摘要：本文通過(guò)設(shè)計(jì)試驗(yàn)，使用高效液色譜分析法對(duì)紅景天屬植物云南紅景天、喜馬紅景天、四裂紅景天、大花紅景天以及互生紅景天的紅景天甙的具體含量進(jìn)行了精確測(cè)定，最后得出測(cè)定結(jié)論。

關(guān)鍵詞：紅景天;紅景天甙;高效液相色譜

紅景天甙是紅景天屬植物的重要組成部分，該有效成分有很大的醫(yī)用價(jià)值。但是有關(guān)測(cè)定紅景屬植物中紅景天甙含量的測(cè)定報(bào)告少之又少，為研究測(cè)定紅景屬植物中的紅景天甙含量，本文設(shè)計(jì)了一種基于HPLC的紅景天甙測(cè)定方法。

1 紅景天概述

紅景天是一種具有明顯藥用價(jià)值的植物，一般生長(zhǎng)于石隙、山坡草地、高山草甸以及向陽(yáng)山坡的沙質(zhì)土壤中。紅景天屬植物的環(huán)境適應(yīng)能力較強(qiáng)，適合種植于冷涼溫潤(rùn)的環(huán)境中，因此為保證紅景天的成活率，種植人員應(yīng)在氣候冷涼、海拔較高、無(wú)霜期短以及夏季晝夜溫差大的山區(qū)環(huán)境中將紅景天屬植物進(jìn)行栽種。紅景天適合在春季以及秋季進(jìn)行播種，春季播種時(shí)間為三月下旬到四月上旬，秋季播種時(shí)間為九月中旬至凍結(jié)之前。由于紅景天藥用價(jià)值極高，因此常被人們大量種植。

2 試驗(yàn)藥品、試劑和儀器

本文設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)藥品有紅景天植物大紅花紅景天干燥根莖，該紅景天經(jīng)TLC檢測(cè)為單一斑點(diǎn)，使用HPLC測(cè)定峰值情況單峰。實(shí)驗(yàn)試劑為甲醇、注射用水。甲醇的作用為收集63.5-64.5攝氏度的餾分，甲醇和注射用水都來(lái)自華西醫(yī)科大學(xué)附屬藥廠。本實(shí)驗(yàn)的儀器為Waters 510 HPLC泵、Baseline 810色譜工作臺(tái)、uBondapak ODS柱、Waters 484可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器、超聲波振蕩器以及10uL Hamilton U6K進(jìn)樣器。其中Waters 510 HPLC泵、Baseline 810色譜工作臺(tái)、uBondapak ODS柱以及Waters 484可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器均來(lái)自美國(guó)Wates公司，超聲波振蕩器來(lái)自上海超聲波制造廠，10uL Hamilton U6K進(jìn)樣器來(lái)自美國(guó)Hamilton廠[1]。

3 試驗(yàn)方法和試驗(yàn)條件

實(shí)驗(yàn)第一步為配制紅景天甙對(duì)照品溶液。首先使用精密儀器稱量紅景天甙對(duì)照品20.0毫克，稱量完畢后將紅景天甙對(duì)照品放于10毫升容量中，使用準(zhǔn)備好的甲醇將對(duì)照品溶解稀釋到刻度，得到濃度為2.0毫克/每毫升的紅景天甙對(duì)照品儲(chǔ)備液，為保證儲(chǔ)備液的質(zhì)量，需要將之后將紅景天甙對(duì)照品儲(chǔ)備放置于冰箱中進(jìn)行保存，這樣只要將紅景天甙對(duì)照品儲(chǔ)備液進(jìn)行稀釋即可開始測(cè)試驗(yàn)。第二步，實(shí)驗(yàn)色譜條件。本試驗(yàn)的色譜條件為Waters uBondapak ODS柱，規(guī)格為3.9mm*300mm，10um。Waters uBondapak ODS柱的溫度環(huán)境為室溫環(huán)境，即需要將環(huán)境溫度控制在10攝氏度到30攝氏度之間。與此同時(shí)，為保證試驗(yàn)結(jié)果2的準(zhǔn)確性，需要將甲醇和水的比例控制在0.25左右，且要將液體流速控制在1.0mL/min。本試驗(yàn)設(shè)定的紅景天甙檢測(cè)波長(zhǎng)為276納米，建設(shè)試驗(yàn)定量參數(shù)為峰高H，該峰高可使用Baseline810色譜工作臺(tái)測(cè)定得到。第三步，試驗(yàn)線性范圍和最低檢出限。首先取一定量的紅景天甙對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，加入一定量的甲醇溶液，稀釋成2ng/mL、4ng/mL、10ng/mL、80ng/mL、120ng/mL以及200ng/mL的紅景天甙對(duì)照品溶液。在該條件下，分別進(jìn)樣10uL的紅景天甙稀釋液，測(cè)定峰高，每個(gè)稀釋液測(cè)定三次峰高，計(jì)算平均峰高，并對(duì)絕對(duì)進(jìn)樣品平均峰值高進(jìn)行回歸分析。使用回歸分析方法進(jìn)行回歸分析后，可得出回歸方程為W=0.1402H-9.1187*γ=0.9999。將相關(guān)數(shù)據(jù)代入進(jìn)行計(jì)算后，可得出的結(jié)論為：在20-2000ng范圍內(nèi)，H與W之間呈良好的線性關(guān)系。此后，使用該方法對(duì)紅景天甙儲(chǔ)備液信噪進(jìn)行測(cè)定，得出信噪比為3：1，經(jīng)過(guò)計(jì)算得到儲(chǔ)備液中的紅景天甙最低檢出量為15ng。第四步，制備和測(cè)定紅景天甙樣品供試液。首先取一克紅景天生藥粉末、0.2克大花紅景天各三份，使用精密稱測(cè)定具體的質(zhì)量。將紅景天甙生藥樣品裝入Soxhlet提取器中，之后往提取器中加入30毫升甲醇，進(jìn)行連續(xù)回流提取，回流提取時(shí)間為兩個(gè)小時(shí)。使用30毫升甲醇對(duì)大化紅景天提取物進(jìn)行超聲處理，處理時(shí)間為一個(gè)小時(shí)。之后將兩種提取液過(guò)濾，過(guò)濾后的濾液靜置于50毫升容量瓶中，并加入適量的甲醇，將濾液稀釋到刻度線，待容量瓶中的溶液穩(wěn)定后，即完成了對(duì)紅景天生藥以及大化紅景天提取物供試品溶液的制備。其次，根據(jù)制備液保時(shí)間要求和標(biāo)準(zhǔn)加入法的要求，使用Baseline810色譜工作臺(tái)測(cè)定出紅景天供試品溶液中的紅景天甙峰峰高。該測(cè)定步驟的測(cè)定條件為為HPLC條件。同時(shí)由于紅景天甙色譜峰保留時(shí)間只有十個(gè)小時(shí)，因此需要使用一種快速的分析方法對(duì)樣品進(jìn)行分析，這里可使用外標(biāo)兩全法對(duì)紅景天甙樣品進(jìn)行有效分析，通過(guò)合理使用Baseline210色譜工作臺(tái)，即可測(cè)定紅景天甙提取物供試品溶液的具體峰高。峰高測(cè)定完畢后，使用上文得到的回歸方程即可計(jì)算出紅景天甙提取物供試品溶液中紅景天甙的實(shí)際百分含量。使用建立的方法即可測(cè)定出十個(gè)樣品液中的紅景天甙含量。第五步，測(cè)定加樣回收率和精密度。首先，使用精密儀器稱量0.02克大花紅景天藥材以及0.02克大花紅景天提取物。稱量完畢后將不同量的紅景天甙標(biāo)準(zhǔn)品加入進(jìn)來(lái)，并按照測(cè)定流程對(duì)紅景天甙含量進(jìn)行測(cè)定。經(jīng)過(guò)測(cè)定可知，大花紅景天甙生藥的回收率為97.14%，大花紅景天甙提取物回收率為99.07%。其次，選取一定量的林芝紅景天供試品溶液，按照標(biāo)準(zhǔn)的操作步驟對(duì)試品溶液進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定次數(shù)為九次，測(cè)定精密度為1.55%，取九次測(cè)定結(jié)果的平均值，作為林芝紅景天甙的含量。經(jīng)過(guò)測(cè)定可知，林芝紅景天中的紅景天甙的含量為97.11%。

4 試驗(yàn)結(jié)果與討論

經(jīng)過(guò)上述一系列的試驗(yàn)操作，可準(zhǔn)確測(cè)定出紅景天中的紅景天甙的具體含量。首先，根據(jù)測(cè)定結(jié)果可以得出結(jié)論：質(zhì)地堅(jiān)實(shí)、主根粗壯的紅景天生藥含有大量的紅景天甙，比如互生紅景天以及大花紅景天等。反之，主根細(xì)小、質(zhì)地較差的紅景天的紅景天甙含量較低，比如云南紅景天、喜馬紅景天等。與此同時(shí)，處于不同地區(qū)的同一種紅景天的紅景天甙含量也有所不同，比如不同海拔、氣候等的不同紅景天中的紅景天甙含量有所差別，一般情況下，海拔高的地方紅景天中的紅景天甙含量較低，海拔低的地方的紅景天中的紅景天甙含量相對(duì)較高，比如帕里地區(qū)的紅景天中的紅景天甙含量?jī)H為0.17%。其次，當(dāng)甲醇：水=20：80的流動(dòng)相流動(dòng)速度為1.0毫升/每分鐘時(shí)，紅景天的容量因子為2.19，即K=2.19時(shí)，測(cè)定的結(jié)果最準(zhǔn)確，最后通過(guò)分析和對(duì)比可知，K的最佳范圍為2-5。與此同時(shí)，當(dāng)甲醇與水的含量比為15比85時(shí)，Baseline810色譜工作臺(tái)測(cè)出的紅景天甙色譜峰會(huì)變寬，此時(shí)說(shuō)明紅景天甙與溶液中的雜質(zhì)有交叉的現(xiàn)象。最后，本實(shí)驗(yàn)曾使用超聲振蕩提取法和超聲法反復(fù)提取和制備紅景天生藥供試液，提取次數(shù)為四次。但是經(jīng)過(guò)提取后的紅景天藥渣中仍含有一定量的紅景天甙。由此表明使用該方法并不能完全提取出紅景天藥材中所有紅景天甙，使用Soxhlet法即可完全提取出所有的紅景天甙[2]。

結(jié)論

合理使用高效液色譜分析法能夠有效測(cè)定出紅景屬植物中的紅景天甙含量，且測(cè)定結(jié)果良好。因此，可以大范圍使用該測(cè)定方法對(duì)紅景屬植物中的紅景天甙含量進(jìn)行測(cè)定。

參考文獻(xiàn)

[1]羅敏婷，何海彤，伍志航.高效液相色譜法測(cè)定植物精油中雙氯芬酸鈉的含量[J].香料香精化妝品，2020（06）：26-28.

[2]吳學(xué)進(jìn)，王明月，馬晨等.QuEChERS/超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定香蕉中8種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留[J].熱帶作物學(xué)報(bào)，2020，41（11）：2297-2304.

作者簡(jiǎn)介：

華蕾（1982.04——），性別：女，民族：漢族，籍貫：四川，職稱：講師，學(xué)歷：研究生，研究方向：園林植物，設(shè)施園藝組培。

（新疆石河子職業(yè)技術(shù)學(xué)院?新疆?石河子?832000）