靳蓉 陳敏 程星 孫永烽 王琦 吳煒

(貴陽市婦幼保健院貴陽市兒童醫(yī)院呼吸科，貴州 貴陽 550002)

重癥肺炎是嚴重威脅我國兒童生命健康的呼吸系統(tǒng)疾病，引起重癥肺炎的病原菌多種多樣：細菌[1]、病毒[2]、支原體、真菌[3]、寄生蟲及非典型病原菌均可導致，早期診斷具有一定困難；尤其是病原學的診斷，一直以來都是臨床醫(yī)生面臨的棘手問題[4]?？焖佻F(xiàn)場評價技術(ROSE)因其借助于支氣管鏡下取材，經(jīng)特定染色后，由受訓的臨床醫(yī)師通過顯微鏡觀察病灶部位細胞的分類、計數(shù)、背景及微生物學形態(tài)等特征，對疾病作出評價和診斷的實時快速細胞學判讀技術[5]。本研究通過總結兒童重癥肺炎經(jīng)支氣管鏡下行快速現(xiàn)場評價后不同病原菌感染的特點。

1 資料與方法

1.1一般資料 入選對象均符合《2019年版兒童社區(qū)獲得性肺炎診療規(guī)范》中重癥肺炎診斷標準。選取我院2019年6月至2019年12月符合上述診斷標準的住院患兒34例，入院后第1～7天在家長知情同意后經(jīng)支氣管鏡下行快速現(xiàn)場評價，其中男患兒22例，女患兒12例；0～3歲19例，4～6歲12例，7～15歲3例，平均年齡(4.7±1.3)歲。所有患兒一般資料比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)

1.2設備 根據(jù)患兒年齡及體重選擇不同型號的支氣管鏡：年齡≤3歲，體重≤15 Kg，選擇Olympus BF-P260F型號(外徑為2.8 mm，內(nèi)徑1.2 mm)的支氣管鏡，年齡>3歲，體重>15 Kg，選擇Olympus BF-P40型號(外徑為4.0 mm，內(nèi)徑2.0 mm)的支氣管鏡；迪夫快速細胞染色液AB液(珠海貝索生物技術有限公司)；顯微鏡(Olympus CX-33)及佳能700D數(shù)碼成像系統(tǒng);“馮氏”防污超細毛刷。

1.3方法 所有研究對象均于晚12時后禁食禁飲，次日空腹行支氣管鏡檢查?；純喝⊙雠P位，鼻導管吸氧，術中嚴密監(jiān)測生命體征，應用利多卡因氣管內(nèi)黏膜表面局部麻醉的方法“邊麻邊進”行支氣管鏡檢查術，按照《兒科呼吸內(nèi)鏡診療技術管理規(guī)范2013》，由我院呼吸內(nèi)鏡中心具備三級及以上支氣管鏡下操作資質的主治及以上職稱醫(yī)師按照規(guī)定流程行支氣管鏡檢查，檢查操作至影像學提示的病灶部位后快速推送“馮氏”防污超細毛刷，行病灶部位刷檢。

1.4標本處理與結果判讀 制片(細胞刷涂抹制片法)：經(jīng)支氣管鏡活檢孔道插入“馮氏”防污超細毛刷(F-PSB)，待毛刷前端送至病灶處后，迅速在病灶部位刷檢，繼之取出毛刷，將刷頭推出，在醫(yī)用玻片中下1/3處涂抹約1 cm×1 cm厚薄適度的圓形標本，每次刷檢3張標本送檢。染色：分別在玻璃染缸中制備迪夫AB溶液、磷酸鹽緩沖液和清水。把玻片浸泡于迪夫A溶液(20 s～30 s)；再在磷酸鹽緩沖液中洗掉迪夫A溶液；而后再把玻片浸泡于迪夫B溶液(30 s～40 s)；最后用清水洗掉染液，用吸水紙將玻片上殘留的液體吸干。判讀：由受訓的臨床醫(yī)師用顯微鏡觀察細胞成分、背景、聚類及形態(tài)。

2 結 果

34例重癥肺炎患兒經(jīng)支氣管鏡下行快速現(xiàn)場評價后判斷為細菌感染的患兒17例(50%)；判斷為病毒感染的患兒7例(20.58%)；判斷為支原體感染的患兒4例(11.76%)；判斷為混合感染的患兒3例(8.82%)；判斷為非感染性疾病的患兒2例(5.88%)；判斷為曲霉菌感染的患兒1例(2.94%)。

3 討 論

引起重癥肺炎的病原菌種類多樣，加之抗生素、激素及免疫抑制劑的廣泛使用，使病原體呈現(xiàn)了復雜化、多樣化和耐藥化的趨勢，導致病原菌難以確定；其次，傳統(tǒng)的病原微生物學檢測手段在敏感度、特異度方面較低，且耗時長。快速現(xiàn)場評價技術(ROSE)是一項實時伴隨于支氣管鏡檢查中的病理學診斷技術，可分為快速現(xiàn)場細胞學評價(C-ROSE)和快速現(xiàn)場微生物學評價(M-ROSE)，其中M-ROSE在兒科領域更具實用價值[6]。現(xiàn)快速現(xiàn)場評價被越來越多的應用于呼吸道感染的病原學分析中，由于具有及時性，床旁即可得到意向性結果；同時操作簡便，通過組織染色后細胞胞核與胞質所顯現(xiàn)的不同顏色鑒別固有細胞與成分細胞，反應機體在炎癥下的狀態(tài)；也可以通過正常細胞和病原體之間形態(tài)學特點，甄別病原菌的種類；為臨床診斷提供有力的病原學依據(jù)、指導治療，避免誤診和漏診[7]。

本研究通過分析兒童重癥肺炎經(jīng)支氣管鏡下行快速現(xiàn)場評價后不同病原菌感染的特點，總結出：細菌感染的重癥肺炎患兒，快速現(xiàn)場評價下的特征性表現(xiàn)為：以變性、壞死、增生為主的細胞學背景，同時伴隨大量中性粒細胞、巨噬細胞及淋巴細胞浸潤為特點；病毒感染的重癥肺炎患兒，快速現(xiàn)場評價下的特征性表現(xiàn)為：以細胞增生為主的細胞學背景，同時伴隨多核巨噬細胞浸潤[8-9]；支原體感染的重癥肺炎患兒，快速現(xiàn)場評價下的特征性表現(xiàn)為：以單核細胞為主的細胞學背景，伴隨多種炎癥細胞的浸潤，尤其是多核巨噬細胞及泡沫巨噬細胞浸潤；真菌感染的重癥肺炎患兒，快速現(xiàn)場評價下的特征性表現(xiàn)為：以壞死、變形為主的細胞學背景，曲霉菌感染可見典型的有隔膜、具折光性的菌絲[10]；非感染性疾病如哮喘表現(xiàn)為以嗜酸性粒細胞為主的細胞學背景。由于ROSE涉及較多兒童交叉學科，同時分析ROSE結果時還要有嚴密的臨床?？七壿嬚夏芰?；需結合病史、查體、影像學、實驗室檢查等結果綜合分析，做出正確判斷[11]。

綜上，總結重癥肺炎經(jīng)支氣管鏡行快速現(xiàn)場評價后不同病原菌感染的特征，不僅為臨床重癥肺炎的微生物學診斷提供了直觀的依據(jù)，指導治療，也為今后進一步完善兒童快速現(xiàn)場評價標準提供一定的循證學依據(jù)。