薛雷

（周口市中心醫(yī)院輸血科，河南 周口466000）

ABO血型是發(fā)現(xiàn)最早,對臨床輸血最有意義的血型系統(tǒng)。它的特征之一就是紅細胞上存在血型抗原和血清中存在血型抗體。正常情況下要求正反定型一致才能確定ABO血型。正確的ABO血型鑒定是確保臨床輸血安全的前提條件，ABO血型不合的輸血會發(fā)生嚴重的溶血性輸血反應,危及患者的生命。在ABO血型鑒定過程中，常因年齡、亞型、某些惡性疾病、不規(guī)則抗體陽性、高效價冷凝集素、異常血漿蛋白等因素導致患者血型鑒定困難，為臨床安全輸血埋下隱患[1,2]。為了分析臨床常見ABO血型正反定型不一致的原因并找到各自適合的輸血對策,我們對科室近一年來送檢的住院患者ABO血型標本進行了分類研究,報告如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源 2017年6月-2018年10月,我科共收到住院患者血型鑒定20256例。患者年齡6月-91歲,來源于全院各個科室。同一患者多次入院重復送檢的標本只計入一次。所有標本均為EDTA抗凝全血3ml。

1.2 儀器與試劑 抗A抗B、抗AB、抗H、抗A1血型定型試劑和人ABO血型反定型用紅細胞試劑盒、不規(guī)則抗體篩查用紅細胞和普細胞均來自上海血液生物醫(yī)藥有限公司。ABO、RhD血型檢測卡來自于美國伯樂。伯樂IH-1000全自動血型分析儀、BASO2005-1離心機等。

1.3 血型鑒定方法 伯樂IH-1000全自動血型分析儀采用微柱凝膠法對所有送檢標本進行血型鑒定。ABO血型鑒定不一致者，重新抽取標本進行鹽水介質試管法復檢,并參考疑難血型三步分析法[3]進行處理。判斷ABO血型正反定型不一致標準：⑴正反定型結果不一致；⑵正反定型結果一致，與符合國家質量要求的試劑反應后，正定型為++或更弱的凝集（含出現(xiàn)混合外觀樣凝集），或者反定型為+或更弱的凝集[4]。

ABO血型正反定型試管法、ABO血型亞型確認試驗、不規(guī)則抗體篩查及鑒定試驗、吸收放散試驗均按照輸血技術操作規(guī)程[5]和相應試劑說明書進行。如果仍有無法解釋的的正反型不一致標本送周口市中心血站進一步檢驗。

2 結果

2.1 ABO血型正反定型不一致分類 去除標本乳糜，血液凝固等人為外在因素，采用鹽水介質試管法復檢患者ABO血型正反定型仍不一致標本78例。其中，正定型減弱或缺失4例，反定型減弱或缺失52例，反定型額外反應9例，正定型反定型同時額外反應13例。見表1。

2.2 ABO血型正反定型不一致原因分類及對策78例ABO正反定型不一致標本中，生理因素引起55例，疾病因素引起10例，不規(guī)則抗體引起7例，非特異性抗體引起6例。表2。

表1 ABO血型正反定型不一致分類

表2 ABO血型正反定型不一致原因分類及對策

3 討論

全自動血型分析儀采用卡式法鑒定ABO血型，具有在靈敏度、自動化、工作效率等方面的優(yōu)勢,已經(jīng)成為各大醫(yī)院輸血科血型鑒定的常規(guī)方法。但該方法也有一定的局限性。由于微柱凝膠卡的微孔分子篩作用,標本中的纖維蛋白、M蛋白、高效價冷凝集素、自身抗體等會引起抗原抗體反應的假陽性。ABO亞型，血型抗原減弱和血型抗體效價較低的標本，抗原抗體來不及“搭橋”就直接被離心到微柱底部，造成假陰性[6，7]。鹽水介質試管法具有可增加離心時間，加大抗原抗體反應量，可選擇抗原抗體反應溫度等優(yōu)點,是一種經(jīng)典而不可替代的血型鑒定方法[8]。我們對ABO血型正反定型初篩不一致的標本采用鹽水介質試管法復檢。報告中由生理因素引起ABO正反定型不一致者55例，占70.5%。其中52例患者為1歲以下的嬰兒或70歲以上的老人，這與張妍等報道[9]相符。3例患者為亞型。ABO血型抗原在5-6周的胚胎紅細胞表面便可測得，至2-4歲可達成人水平。出生后3-6月開始合成抗A或（和）抗B，5-6歲達成人水平，隨著年齡的增長會逐漸減弱[10]。因此嬰兒和老人紅細胞抗原或抗體的減弱或缺失是正常的生理現(xiàn)象。我們對6個月以下嬰兒不做反定型,正定型用微柱凝膠卡和鹽水介質試管法相互驗證。70歲以上老年人反定型表現(xiàn)較弱時采用鹽水介質試管法加大血清量、在4℃條件下反應和延長離心時間的方法。A和B亞型紅細胞與A和B紅細胞的主要區(qū)別表現(xiàn)在紅細胞膜上抗原決定簇的數(shù)量上,亞型的紅細胞膜上抗原決定簇數(shù)量比較少,血型鑒定時有時肉眼幾乎看不到凝集[11]。報告中共發(fā)現(xiàn)亞型3例。1例是正定型為O型，反定型為B型，進一步血清學試驗確定為B亞型。2例是正定型為A型,反定型為O型，進一步血清學試驗確定為A亞型。在亞型鑒定試驗中，可增加抗AB、抗H、抗A1抗體及A1、A2細胞和吸收放散試驗。仍不能鑒定者，可送有條件的上級實驗室進行鑒定。

報告中由疾病因素引起ABO正反定型不一致者10例，占12.8%。血漿蛋白異常7例，抗原減弱或缺失3例。多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、霍奇金淋巴瘤等疾病患者血漿中會出現(xiàn)異常增生的單克隆免疫球蛋白或輕鏈、高濃度纖維蛋白原等使紅細胞呈緡錢狀凝集[12]。此類標本我們用生理鹽水洗滌患者紅細胞3次，用鹽水介質試管法做正定型。用O細胞吸收后并加入等量生理鹽水后的血漿做反定型。急性白血病、MDS及某些惡性腫瘤可影響紅細胞膜上血型抗原的合成,導致紅細胞膜上抗原量的不足，給血型鑒定帶來一定的困難[13]。報告中2例為急性白血病，1例為MDS,初檢ABO血型正反定型不一致。此類標本我們增加抗AB、吸收放散試驗和血型物質檢測并結合臨床資料,進行血型鑒定。

高效價的特異性抗體可在鹽水介質中凝集含相應抗原的紅細胞而引起ABO血型正反定型不一致[15]。報告中由不規(guī)則抗體陽性引起ABO血型正反定型不一致者7例,占9.0%。經(jīng)過篩查和譜細胞鑒定抗體的特異性，發(fā)現(xiàn)抗D 2例，抗E 1例，抗M 3例，抗P11例。在發(fā)現(xiàn)ABO正反定型不一致且患者血清與O型細胞發(fā)生凝集而自身對照試驗陰性時,應該對患者進行不規(guī)則抗體的篩選及特異性鑒定。反定型試劑選用陽性不規(guī)則抗體相應抗原表達為陰性的紅細胞,避免不規(guī)則抗體對ABO反定型的干擾。

非特異性抗體是指血漿中的冷抗體和自身抗體。報告中由非特異性抗體引起ABO血型正反定型不一致6例,占7.7%。其中冷抗體引起2例,自身抗體引起4例。正常人血清中存在少量冷凝集素，一般對ABO血型鑒定沒有影響,但在某些病理情況下患者體內會存在高效價冷凝集素。此類抗體為IgM類，在室溫條件下可與紅細胞發(fā)生非特異性凝集。我們將患者紅細胞用37℃生理鹽水洗滌3次并在室溫（20℃以上）條件下進行正定型，將患者血清用O型紅細胞在4℃下充分吸收，待吸收完全后與反定型細胞在37℃水浴下反應，鑒定反定型。自身免疫性溶血病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿等患者血清中會存在自身抗體并致敏紅細胞，引起正定型和反定型的額外反應。我們將患者紅細胞生理鹽水洗滌后做熱放散試驗，放散后的紅細胞用作正定型；將用生理鹽水洗滌后的患者紅細胞吸收血清，吸收后的血清用作反定型。

綜上所述，ABO血型鑒定是一項看似簡單，卻又影響因素繁多，與臨床聯(lián)系密切的工作。在遇到ABO正反定型不一致時,要求技術人員加強與臨床的溝通，結合病歷資料選取有針對性的試驗進行分析與驗證，鑒定出準確的ABO血型,為臨床安全、有效、及時地輸血提供有力的保證。