李 萍，楊豐梅，劉 慧，宮春飛

支原體肺炎（mycoplasma pneumonia，MP）約占所有兒童肺炎的20%～30%。大葉性肺炎又稱為肺炎球菌肺炎，即肺炎雙球菌等細(xì)菌感染所致的呈大葉性分布的急性肺部炎癥。近年來諸多調(diào)查報(bào)道，大葉性肺炎合并支原體感染（mycoplasma infection）在兒童中的發(fā)病率呈攀升趨勢(shì)?，F(xiàn)階段，血清學(xué)方法是診斷大葉性肺炎合并支原體感染的主要方法，但其檢測(cè)結(jié)果往往受抗體時(shí)相等多因素影響，致使診斷效果差強(qiáng)人意。支氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）是下呼吸道病原感染檢測(cè)的可靠標(biāo)本，為了進(jìn)一步完善大葉性肺炎并MP感染患兒的診療效果，筆者回顧性分析2017 年1月—2019 年12 月筆者醫(yī)院80例患兒的臨床資料，對(duì)其BALF 熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）檢測(cè)肺炎支原體DNA 的結(jié)果與血清酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)MP 特異性IgM 抗體（mycoplasma pneumonia mmunoglobulinM，MP-IgM） 的結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，以期完善大葉性肺炎合并MP 患兒的診療方案，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料回顧性分析2017 年1 月—2019 年12 月于筆者醫(yī)院進(jìn)行支氣管肺泡灌洗的80例大葉肺炎合并MP 感染患兒的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》（第9 版）中的診斷標(biāo)準(zhǔn)；所有患兒家屬均對(duì)研究內(nèi)容知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：急慢性感染；其他肺部疾病；血液系統(tǒng)與免疫系統(tǒng)疾病患者。80例患兒中男42例，女38例；年齡1～14 歲，平均（8.5±3.0）歲；其中≤8 歲37例，＞8 歲43例；病程≤7 d 者51例，＞7 d 者29例；肺部右肺上葉20例，右肺中、下葉病變34例，左肺下葉6例，左肺上葉20例。

1.2 方法入組患兒在入院后1～6 d 通過ELISA法實(shí)施MP-IgM 檢測(cè)，并行纖維支氣管鏡檢查，以BALF 熒光定量PCR 檢測(cè)MP-DNA。

1.2.1 ELISA 法檢測(cè)MP-IgM 采集患兒的靜脈血，通過ELISA 法（試劑盒購自北京海瑞祥生物科技有限公司）實(shí)施MP-IgM 檢測(cè)，具體操作嚴(yán)格按照說明書執(zhí)行。同時(shí)，根據(jù)試劑說明書中的標(biāo)準(zhǔn)，判斷入組患兒MP-IgM 陽性情況，其中抗體水平950 kU/L 以上為陽性，770～950kU/L為弱陽性，770kU/L以下為陰性。

1.2.2 BALF 熒光定量PCR 檢測(cè)MP-DNA 纖維支氣管鏡檢查前禁食水6 h，術(shù)中實(shí)施靜脈與局部麻醉方法，以2%利多卡因局麻咽喉，纖維支氣管鏡經(jīng)咽喉、鼻、聲門進(jìn)入氣道，評(píng)估支氣管形態(tài)，將37 ℃左右的生理鹽水灌洗到嚴(yán)重受累的肺段、肺舌葉或肺中葉，1 ml/kg，至少3 次。采用負(fù)壓吸引，留取BALF，將纖維支氣管鏡緩慢拔出。操作期間給予吸氧，常規(guī)檢測(cè)患兒的血壓、心率、血氧飽和度等指標(biāo)，并密切觀察口唇、呼吸、面色等體征。回收的BALF 在30 min 內(nèi)進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)與MP-DNA 檢測(cè)。檢測(cè)方法：BALF 放置在離心管內(nèi)，以12000 r/min的速度離心5 min，半徑為3.5 cm，管底沉淀提取DNA 標(biāo)本，具體操作嚴(yán)格按照說明書執(zhí)行。同時(shí)，根據(jù)試劑說明書中的標(biāo)準(zhǔn)，判斷本組MP-DNA 陽性情況，即1×103copy/ml 為陽性。

1.3 觀察指標(biāo)（1） 觀察并對(duì)比入組患兒血清ELISA 與BALF 熒光定量PCR 檢測(cè)的陽性率。（2）觀察并對(duì)比不同病程患兒血清ELISA 與BALF 熒光定量PCR 檢測(cè)的陽性率。（3）觀察并對(duì)比不同年齡患兒血清ELISA 與BALF 熒光定量PCR 檢測(cè)的陽性率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患兒血清ELISA 與BALF 熒光定量PCR 檢測(cè)的陽性率比較入組患兒經(jīng)BALF 熒光定量PCR檢測(cè)的陽性率91.25%（73/80），高于血清ELISA檢測(cè)的48.75%（39/80），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=34.405，P=0.000）。見表1。

表1 患兒血清ELISA 與BALF熒光定量PCR 檢測(cè)的陽性率比較（例）

2.2 不同病程患兒MP 的檢測(cè)結(jié)果對(duì)比血清ELISA 檢測(cè)病程≤7 d 者的陽性率低于＞7 d 者的陽性率（P＜0.01），而BALF 熒光定量PCR 檢測(cè)病程≤7 d 者與＞7 d 者的陽性率對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 不同病程患兒MP 的檢測(cè)結(jié)果比較［例（%）］

2.3 不同年齡患兒MP 的檢測(cè)結(jié)果對(duì)比血清ELISA 檢測(cè)年齡≤8 歲者的陽性率低于＞8 歲者的陽性率 （P＜0.01），而BALF 熒光定量PCR 檢測(cè)年齡≤8 歲者與＞8 歲者的陽性率對(duì)比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。

表3 不同年齡患兒MP 的檢測(cè)結(jié)果比較［例（%）］

3 討論

兒童大葉性肺炎是由肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等感染所引起的肺部急性炎癥性病變，通常累及肺葉的大部分或全部，臨床表現(xiàn)為高熱、咳嗽、寒戰(zhàn)、胸痛、咳鐵銹色痰等癥狀，可伴有呼吸窘迫、呼吸困難與發(fā)紺，具有起病急、進(jìn)展快、療程長、恢復(fù)慢等特點(diǎn)，給兒童的健康帶來了嚴(yán)重的影響。近年來，隨著人們生活方式與生存環(huán)境的變化，大葉性肺炎合并支原體感染也呈攀升趨勢(shì)，二者合并后使治療更為棘手，而明確病原是診治的關(guān)鍵。目前，大葉性肺炎主要采用影像學(xué)與實(shí)驗(yàn)室方法檢測(cè)，一旦合并MP 則使檢測(cè)更為繁雜，其中MP 分離培養(yǎng)與鑒別對(duì)其具有顯著的鑒別診斷效果。然而，MP 分離培養(yǎng)與鑒別耗時(shí)較長，通常為2～3 周，加之要求高、敏感性差，所以在臨床應(yīng)用中受到了一定的限制。此外，雖然MP 感染可以通過雙份血清MP 抗體滴度升高4 倍及以上進(jìn)行確診，但抗體出現(xiàn)在2～4周，加之受患兒免疫、年齡、病程等因素的影響，所以漏診率較高，容易延誤患兒的治療時(shí)機(jī)。因此，探尋一種快速且高效的方法及時(shí)明確兒童大葉性肺炎合并支原體感染十分必要。

熒光定量PCR 是一種新型的基因檢測(cè)技術(shù)，其通過檢測(cè)患兒肺炎支原體核酸水平明確疾病類型。部分研究認(rèn)為，相較于傳統(tǒng)PCR 技術(shù)，熒光定量PCR 具有高特異性、高敏感性、無交叉反應(yīng)等優(yōu)勢(shì)，有效避免了假陽性對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾。同時(shí)，熒光定量PCR 所檢測(cè)的BALF 標(biāo)本直接取自支氣管肺泡，所以準(zhǔn)確性更高。該文研究結(jié)果顯示，該組患兒經(jīng)BALF 熒光定量PCR 檢測(cè)的陽性率91.25%高于血清ELISA 檢測(cè)的48.75%（P＜0.01）。雖然血液標(biāo)本更易獲得，但檢測(cè)效果卻不夠理想；大葉性肺炎合并MP 患兒往往因肺不張需要行BALF，十分利于獲到取BALF 標(biāo)本，且檢測(cè)效果更為直接與準(zhǔn)確。同時(shí)，血清ELISA 檢測(cè)病程≤7 d、年齡≤8 歲的陽性率低于＞7 d、＞8 歲的陽性率（P＜0.01），而BALF 熒光定量PCR 檢測(cè)病程（≤7 d 與＞7 d）、年齡（≤8 歲與＞8 歲） 的陽性率對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05）?？梢姡c血清ELISA 檢測(cè)相比，BALF 熒光定量PCR 所檢測(cè)到的陽性結(jié)果不受病程與年齡的影響。需要注意的是，一旦大葉性肺炎合并MP 患兒確診后，應(yīng)及時(shí)采取合理的抗生素治療，當(dāng)單純大環(huán)內(nèi)酯類抗生素效果不佳時(shí)，應(yīng)積極探尋病因，以及混合感染的病原體，之后通過聯(lián)合、合理、對(duì)癥的頭孢菌素與青霉素類等抗生素，確?；純旱恼w治療效果。

總之，相較于血清ELISA，BALF 熒光定量PCR檢測(cè)兒童大葉性肺炎合并MP 的效果更為理想，適于臨床推廣。