張家春，周 穎，李朝楨，周鑫偉，洪 江，張清海，張珍明

（1.貴州省植物園，貴陽(yáng) 550004；2.貴州科學(xué)院，貴陽(yáng) 550001；3.貴州醫(yī)科大學(xué)，貴陽(yáng) 550025）

茶葉是世界三大非酒精飲料之一，是人們廣泛使用的飲品[1]。貴州作為我國(guó)茶葉生產(chǎn)的重要省份之一，茶產(chǎn)業(yè)在貴州省經(jīng)濟(jì)社會(huì)發(fā)展中具有重要的地位和作用[2]。貴定鳥(niǎo)王茶（又稱(chēng)云霧貢茶），是獨(dú)特的珍貴地方良種，半喬木、葉肉厚、芽葉綠色和茸毛多，用鳥(niǎo)王茶茶葉加工制成的成品茶有獨(dú)特的香氣[3]，且廖朝選等人對(duì)鳥(niǎo)王茶中微量元素分析發(fā)現(xiàn)鳥(niǎo)王茶中Se含量達(dá)到《NY/T600-2002富硒茶》中富硒茶含量要求，為富硒茶葉[4]。由此，以鳥(niǎo)王茶的品質(zhì)為優(yōu)勢(shì)在貴州大力推廣種植，勢(shì)必將促進(jìn)當(dāng)?shù)亟?jīng)濟(jì)的發(fā)展。茶葉主要生化成分是構(gòu)成茶葉品質(zhì)優(yōu)劣的物質(zhì)基礎(chǔ)，探究茶葉的生化多樣性，可為發(fā)掘利用優(yōu)異茶樹(shù)種質(zhì)資源奠定基礎(chǔ)[5-6]。為篩選出鳥(niǎo)王茶產(chǎn)量及品質(zhì)比較穩(wěn)定的優(yōu)良單株，以及更進(jìn)一步選育高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)鳥(niǎo)王茶品種奠定基礎(chǔ)。本研究綜合考慮鳥(niǎo)王茶不同葉片外觀表現(xiàn)型及不同采茶季節(jié)對(duì)鳥(niǎo)王茶的生物量及品質(zhì)研究，特別是對(duì)成品茶品質(zhì)的生化指標(biāo)進(jìn)行研究，通過(guò)生物量、產(chǎn)量及品質(zhì)篩選優(yōu)良葉型，以促進(jìn)貴州鳥(niǎo)王茶茶葉產(chǎn)業(yè)更好的發(fā)展。

1 材料和方法

1.1 樣品采集與制備

以3個(gè)主要的栽培葉片外觀表現(xiàn)型大葉型（葉長(zhǎng)10.50～11.77 cm，葉寬 3.82～4.5 cm）、中葉型（葉長(zhǎng)6.67～9.48 cm，葉寬 2.44～4.44 cm）、小葉型（葉長(zhǎng)3.38～5.67 cm，葉寬 1.85～2.58 cm）為研究對(duì)象，選擇長(zhǎng)勢(shì)和種植年限相同的鳥(niǎo)王茶茶樹(shù)，進(jìn)行編號(hào)掛牌，參照《農(nóng)作物種質(zhì)資源鑒定技術(shù)規(guī)程茶樹(shù)》（NY/T1312-2007）[7]中對(duì)有性系的取樣株數(shù)要求，本研究中鳥(niǎo)王茶為有性繁殖苗人工種植的種群，每個(gè)葉片外觀表現(xiàn)型取樣株數(shù)設(shè)置為10株，共設(shè)置葉片外觀表現(xiàn)型取樣株數(shù)30株數(shù)。本研究中不同季節(jié)以茶葉采摘時(shí)間來(lái)劃分，以4月初—5月底采摘的為春茶，6月初—7月初采摘的為夏茶，8月中旬—9月底采摘的為秋茶，春茶、夏茶、秋茶的采樣時(shí)間分別為4月15日、6月15日和9月15日。在采樣時(shí)間對(duì)設(shè)置的樣點(diǎn)進(jìn)行芽梢萌枝數(shù)、芽梢長(zhǎng)度、發(fā)芽密度的觀察及測(cè)量統(tǒng)計(jì)，其中發(fā)芽密度測(cè)量方法為固定方框，方框的面積為33.3 cm×33.3 cm，從上至下采摘完方框內(nèi)所有的一芽一葉，記錄數(shù)量，并稱(chēng)量一芽一葉百芽重；將采集的一芽一葉用恒溫干燥箱在120℃高溫下烘干至恒量，烘干樣品用高速粉碎機(jī)粉碎1 min，過(guò)40～60目篩備用。

1.2 茶葉品質(zhì)測(cè)定方法

茶葉礦質(zhì)元素含量采用電感耦合等離子體-質(zhì)譜法測(cè)定[4]：稱(chēng)取l g樣品于高壓密封罐中，加5 mL硝酸溶液和2 mL過(guò)氧化氫，250℃消解6 min、400℃消解5 min、450℃消解5 min，待消解罐冷卻后，將溶液轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，用2次去離子水沖洗3次后定容得待測(cè)樣品溶液，樣品采用電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（ICP-YIS，Agilent 7500 a）進(jìn)行測(cè)定。

茶葉水浸出物、咖啡堿、茶多酚和氨基酸含量的測(cè)定分別采用 GB/T8305-2013[8]、GB/T8312-2013[9]、GB/T8313-2018[10]和 GB/T8314-2013[11]。 按 照 GB/T8313-2018，采用高效液相色譜法檢測(cè)兒茶素類(lèi)化合物的6個(gè)組分：表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（EGCG）、表沒(méi)食子兒茶素（EGC）、表兒茶素沒(méi)食子酸酯（ECG）、表兒茶素（EC）、沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（GCG）及兒茶素（C）：稱(chēng)取 0.2 g（精確到 0.000 1g）茶粉樣于10 mL離心管中，加入經(jīng)70℃預(yù)熱的70%甲醇溶液5 mL，70℃水浴浸提10 min，冷卻至室溫，3 500 r/min離心10 min，轉(zhuǎn)移上清液至10 mL容量瓶；殘?jiān)儆?0%甲醇溶液5 mL提取1次。合并提取液，定容至10 mL，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾；吸取2 mL提取液混合于8 mL穩(wěn)定液中，0.45 μm膜過(guò)濾，HPLC（HPLC-20AT，日本島津公司）檢測(cè)；測(cè)定用C18柱，流速1 mL/min，柱溫35℃，檢測(cè)波長(zhǎng)278 nm，梯度洗脫，用兒茶素類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)外標(biāo)法直接定量。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法

本研究的所有數(shù)據(jù)描述性統(tǒng)計(jì)采用Excel 2013分析、顯著性分析統(tǒng)計(jì)采用SPSS19.0分析；相關(guān)圖件制作在Origin9.1中完成。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同葉片外觀表現(xiàn)型與季節(jié)下茶葉產(chǎn)量研究

對(duì)鳥(niǎo)王茶不同葉片外觀表現(xiàn)型與季節(jié)的生物量指標(biāo)進(jìn)行系統(tǒng)研究，并對(duì)畝產(chǎn)量進(jìn)行估算，結(jié)果如表1和圖1所示。從表1可以發(fā)現(xiàn)，除大葉型外，小葉型和中葉型每株芽梢年萌枝數(shù)之間無(wú)顯著差異，大葉型芽梢年萌枝數(shù)顯著最少，表現(xiàn)為小葉型＞中葉型＞大葉型。不同葉片外觀表現(xiàn)型在不同季節(jié)芽梢長(zhǎng)度的差異表現(xiàn)上不盡相同，春茶表現(xiàn)為小葉型＞中葉型＞大葉型，夏茶為中葉型＞大葉型＞小葉型，秋茶為大葉型＞中葉型＞小葉型；秋茶的芽梢長(zhǎng)度較春茶、夏茶芽梢長(zhǎng)度大，小葉型表現(xiàn)為秋茶＞春茶＞夏茶，中葉型、大葉型表現(xiàn)為秋茶＞夏茶＞春茶。從發(fā)芽密度大小結(jié)果來(lái)看（圖1），小葉型發(fā)芽密度在春茶、夏茶及秋茶中均最大，均表現(xiàn)為小葉型＞中葉型＞大葉型，與大葉型、中葉型的發(fā)芽密度均差異顯著。鳥(niǎo)王茶不同葉片外觀表現(xiàn)型與季節(jié)的一芽一葉百芽重結(jié)果（圖1）表明，大葉型一芽一葉百芽重在春茶、夏茶及秋茶中均最重，與中葉型、小葉型的百芽重均差異顯著；中葉型百芽重均僅次于大葉型。從不同葉片外觀表現(xiàn)型鳥(niǎo)王茶畝產(chǎn)量估算結(jié)果（表1）來(lái)看，不同季節(jié)鳥(niǎo)王茶畝產(chǎn)量，小葉型、中葉型及大葉型中均為春茶＞秋茶＞夏茶；不同葉片外觀表現(xiàn)型鳥(niǎo)王茶畝產(chǎn)量，春茶表現(xiàn)為小葉型＞中葉型＞大葉型，夏茶和秋茶表現(xiàn)為中葉型＞大葉型＞小葉型。

表1 鳥(niǎo)王茶不同葉片外觀表現(xiàn)型與季節(jié)芽梢生長(zhǎng)量統(tǒng)計(jì)及畝產(chǎn)量估算Table 1 The statistics of shoot growth and the estimation of yield per mu of different leaf appearance and season of Niaowang tea

圖1 鳥(niǎo)王茶不同葉片外觀表現(xiàn)型發(fā)芽密度、一芽一葉百芽重統(tǒng)計(jì)Figure 1 Statistics of germination density，100 buds weight of one bud and one leaf of different leaf appearance of Niaowang tea

2.2 不同葉片外觀表現(xiàn)型與季節(jié)下茶葉品質(zhì)分析

鳥(niǎo)王茶不同季節(jié)茶葉品質(zhì)檢查結(jié)果如表2所示。從表2來(lái)看，鳥(niǎo)王茶茶葉水浸出物的含量隨季節(jié)變化規(guī)律表現(xiàn)為夏茶＞秋茶＞春茶，夏茶水浸出物平均含量顯著最高，其中春茶水浸出物平均含量為20.46%，夏茶水浸出物平均含量為45.33%，秋茶水浸出物平均含量為23.92%。鳥(niǎo)王茶茶葉茶多酚含量隨季節(jié)變化其含量增加，其中春茶平均含量為15.75%，夏茶平均含量為17.60%，秋茶平均含量為18.75%。鳥(niǎo)王茶春茶總兒茶素含量平均值為10.08%，夏茶平均值為13.65%，秋茶平均值為11.78%，總兒茶素隨季節(jié)變化表現(xiàn)為夏茶＞秋茶＞春茶。鳥(niǎo)王茶茶葉咖啡堿的含量隨季節(jié)變化規(guī)律表現(xiàn)為夏茶＞春茶＞秋茶，其中春茶咖啡堿平均含量為3.12%，夏茶咖啡堿平均含量為3.32%，秋茶咖啡堿平均含量為2.57%。不同季節(jié)鳥(niǎo)王茶茶葉氨基酸含量差異顯著，春茶和秋茶氨基酸平均含量顯著高于夏茶，鳥(niǎo)王茶茶葉中氨基酸含量隨季節(jié)變化規(guī)律為春茶＞秋茶＞夏茶。

表2 不同季節(jié)鳥(niǎo)王茶茶葉品質(zhì)測(cè)定結(jié)果統(tǒng)計(jì)Table 2 The statistics of test results of tea quality of Niaowang tea in different seasons %

對(duì)鳥(niǎo)王茶不同葉片外觀表現(xiàn)型及季節(jié)影響制茶品質(zhì)的主要生化指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果如表3和表4所示。不同葉片外觀表現(xiàn)型及季節(jié)鳥(niǎo)王茶中總兒茶素含量差異不顯著，春茶、夏茶和秋茶中總兒茶素含量均以中葉型最高，春茶中表現(xiàn)為中葉型＞小葉型＞大葉型，夏茶和秋茶中表現(xiàn)為中葉型＞大葉型＞小葉型；小葉型、中葉型和大葉型中總兒茶素含量均以夏季最高。表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（EGCG）是兒茶素類(lèi)化合物的重要組成成分，是茶葉關(guān)鍵品質(zhì)成分之一，從表3來(lái)看，不同葉片外觀表現(xiàn)型及季節(jié)鳥(niǎo)王茶中EGCG量差異不顯著，春茶和秋茶中EGCG含量以中葉型最高，夏茶以大葉型含量最高；小葉型、中葉型和大葉型中EGCG含量最高均是夏茶。不同葉片外觀表現(xiàn)型兒茶素指數(shù)差異不顯著，不同季節(jié)鳥(niǎo)王茶兒茶素指數(shù)差異顯著，不同葉片外觀表現(xiàn)型的春茶兒茶素均大于500，不同葉片外觀表現(xiàn)型的夏茶和秋茶兒茶素指數(shù)均低于500；春茶中，以中葉型兒茶素指數(shù)最大，表現(xiàn)為中葉型＞大葉型＞小葉型。

表3 鳥(niǎo)王茶不同葉片外觀表現(xiàn)型及季節(jié)下兒茶素類(lèi)化合物組分Table 3 The components of catechins of different leaf appearance and season of Niaowang tea

表4 鳥(niǎo)王茶不同葉片外觀表現(xiàn)型及季節(jié)下酚氨比及氨基酸組分Table 4 The phenol ammonia ratio and amino acid composition of different leaf appearance and season of Niaowang tea

不同葉片外觀表現(xiàn)型和季節(jié)鳥(niǎo)王茶中氨基酸平均含量差異較大，春茶和夏茶中以小葉型中氨基酸含量最高，秋茶中以大葉型氨基酸含量最高；小葉型以春茶氨基酸含量最大，中葉型和大葉型氨基酸含量最大值出現(xiàn)在秋茶中。茶多酚與氨基酸的比值作為茶葉品質(zhì)適制性的生化指標(biāo)，一般認(rèn)為酚氨比小于8適宜制綠茶，大于8適宜制紅茶（酚氨比在8～15之間綠茶紅茶兼制）。不同季節(jié)鳥(niǎo)王茶茶葉中酚氨比不同，春茶和秋茶酚氨比均小于8；夏茶酚氨比大于8，其中中葉型酚氨比大于15。

2.3 不同季節(jié)鳥(niǎo)王茶茶葉礦質(zhì)元素分析

不同季節(jié)鳥(niǎo)王茶茶葉中礦質(zhì)元素含量檢測(cè)統(tǒng)計(jì)結(jié)果如表5所示，從變異系數(shù)來(lái)看，鳥(niǎo)王茶春茶中礦質(zhì)元素的含量變化較小，屬于弱變異程度；夏茶和秋茶變化較大，夏茶中的Se和Ca元素為中等變異，秋茶中的Se和Fe為強(qiáng)變異，秋茶中的Zn和Ca為中等變異。結(jié)果表明不同季節(jié)鳥(niǎo)王茶茶葉中礦質(zhì)元素的含量存在顯著差異，常量元素Ca的含量平均值隨季節(jié)表現(xiàn)為夏茶＞秋茶＞春茶，夏茶中Ca的含量是春茶中含量的2倍；微量元素Fe和常量元素Mg的含量表現(xiàn)為秋茶＞春茶＞夏茶，秋茶中Fe和Mg的含量分別是夏茶中含量的4倍和2倍；微量元素Se和Zn的含量表現(xiàn)為春茶＞秋茶＞夏茶，春茶中Se的含量是夏茶中含量的2倍多。不同礦質(zhì)元素在不同季節(jié)的鳥(niǎo)王茶茶葉中含量也存在差異，春茶和秋茶中礦質(zhì)元素的含量變化規(guī)律為Mg＞Ca＞Fe＞Zn＞Se，夏茶中礦質(zhì)元素含量變化規(guī)律為Ca＞Mg＞Fe＞Zn＞Se。

表5 不同季節(jié)鳥(niǎo)王茶茶葉中礦質(zhì)元素含量Table 5 Contents of mineral elements in the tea of Niaowang tea in different seasons mg·kg-1

3 討論與結(jié)論

鳥(niǎo)王茶是我省的本地特色的名優(yōu)茶葉，長(zhǎng)期以來(lái)鳥(niǎo)王茶以有性繁殖苗來(lái)人工種植以供采茶利用。本研究通過(guò)對(duì)人工種植的鳥(niǎo)王茶樣地進(jìn)行研究調(diào)查，發(fā)現(xiàn)人工種植鳥(niǎo)王茶葉片結(jié)構(gòu)與茶原種（Camellia sinensis（L.）O.Kuntze.）差異較大。通過(guò)對(duì)樣地中鳥(niǎo)王茶葉片的葉長(zhǎng)和葉寬進(jìn)行聚類(lèi)分析，發(fā)現(xiàn)鳥(niǎo)王茶目前主要有3種葉片外觀表現(xiàn)型：大葉型、中葉型和小葉型。對(duì)不同葉片外觀表現(xiàn)型鳥(niǎo)王茶每株芽梢年萌枝數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)研究，每株芽梢年萌枝數(shù)表現(xiàn)為小葉型＞中葉型＞大葉型，大葉型芽梢年萌枝數(shù)顯著最少。以發(fā)芽密度、一芽一葉百芽重為產(chǎn)量估算指標(biāo)進(jìn)行畝產(chǎn)量估算，并綜合考慮鳥(niǎo)王茶年萌枝數(shù)、芽梢長(zhǎng)度，不同葉片外觀表現(xiàn)型主推小葉型和中葉型。

茶葉的生化成分是形成茶葉品質(zhì)的物質(zhì)基礎(chǔ)，參照“國(guó)家茶樹(shù)優(yōu)良種質(zhì)評(píng)價(jià)利用數(shù)據(jù)庫(kù)”596份資源的生化成分檢測(cè)結(jié)果[12]，本研究中不同季節(jié)鳥(niǎo)王茶中茶多酚、總兒茶素、氨基酸總量和咖啡堿的含量符合國(guó)家茶樹(shù)優(yōu)良種。水浸出物是茶葉中水溶性生化成分混合物的總和，水浸出物含量在一定程度上反映了茶湯內(nèi)含成分的多少[13]。本研究中鳥(niǎo)王茶水浸出物在不同季節(jié)中含量不同，夏茶中顯著最高為45.33%，春茶、秋茶分別為20.46%、23.92%。水浸出物只是綠茶優(yōu)良品質(zhì)形成的條件之一，水浸出物含量高，并不意味著綠茶品質(zhì)就優(yōu)良。鳥(niǎo)王茶春茶湯色清純鮮亮，可能是鳥(niǎo)王茶春茶水浸出物的含量低決定了鳥(niǎo)王茶浸泡中的清亮湯色。綠茶色香味優(yōu)良品質(zhì)的形成，是靠茶葉中眾多生化成分綜合協(xié)同作用及比例協(xié)調(diào)的結(jié)果。從鳥(niǎo)王茶中茶多酚、氨基酸和咖啡堿含量來(lái)看，鳥(niǎo)王茶在春茶、夏茶和秋茶的品質(zhì)差異有待進(jìn)一步研究。

茶葉含有許多對(duì)人體健康有益的微量元素[14]，且茶葉中近15.2%的Fe、28.8%的Mn、31.8%的Cu和50.7%的Zn能溶入茶水中而被人體吸收，因此飲茶將成為人體攝取微量元素的重要方式之一。本研究以Ca、Fe、Zn、Se和Mg等5種礦質(zhì)元素來(lái)研究不同季節(jié)鳥(niǎo)王茶中礦質(zhì)元素特征，除微量元素Zn外，夏茶中Ca含量是春茶中含量的2倍，秋茶中Fe和Mg含量分別是夏茶中含量的4倍和2倍，春茶中Se含量是夏茶中含量的2倍多；微量元素Se和Zn均以春茶中含量最大，常量元素Ca以夏茶中含量最大，而微量元素Fe和常量元素Mg含量最大值在秋茶中。從不同季節(jié)鳥(niǎo)王茶中礦質(zhì)元素綜合特征，以秋茶中礦質(zhì)元素最高，其次是春茶；參照《NY/T600-2002富硒茶》，春茶和秋茶為富硒茶。

茶多酚是茶葉中多酚類(lèi)物質(zhì)總稱(chēng)，是綠茶滋味濃度和苦澀味的代表物質(zhì)；氨基酸是茶葉中的主要物質(zhì)，是形成茶湯鮮爽度和香味的主要物質(zhì)。兒茶素類(lèi)物質(zhì)是茶多酚類(lèi)物質(zhì)的首要組分，各種兒茶素的滋味有所不同，非酯型兒茶素收斂性較弱，味苦后甘爽口；酯型兒茶素收斂性較強(qiáng)，高含量下呈現(xiàn)出苦澀味[15]。兒茶素類(lèi)總量高，非酯型兒茶素比重大，茶多酚/氨基酸比值小，兒茶素指數(shù)高是適制優(yōu)質(zhì)綠茶的生化指標(biāo)；酯型兒茶素比重大，兒茶素指數(shù)低和茶多酚/氨基酸比值大，富含多酚類(lèi)、還原糖、水浸出物和適量的氨基酸和咖啡堿，是適制優(yōu)質(zhì)紅茶或?yàn)觚埐璧纳笜?biāo)。因此，從鳥(niǎo)王茶不同葉片外觀表現(xiàn)型及季節(jié)下影響制茶品質(zhì)的生化指標(biāo)綜合來(lái)看，春茶的生化指標(biāo)適制優(yōu)質(zhì)綠茶；夏、秋茶的生化指標(biāo)適制優(yōu)質(zhì)紅茶；中葉型制茶品質(zhì)較佳，可以作為單株優(yōu)選育種材料；大葉類(lèi)型可試制烏龍茶產(chǎn)品。