張琳玉，黃佳豪，李 鑫，馬朝陽，王 吉，2，王湘林，李榮芳,3，文利新,3

(1.湖南農業(yè)大學動物醫(yī)學院，湖南 長沙 410128； 2.長沙綠葉生物科技有限公司，湖南 長沙 410100； 3.湖南畜禽安全生產協(xié)同創(chuàng)新中心，湖南 長沙 410128)

苦杏仁是一種優(yōu)良的藥食兩用資源，具有豐富的營養(yǎng)和較高的經濟利用價值[1]。中國作為苦杏仁的主產國，年產量在2.0×104t左右[2]。在我國，苦杏仁常被用作藥用資源[3]；但在國外苦杏仁常作為杏仁蛋白糖、意式杏仁餅干等焙烤食品的原料[4]；在畜牧中，苦杏仁粉常用來替代動物飼料中的部分大豆或玉米的含量，從而提高動物的肉品質，降低養(yǎng)殖成本[5]。苦杏仁苷是苦杏仁的主要功效成分[6]，具有抗氧化、抗菌、抗炎、免疫調節(jié)活性和抗腫瘤活性[7-8]。有研究報道，苦杏仁苷對肺癌[9-11]、膀胱癌[12-14]、腎癌[15]等實體瘤具有抗腫瘤作用[7]。同時，在一些SO2誘導的咳嗽小鼠模型中，用枇杷核苦杏仁苷提取物進行灌胃治療可以對咳嗽小鼠產生明顯的止咳效果[16]。但也有研究報道，長期攝入苦杏仁苷或攝入高劑量的苦杏仁苷可以引起動物中毒，其原因是由于苦杏仁苷在β-葡萄糖苷酶的作用下水解產生氫氰酸[4]。因此，苦杏仁苷在畜牧業(yè)中常被當作抗營養(yǎng)因子，并限制其在飼料中的添加。由于目前尚無含苦杏仁苷等抗營養(yǎng)因子的天然植物在畜禽生產中開發(fā)利用的探討，因此本試驗以肉雞為研究對象，在飼料中添加不同劑量的苦杏仁粉，評價苦杏仁對肉雞生長性能、肉品質及肝臟抗氧化能力的影響，探究苦杏仁在畜禽生產中的應用及最適添加量，為飼料中抗營養(yǎng)因子的開發(fā)利用提供試驗依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

1.1.1試驗儀器和試劑

超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)試劑盒、過氧化氫酶(catalase,CAT)試劑盒、細胞谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)試劑盒、脂質過氧化標志物丙二醛(malondialdehyde,MDA)和細胞色素氧化酶試劑盒，試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。

主要儀器有：M200PRO酶標儀；YS-20中藥粉碎機；SH220F石墨消解儀；K9840全自動凱氏定氮儀；SOX406脂肪測定儀；C-LM3B數(shù)顯式肌肉嫩度儀；OPTO-STAR胴體肉質色差測定儀。

1.1.2試驗動物

1日齡雄性愛拔益加(AA)肉雞共100只，購于湖南省畜牧獸醫(yī)研究所。

1.2 試驗飼糧及原料

苦杏仁購自安徽省亳州市颯楓藥業(yè)銷售有限公司，苦杏仁苷含量1 600 mg/kg。肉雞基礎飼糧購自湖南省畜牧獸醫(yī)研究所。對照組飼喂不添加苦杏仁的基礎飼糧，參照NRC(1994)營養(yǎng)需要配制的粉狀配合飼料，基礎飼糧具體組成及營養(yǎng)成分見表1。

表1 基礎日糧組成及營養(yǎng)水平

1.3 試驗設計及分組

試驗采用完全隨機設計，將100只健康狀況良好的1日齡AA肉雞，隨機分為4組，每組25只；對照組(C組)飼喂基礎全價飼料，低劑量組(L組)飼喂含4.5 g/kg苦杏仁粉的基礎全價飼料，中劑量組(M組)飼喂含9 g/kg苦杏仁粉的基礎全價飼料，高劑量組(H組)飼喂含17 g/kg苦杏仁粉的基礎全價飼料,具體分組見表2。試驗周期為45 d，1～21 d飼喂小雞料；22～45 d飼喂中雞料。

表2 試驗分組設計

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗開始前，雞舍按程序消毒管理。整個試驗過程自由采食、飲水，試驗期間內控制光照、溫度，自然通風。雞舍采用自然光和白熾燈補光相結合，每天光照控制在15～16 h。保持正常育雛溫度，固定飼喂時間，保證水源干凈、充足，并且每天人工清糞1次。定期觀察、記錄雞的采食和精神健康狀況。按照常規(guī)免疫程序免疫。于試驗第1、7、14、21、28、35和45 d的上午空腹稱重(禁食12 h，不禁水)，以周為單位記錄各組飼料總消耗量。

1.5 樣品采集

飼養(yǎng)45 d后，三管齊斷法處死。屠宰后剝離其胸肌，用自封袋分裝，置于4℃冰箱內，用于肉色、滴水損失、剪切力、pH值和肌肉的常規(guī)測定。采集肝臟樣本，-80℃冰箱保存，用于后續(xù)試驗。

1.6 指標測定及方法

1.6.1生長性能

分別于第1、7、14、21、28、35、45 d(提前禁食12 h，自由飲水)空腹稱取肉雞體重，并記錄采食量和死亡情況，計算平均日增重(g/d)和料重比(日采食量/日體增重)。

1.6.2肌肉品質

1.6.2.1肉色

于試驗第45 d肉雞屠宰后，迅速取下胸肌50 g置于冰上，在相同光照和通風條件下，分別于宰后45 min、2 h，保存于4℃冰箱24 h及48 h后采用胴體肉質色差儀測定Opto值(比色值)用以評定肉的顏色評分,每份樣本選取肉樣上相近的3個位點進行測定，并記錄。測定時將電極完全包埋在肉樣中。

1.6.2.2pH值

于試驗第45 d肉雞屠宰后，迅速取下胸肌100 g置于冰上，使用胴體肉質pH值直測儀分別于宰后45 min、2 h，保存于4℃冰箱24 h及48 h后檢測pH值，選取肉樣上相近的3個位點測定肉樣的pH值，并記錄。測定時將電極完全包埋在肉樣中。

1.6.2.3滴水損失

于試驗第45 d肉雞屠宰后，迅速取下正方形肌肉塊(約30 g)，肉樣表面用濾紙輕輕吸去水分，稱重(W1)，然后用細線拴住肉樣一端，使肌纖維垂直向下，放置于自封袋內。保證肉樣不接觸自封袋壁并使肉樣懸空于自封袋中，確保肉樣自然滲出水分，貯存在冰箱約4℃環(huán)境下24 h，取出肉樣并用濾紙吸去表面水分再稱重(W2)，計算24 h滴水損失率。

1.6.2.4剪切力

于試驗第45 d肉雞屠宰后，迅速取下胸肌100 g左右，置于4℃冰箱中，經過48 h的儲存熟化后取出，在室溫下放置1 h升至室溫后，將溫度計(可測溫度為100℃)探頭包扎在肉樣中心，在恒溫水浴箱中水浴30～40 min，待肉樣中心溫度達75℃取出，按照肌肉纖維排列切成長為5 cm、寬為2 cm、高為2 cm的長方體肉樣3塊。用肌肉嫩度儀測量每塊肉樣3次，取剪切力的平均值(單位為N)。

1.6.3肌肉的常規(guī)成分測定

于試驗第45 d將肉雞屠宰后，迅速取下另一側胸肌，保存于4℃冰箱內，于試驗室內測定肌肉中粗蛋白質(K9840)、粗脂肪(SOX406)含量。

1.6.4氧化指標的測定

按照相應試劑盒的說明，采用生化方法測定苦杏仁苷作用下肝臟的抗氧化能力。肉雞肝臟組織的MDA、SOD、CAT和GSH-Px活性，以1 mg蛋白質單位表示。

1.6.5細胞色素氧化酶的測定

取肉雞肝臟樣本20 g，用細胞色素氧化酶試劑盒測定，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.7 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計與分析

2 結果

2.1 不同劑量的苦杏仁對肉雞生長性能的影響

由表3可知，在試驗前期(1～21 d)，各組肉雞的總增重、平均日增重、料重比無顯著差異(P>0.05)。在試驗后期(22～45 d)，H組的料重比最高，極顯著高于其余各組(P<0.01)；H組末體重、總增重和平均日增重極顯著低于C組、L組和M組(P<0.01)?？v觀試驗全期，L組的末體重最高，H組末體重最低。H組的末體重、總增重和平均日增重均極顯著低于C組、L組和M組(P<0.01)，料重比極顯著高于其余各組(P<0.01)。研究結果表明，飼料中添加高劑量的苦杏仁會導致肉雞的生長性能下降和飼料轉化率降低。

表3 不同劑量苦杏仁對肉雞生產性能的影響

2.2 不同劑量的苦杏仁對肉雞肌肉品質的影響

由表4可知，飼料中添加不同劑量的苦杏仁對胸肌分別放置45 min及2 h后的肉色的影響不顯著(P>0.05)，但在肌肉放置24 h和48 h后，H組肌肉的肉色極顯著低于C組、L組和M組(P<0.01)。飼料中添加不同劑量的苦杏仁對胸肌的放置45 min、2 h、24 h pH值及48 h 后的pH值均無顯著影響(P>0.05)。各組間肉雞肌肉24 h后的滴水損失雖無顯著差異(P>0.05)，但L組、M組的滴水損失均不同程度低于C組，而H組則高于C組。M組的肌肉剪切力最低，H組的肌肉剪切力最高且顯著高于C、L、M組(P<0.05)。綜上結果表明，肉雞飼料中添加高劑量的苦杏仁會降低肉雞肌肉肉色、pH值和嫩度，會使肌肉的滴水損失率增加，從而影響肉雞肌肉品質。而添加低、中劑量的苦杏仁會增加肌肉嫩度和降低滴水損失，從而提高肉雞肌肉品質。

表4 不同劑量苦杏仁對肉雞的影響

2.3 不同劑量的苦杏仁對肉雞肌肉化學成分的影響

由表5可知，與C組相比，L組胸肌粗蛋白質含量顯著升高(P<0.05)，M組、L組差異不顯著(P>0.05)，卻有增加的趨勢。各組間胸肌粗脂肪含量無顯著差異(P>0.05)，但L、M組肌肉粗脂肪含量均不同程度低于C組和H組。結果表明，添加低劑量的苦杏仁利于肌肉粗蛋白質的沉積，添加不同劑量的苦杏仁苷不影響肌肉粗脂肪的含量。

表5 不同劑量的苦杏仁苷對肉雞肌肉化學成分的影響(干物質基礎)

2.4 不同劑量的苦杏仁對肉雞肝臟抗氧化能力的影響

由表6可知，各組間肉雞肝臟MDA含量無顯著差異(P>0.05)；與C組相比，L、M、H組的SOD活性均極顯著性升高(P<0.01)，且SOD的活性呈劑量依賴性上升。H組的CAT和GSH-PX活性最高，C組的CAT和GSH-PX活性最低，H組的CAT和GSH-PX活性顯著高于其余3組(P<0.05)。試驗結果表明，飼料中添加不同劑量的苦杏仁苷均會增強肉雞肝臟超氧化物歧化酶、過氧化氫酶和谷胱甘肽過氧化物酶的活性，從而增加肉雞肝臟的抗氧化能力。

表6 不同劑量的苦杏仁對肉雞肝臟抗氧化能力的影響

2.5 不同劑量的苦杏仁對細胞色素氧化酶的影響

由表7可知，各組肉雞肝臟細胞色素氧化酶的活性無顯著差異(P>0.05)。試驗結果表明，在飼料中添加不同劑量苦杏仁苷對肉雞肝臟中的細胞色素氧化酶無顯著影響。

表7 不同劑量的苦杏仁苷對肉雞肝臟細胞色素氧化酶的影響 ng/ml

3 討論

3.1 不同劑量的苦杏仁對肉雞生長性能的影響

杏仁中含有豐富的蛋白質，在肉雞和綿羊的飼料中常添加杏仁粉作為飼料中的蛋白質來源[18]，有研究證實，在兔糧中用杏仁粕代替豆粕不但對生長性能無影響，還可以提高飼料轉化率，改善肉的化學成分，降低飼料生產的成本價格[19]。但苦杏仁中含有生氰二葡糖苷苦杏仁苷[20]，長期食用杏仁苷存在一定的危險[21]。本試驗結果顯示，在試驗后期，高劑量組的末體重、總增重、平均日增重極顯著低于對照組、低劑量組和中劑量組，而料重比則極顯著高于其余3組。高劑量苦杏仁極顯著降低肉雞生長性能原因有二：其一，苦杏仁味苦[2]，在飼料中添加高劑量的苦杏仁粉會影響飼料的適口性，使肉雞的采食量下降影響肉雞的生長性能；其二，苦杏仁苷本身無毒，但在酶水解過程中形成的氰化氫(HCN)具有一定毒性[21-22]，肉雞因攝入高劑量的苦杏仁，從而導致肉雞的生長性能降低。

3.2 不同劑量的苦杏仁對肉雞肌肉品質的影響

雞肉品質指標有肌肉pH值、色度、嫩度、滴水損失、營養(yǎng)價值等[23]。肉雞宰后肌肉中乳酸菌對糖原進行無氧酵解，產生乳酸，導致肌肉pH值降低[24]。pH值下降對肉的嫩度、滴水損失及肉色等有直接影響[25]。本試驗結果顯示，在屠宰后肌肉分別放置45 min、2、24、48 h，各組間的肌肉的pH值沒有顯著差異。研究表明，飼料中添加不同劑量的苦杏仁對屠宰后分別放置45 min、2、24、48 h肉雞肌肉pH值沒有影響。肉色是肌肉生理學、生物化學和微生物學變化的外觀表現(xiàn)，與肌肉色素(肌紅蛋白、血紅蛋白和有色代謝物)的存在、光線反射和氧化作用的強弱相關，試驗組肉質亮度上升，可能是因為添加苦杏仁使肌肉中肌紅蛋白的含量上升引起的。

滴水損失是衡量肌肉系水力的一個重要指標，直接影響肌肉的組織狀態(tài)、質地、風味和口感等。低、中劑量組滴水損失低于對照組，而高劑量組顯著高于對照組。這可能與苦杏仁中富含苦杏仁苷、酚類化合物等,具有清除自由基，還原機體氧化物質的功效，從而降低肌肉的氧化反應，抑制肉質酸敗，而導致滴水損失的降低有關。肌肉剪切力是衡量肉質嫩度的重要指標，能間接反映肉質纖維結構和脂肪含量及分布。除高劑量組的剪切力極顯著高于對照組，低、中劑量組中胸肌的剪切力值均低于對照組且中劑量組是最低值，證明飼料中添加苦杏仁提高了肉雞胸部肌肉的嫩度。

3.3 不同劑量的苦杏仁對肉雞肌肉化學成分的影響

肌肉中的蛋白質和脂肪含量與肉品質具有相關性，肌肉中脂肪含量與風味、嫩度成正比[26]。有研究表明，芳香物質主要沉積在脂肪組織中。肌內脂肪含量較高，可以提高肉的風味和新鮮度。肌肉中的蛋白質含量與肌肉中的營養(yǎng)成分呈正相關[27]。試驗結果表明，低劑量組的粗蛋白質含量最高，顯著高于對照組；中、高劑量組與對照組雖無差異，但均高于對照組。各組間的粗脂肪含量沒有顯著差異，但高劑量組的脂肪沉積高于對照組。因此，飼料中添加不同劑量的苦杏仁增加肉雞肌肉中的蛋白質含量，提高肉雞的營養(yǎng)價值。

3.4 不同劑量的苦杏仁對肉雞肝臟抗氧化能力的影響

機體正常情況下，機體自由基維持在一個平衡態(tài)，主要依賴機體的抗氧化體系，包括酶體系和非酶體系。酶體系主要由各種抗氧化酶組成，如超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)。超氧化物歧化酶(SOD)是機體抗氧化系統(tǒng)中重要的抗氧化酶，它能通過有效清除氧自由基來減輕脂質過氧化對機體造成的損傷，它活性的升高體現(xiàn)了機體的清除自由基速度加快。丙二醛(MDA)作為機體脂質過氧化的產物，其含量可以直接反映機體受自由基攻擊的嚴重程度，機體內自由基的產生和消除是一個動態(tài)過程。過氧化氫酶(CAT)可以催化細胞內過氧化氫分解而起到抗氧化作用，還可以防止過氧化氫含量過高引起的機體損傷[28]。谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)主要清除機體內多余過氧化氫和脂質過氧化物。本試驗結果表明，各組間肝臟中的MDA濃度差異不顯著，但飼料中添加苦杏仁的肉雞肝臟中MDA的濃度均不同程度低于對照組，其原因可能是苦杏仁苷能有效清除自由基，并有還原能力。試驗組肉雞肝臟的SOD活性呈劑量依賴性增強，均極顯著高于對照組。高劑量組肉雞肝臟中的CAT活性和GSH-PX的活性均顯著高于其余3組，低、中劑量組雖與對照組間沒有差異，也不同程度高于對照組。因此，飼料中添加不同劑量的苦杏仁均能通過提高抗氧化酶濃度，清除脂質過氧化物來提升機體抗氧化能力。本研究結果過與董捷的研究結果相近[29]。

細胞色素氧化酶主要分布在內質網和線粒體上，參與機體內一些激素的合成過程。機體氰苷中毒時，氰離子能迅速與氧化型細胞色素氧化酶的三價鐵(Fe3+)結合，阻礙了其被還原為還原型細胞色素酶。本試驗結果表明，在飼料中添加不同劑量的苦杏仁不會對肉雞肝臟中的細胞色素氧化酶造成影響。

4 結論

飼料中添加的低劑量(4.5 g/kg)和中劑量(9 g/kg)苦杏仁粉均可改善肉雞肉品質和增強肝臟抗氧化性能，其中以添加9 g/kg苦杏仁的效果最佳。而添加高劑量(17 g/kg)的苦杏仁粉雖能增強肉雞肝臟的抗氧化能力，但會導致肉雞的生長性能和肉品質降低。