劉亞娟

（濟源市人民醫(yī)院，河南 濟源459000）

胃癌的病情進展,能夠?qū)е禄颊卟∷缆始吧骖A(yù)后指標(biāo)的惡化[1]。長期的臨床觀察研究發(fā)現(xiàn),胃癌患者的5年生存率不足45%,不同措施治療后胃癌患者的中位生存時間不足28個月[2]。

基礎(chǔ)生物學(xué)方面的理論認(rèn)為,分子機制的改變在促進胃癌的病情進展過程中發(fā)揮了重要的作用。DNA損傷、DNA錯配修復(fù)能力的改變或者DNA轉(zhuǎn)錄復(fù)制活性的異常,均能夠促進消化系統(tǒng)惡性腫瘤的發(fā)生。生長抑制DNA損傷基因（Cadd4 5a）能夠通過促進DNA的損傷，加劇DNA基因突變的風(fēng)險，提高癌基因突變及癌基因轉(zhuǎn)錄的風(fēng)險，進而促進惡性腫瘤早期的發(fā)生[3]；DNA結(jié)合抑制因子2（Id2）能夠通過提高DNA結(jié)合蛋白的輔助速度，促進染色體組蛋白的擴增及分裂，進而促進腫瘤細(xì)胞的持續(xù)性自我增殖過程[4]。部分研究者探討了Gadd45a、Id2的表達及其與婦科惡性腫瘤或者鼻咽惡性腫瘤的關(guān)系，認(rèn)為Gadd45a、Id2d的表達上升可以顯著促進相關(guān)惡性腫瘤的病情進展[5]，但在胃癌患者中的分析研究不足。為了揭示Gadd4 5a、Id2的表達及其與胃癌的關(guān)系,從而為臨床上胃癌的診療提供一定的參考，本次研究選取2015年6月至2018年6月我院收集的80例胃癌組織標(biāo)本及其對應(yīng)的癌旁組標(biāo)本80例，探討了Gadd45a、Id2的表達及其與胃癌的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年6月至2018年6月我院收集的80例胃癌組織標(biāo)本及其對應(yīng)的癌旁組標(biāo)本80例。

患者年齡44～75歲,平均56.2±9.6歲,男47例、女33例，TNM分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期10例、Ⅱ期28例、Ⅲ期35例、Ⅳ期7例；腫瘤分化程度：高分化20例、中分化20例、低分化40例；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例；病灶最大徑≥3cm41例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴患者年齡18～75歲；⑵術(shù)前超聲胃鏡及病理學(xué)活組織檢測初步診斷；⑶病理標(biāo)本均來源于手術(shù)后組織、經(jīng)病理學(xué)檢查確診；⑷獲取患者病理學(xué)標(biāo)本前,患者未接受放化療、免疫治療；⑸本研究獲得醫(yī)學(xué)倫理委員會的批準(zhǔn),納入對象的各種資料完整。

排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴轉(zhuǎn)移性胃癌；⑵伴有其他部位惡性腫瘤；⑶患者的病歷資料、病理學(xué)檢查結(jié)果缺失。

1.2 采用免疫酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)進行Gadd45a、Id2的檢測 石蠟包埋,連續(xù)性切片厚度3um，60℃烤片60min,常規(guī)脫水后,采用EDTA進行抗原修復(fù),加入10ul蒸餾水，加入10%過氧化氫5ul，室溫下孵育30min,磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌3次*3min，加入Gadd45a、Id2的單克隆抗體（1：1000購自羅氏檢測公司），37℃孵育60min，PBS洗滌3次*3min，加入HRP標(biāo)記的Gadd45a、Id2二抗（1：2000購自羅氏公司）,37℃孵育20min，PBS洗滌3次*3min，加入DAB后，PBS沖洗和復(fù)染，脫水后在顯微鏡下進行觀察。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn) 免疫組化結(jié)果判定：Gadd45a蛋白的陽性著色表達于細(xì)胞核及細(xì)胞漿、Id2蛋白主要表達與細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)，呈黃色、棕黃色、褐色表達，⑴根據(jù)著色強度：0分為無色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；⑵根據(jù)陽性細(xì)胞比例：陽性細(xì)胞數(shù)目所占比例≤10%為1分、陽性細(xì)胞所占比例11%～50%為2分、陽性細(xì)胞數(shù)51%～75%為3分、陽性細(xì)胞數(shù)所占比例＞75%為4分，兩種積分相乘總分＜3分為陰性、≧3分為陽性。

2 結(jié)果

2.1 兩組標(biāo)本的Gadd45a、Id2蛋白表達的陽性表達率比較 胃癌組織中的Gadd45a蛋白、Id2蛋白表達陽性表達率分別為63.75%、67.50%均顯著的高于癌旁組織的13.75%、16.25%,組間比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；見表1。

2.2 胃癌組織中的Gadd45a蛋白、Id2蛋白表達相關(guān)性 胃癌組織中的Gadd45a蛋白、Id2蛋白表達呈顯著的相關(guān)性（Spearman系相關(guān)系數(shù)=0.754，P＜0.05）；見表2。

表2 相關(guān)性分析

2.3 胃癌組織中的Gadd45a蛋白、Id2蛋白表達與病理學(xué)特征的關(guān)系 在不同TNM分期、不同分化程度、是否具有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中的Gadd4 5a蛋白表達差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；見表3。在不同TNM分期、不同分化程度、不同病灶直徑大小、是否具有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中的Id2蛋白表達差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；見表4。

3 討論

在具有相關(guān)家族性腫瘤病史或者長期精神應(yīng)激、不良飲食習(xí)慣的人群中，胃癌的發(fā)生風(fēng)險均明顯上升。長期不同的病理性因素，能夠通過調(diào)控胃黏膜上皮細(xì)胞的核DNA轉(zhuǎn)錄，提高癌細(xì)胞的早期增殖及分化障礙，進而促進胃癌整體發(fā)病率的上升[6]?，F(xiàn)階段臨床上缺乏對于胃癌患者篩查的血清學(xué)指標(biāo)，雖然癌胚抗原（CEA）或者糖鏈125抗原（CA125）等能夠在消化道惡性腫瘤的發(fā)生過程中發(fā)揮一定的評估作用，但其評估的靈敏度較低，特異度不足45%[7,8]。而本次研究對于胃癌患者病灶組織中Gadd45a、Id2的表達分析研究，能夠在揭示胃癌患者臨床病理特征進展機理的同時,為臨床上胃癌的血清學(xué)診斷或者病情評估提供預(yù)后參考指標(biāo)。

表4 胃癌組織中的Id2蛋白表達與病理學(xué)特征的關(guān)系

基因水平或者分子水平的改變,是促進惡性腫瘤發(fā)生的重要環(huán)節(jié)，其能夠通過影響到DNA的轉(zhuǎn)錄、翻譯及下游信號通路調(diào)控，進而促進惡性腫瘤的發(fā)生。Gadd45a是DNA損傷相關(guān)因子，其能夠通過泛素化的修飾作用，促進DNA堿基及嘧啶結(jié)構(gòu)的破壞，提高基因點突變及位移突變的發(fā)生風(fēng)險?；A(chǔ)方面的研究認(rèn)為，Gadd45a的表達上升,還能夠通過對于基因的異常甲基化的修飾,進而導(dǎo)致基因表達產(chǎn)物特性的改變,從而影響到胃癌細(xì)胞的生物學(xué)特征；Id2是染色體組蛋白的結(jié)合抑制因子，其對于組蛋白的分裂作用,能夠提高癌細(xì)胞核結(jié)構(gòu)的復(fù)制速度,促進癌細(xì)胞持續(xù)性分裂和自我增殖過程[9]。部分研究者探討了Gadd45a的表達與胃癌的關(guān)系,認(rèn)為在中晚期胃癌患者中,Gadd45a的表達濃度明顯上升[10]，但缺乏對于Id2的表達與胃癌的關(guān)系研究。

通過免疫組化技術(shù)探討了Gadd45a、Id2蛋白的表達與胃癌的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)在胃癌病灶組織中,Gad d45a、Id2蛋白的表達陽性率均明顯上升,高于癌旁組織，統(tǒng)計學(xué)差異較為明顯，提示了Gadd45a、Id2蛋白的高表達均能夠影響到胃癌的發(fā)生發(fā)展過程。分析其基礎(chǔ)方面的原因,考慮由于Gadd45a、Id2的下列幾個方面的病理性作用有關(guān)[11-13]：⑴Gadd4 5a的表達上升,不僅能夠?qū)е掳┗蛲蛔冿L(fēng)險的上升，同時還能夠增加基因調(diào)控穩(wěn)定性，導(dǎo)致癌細(xì)胞凋亡-增殖平衡的打破，影響到癌細(xì)胞周期的調(diào)控平衡；⑵Id2的表達，不僅能夠影響到癌細(xì)胞DNA的組蛋白的復(fù)制,同時還能夠提高癌細(xì)胞內(nèi)染色體的分裂速度，提高癌基因的轉(zhuǎn)錄活性，進而促進胃癌的發(fā)生。李亞卓等[14]研究者也發(fā)現(xiàn)，在胃癌病灶組織中，Id2蛋白的表達陽性率可平均上升40%以上,同時在具有明顯的惡病質(zhì)或者腫瘤晚期表現(xiàn)的患者中,Id2蛋白的表達水平可進一步上升。在探討Gadd45a、Id2的內(nèi)在關(guān)系過程中,發(fā)現(xiàn)Gadd45a、Id2的表達具有一定的相關(guān)關(guān)系，推測二者在促進胃癌的病情進展過程中可能發(fā)揮了一定的協(xié)同刺激作用,但具體的機制仍然需要后續(xù)研究的進一步探討。Gadd45a在臨床分期較高、發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或者癌細(xì)胞分化程度較低的患者中表達陽性率較高，明顯高于對應(yīng)的臨床病理分期較早組，統(tǒng)計學(xué)差異顯著,提示了Gadd45a的表達能夠顯著影響到胃癌的臨床病理特征的進展,這主要考慮由于Gadd45a的表達,能夠提高癌細(xì)胞的浸潤深度,提高癌細(xì)胞對于淋巴結(jié)組織的粘附能力,進而促進胃癌臨床病理特征的進展；在不同TNM分期較晚、分化程度差、病灶直徑較大、具有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中,Id2的表達陽性率較高,提示Id2的表達與胃癌的臨床病理特征同樣相關(guān),分析其原因，主要由于Id2在影響胃癌細(xì)胞生物學(xué)特征的同時,還能夠提高癌細(xì)胞的持續(xù)性擴增能力,從而導(dǎo)致腫瘤病灶直徑的增大。

在胃癌病灶組織中，Gadd45a、Id2蛋白的表達陽性率均明顯上升,二者的表達具有一定內(nèi)在關(guān)系。同時Gadd45a、Id2的表達還與胃癌患者臨床病理特征密切相關(guān)。