(jié)內(nèi)在CT 影像出現(xiàn)小灶性透光區(qū)域，腫瘤直徑越小，空泡征發(fā)生率越高，但是與miR-22-3p表達(dá)之間沒有關(guān)系，提示空泡征與腫瘤惡性生物學(xué)行為之間意義不大[13]。胸膜凹陷征則是腫瘤同胸膜之間線形或三角形影像變化，主要是腫瘤內(nèi)纖維化導(dǎo)致，新生腫瘤血管結(jié)構(gòu)不完整，血管內(nèi)皮間隙較大，血液中纖維蛋白更容易滲透進(jìn)入組織間隙，惡性腫瘤細(xì)胞增殖加速會(huì)造成組織內(nèi)缺氧，形成病變纖維化收縮[14]。miR-22-3p表達(dá)同胸膜凹陷征關(guān)系密切，提示具有胸膜凹陷征肺腺癌患者惡性程度高，但是也有學(xué)者持反對(duì)意見，還需要深入論證。血管集束征屬于病灶近或遠(yuǎn)肺門側(cè)1～3 條增粗的線條影朝向病變部位集聚，在病灶的邊緣截?cái)嗷虿≡钸吘墔^(qū)出現(xiàn)點(diǎn)網(wǎng)狀表現(xiàn)，其出現(xiàn)提示腫瘤供血血管增多、增粗或腫瘤已侵入相鄰血管[15]。miR-22-3p 同血管集束征存在密切關(guān)系，提示miR-22-3p 對(duì)肺腺癌內(nèi)血管狀況及血流情況的反映，而且同腫瘤體內(nèi)血管特別是小血管數(shù)量和密度關(guān)系密切，這同以往研究結(jié)果相似[15]。本研究通過相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，miR-22-3p 相對(duì)表達(dá)量與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、胸膜凹陷征和血管集束征呈負(fù)相關(guān)，提示了肺腺癌患者CT征象同miR-22-3p表達(dá)量之間相關(guān)聯(lián)，可以通過測(cè)定miR-22-3p 濃度對(duì)患者臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等情況進(jìn)行早期預(yù)判。

本研究發(fā)現(xiàn)，肺腺癌組織miR-22-3p 相對(duì)表達(dá)量明顯低于癌旁組織，說明在肺腺癌患者中存在miR-22-3p 低表達(dá)，這和以往研究結(jié)果相似[16]。通過與肺腺癌患者病理資料關(guān)系進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺腺癌組織miR-22-3p 相對(duì)表達(dá)量明顯低于臨床分期Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺腺癌組織，說明在分期靠后和出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺腺癌患者腫瘤組織中miR-22-3p表達(dá)量降低。與CT 結(jié)果對(duì)比發(fā)現(xiàn)，有胸膜凹陷征、血管集束征肺腺癌組織miR-22-3p 相對(duì)表達(dá)量為0.487± 0.109 和0.481±0.106，明顯低于無胸膜凹陷征、無血管集束征肺腺癌組織，說明存在胸膜凹陷征、血管集束征肺腺癌患者腫瘤組織中miR-22-3p表達(dá)量更低。本研究miR-22-3p 在肺腺癌組織中呈現(xiàn)低表達(dá)，但是本研究進(jìn)一步證實(shí)了不同CT征象肺腺癌患者體內(nèi)miR-22-3p表達(dá)情況存在差異，有助于臨床對(duì)患者病情發(fā)展進(jìn)行分析，這在以往的研究中較為少見。近年來隨著腫瘤微小RNA研究領(lǐng)域的發(fā)展，通過分析微小RNA 作用關(guān)系為進(jìn)一步闡明腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制提供了新的切入點(diǎn)，有助于為腫瘤的治療提供新的靶點(diǎn)。但由于入組患者數(shù)量有限，需要進(jìn)一步擴(kuò)充樣本量并在微小RNA 潛在作用機(jī)制上深入分析。

綜上所述，肺腺癌中miR-22-3p表達(dá)下調(diào)，與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、胸膜凹陷征和血管集束征有關(guān)。