余璨 蔣超

摘要：非洲豬瘟（African swine fever，ASF）作為由非洲豬瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）引起的我國一類動(dòng)物疫病，對(duì)其有效的防控對(duì)于我國養(yǎng)豬業(yè)的長足健康發(fā)展有至關(guān)重要的作用。在ASF的防控手段中，可根據(jù)ASF的發(fā)展進(jìn)程和防控目的分為ASF快速準(zhǔn)確的檢測和診斷、ASF的有效特異性地預(yù)防和治療以及強(qiáng)有力的養(yǎng)殖體系管理等方面。近年來，隨著ASF的疫情的發(fā)展，我國為防控ASF而出現(xiàn)的專利技術(shù)取得了重大進(jìn)步，現(xiàn)以專利技術(shù)數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)對(duì)我國ASF防治過程中檢測和診斷、預(yù)防和治療以及體系管理的技術(shù)進(jìn)展進(jìn)行分析，為我國快速有效撲滅ASF疫病提供技術(shù)參考。

關(guān)鍵詞：非洲豬瘟;非洲豬瘟病毒;診斷;治療;防控

中圖分類號(hào)：G306;S858.28文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1003-5168（2020）33-0114-03

1 引言

ASFA（African swine fever）是由于ASFV（African swi-

ne fever）而引起一種高度接觸性、急性以及烈性傳染病，其可通過直接接觸、間接接觸以及短距離氣溶膠方式傳染，主要危害家豬和野豬，其傳染迅速、病死率可達(dá)100%，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)有危害性極大。引發(fā)ASF的ASFV是一種DNA病毒，具有典型二十面體對(duì)稱結(jié)構(gòu)，直徑為260nm～300nm，堿基數(shù)為170 kb～190 kb，是至今為止所知曉的唯一蟲媒DNA病毒[1-2]。

ASF作為世界動(dòng)物衛(wèi)生組織規(guī)定須申報(bào)的動(dòng)物疫病以及我國一類動(dòng)物疫病，其防治一直是全球性的難題，對(duì)其迅速有效的撲滅也是該全球性疫病防控的目標(biāo)。在防控ASF的主要手段中，根據(jù)ASF的發(fā)展進(jìn)程和防控目的，其主要涉及ASF的檢測和診斷、預(yù)防和治療、養(yǎng)殖體系管理等幾個(gè)方面。近年來，防控ASF疫病的技術(shù)取得了巨大的發(fā)展，同時(shí)專利技術(shù)信息作為獲取該領(lǐng)域研發(fā)技術(shù)和產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀的重要來源，對(duì)其全面的分析能為ASF疫病防控提供有價(jià)值的參考。因此，本文從專利技術(shù)入手對(duì)ASF疫病防控手段的技術(shù)研究進(jìn)行整理和總結(jié)，以期為撲滅ASF疫病和為該領(lǐng)域的技術(shù)創(chuàng)新以及產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供支持。

2 ASF的檢測與診斷

2.1 ASF的檢測與診斷技術(shù)分類

為了防止ASF疫情的擴(kuò)散，快速精準(zhǔn)對(duì)ASF實(shí)施早期診斷和檢測是防控ASF疫病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。圖1顯示了我國在ASF的診斷和監(jiān)測的技術(shù)領(lǐng)域?qū)＠夹g(shù)分布情況，其中ASF的診斷和監(jiān)測技術(shù)主要涉及了分子生物學(xué)檢測、免疫學(xué)檢測、對(duì)診斷檢測裝置設(shè)備的改進(jìn)和涉及病毒表達(dá)載體和細(xì)胞株的構(gòu)建等其他方式。在上述的檢測方式中，分子生物學(xué)監(jiān)測、檢測裝置設(shè)備的改進(jìn)和免疫學(xué)檢測是我國在ASF的診斷和監(jiān)測中的重點(diǎn)和熱點(diǎn)技術(shù)，其占比分別是64%、23%和10%。在針對(duì)分子生物學(xué)檢測方面，其主要涉及了普通的PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、多重PCR、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）、重組酶介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增法（RAA）、重組酶聚合酶擴(kuò)增（RPA）、基于CRISPR或CRISPR/Cas12a的檢測等檢測技術(shù);在針對(duì)免疫學(xué)檢測技術(shù)中則主要涉及了酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）、膠體金免疫層析技術(shù)等;而在檢測裝置設(shè)備方面則重點(diǎn)是對(duì)涉及上述檢測技術(shù)的設(shè)備儀器，例如對(duì)PCR試劑盒、熒光擴(kuò)增檢測儀、LAMP檢測的恒溫金屬浴裝置、酶標(biāo)板加注盒、酶標(biāo)板清洗裝置、膠體金檢測卡等的改進(jìn)。

2.2 重要申請(qǐng)人ASF的檢測與診斷技術(shù)

通過分析重要申請(qǐng)人可以體現(xiàn)該領(lǐng)域所集中的技術(shù)研發(fā)主體和技術(shù)研發(fā)的前沿和重點(diǎn)技術(shù)。我國ASF的檢測與診斷領(lǐng)域中專利申請(qǐng)主體涉及科研院所、企業(yè)、高校以及個(gè)人，其占比分別為36%、36%、23%和5%。從該領(lǐng)域中排名前10的重要申請(qǐng)人可以看出，在該領(lǐng)域中的重要研發(fā)主體涉及了科研院所、高校以及企業(yè)，其中天津出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)植物與食品檢測中心和華南農(nóng)業(yè)大學(xué)分別作為科研院所和高校申請(qǐng)主體的代表，同時(shí)對(duì)于華南農(nóng)業(yè)大學(xué)而言，其專利申請(qǐng)大多是與肇慶大華農(nóng)生物藥品有限公司作為聯(lián)合申請(qǐng)人，可見在該領(lǐng)域中高校與企業(yè)通過合作驅(qū)動(dòng)研究和產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新也是申請(qǐng)主體的創(chuàng)新手段。

基于天津出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)植物與食品檢測中心和華南農(nóng)業(yè)大學(xué)在該領(lǐng)域的研發(fā)實(shí)力，接下來重點(diǎn)分析上述申請(qǐng)人在該領(lǐng)域的重點(diǎn)技術(shù)。華南農(nóng)業(yè)大學(xué)的研究技術(shù)集中在采用分子生物學(xué)檢測以區(qū)分ASFV野毒株與特定基因缺失基因缺失株，CN110804677A、CN110551853A、CN111074000A公開了采用二重PCR擴(kuò)增ASFVCD2V和360-505R基因或者采用三重PCR擴(kuò)增ASFVCD2V、P72、360-505R鑒別ASFV野毒株與CD2V和/或360-505R基因缺失株。于此同時(shí)，CN110885905A、CN110791591A中則是分別采用LAMP技術(shù)設(shè)計(jì)引物以快速特異地分辨ASFV野毒株與MGF360-505R或CD2v和360-505R雙基因缺失基因缺失株。此外，CN110777220A中還公開了將RPA技術(shù)和側(cè)流免疫試紙條（LFD）結(jié)合的RPA-LFD技術(shù)的鑒別病毒野毒株與基因缺失株。天津出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)植物與食品檢測中心的研究內(nèi)容除了分子生物學(xué)檢測外還包括免疫學(xué)檢測技術(shù)，在免疫學(xué)檢測技術(shù)中，CN101831407A、CN101825633A中公開了建立包括原核表達(dá)的重組ASFV P30蛋白作為包被抗原、通過雜交瘤技術(shù)獲得的保藏號(hào)為CGMCC NO.3771雜交瘤細(xì)胞系分泌的單克隆抗體的酶標(biāo)記物的ELISA檢測體系，而CN101818129A、CN101833005A中則公開了構(gòu)建包括包被抗原ASFV P54蛋白以及保藏號(hào)為CGMCC NO.3750雜交瘤細(xì)胞系分泌的單克隆抗體的酶標(biāo)記物的ELISA檢測體系。在分子生物學(xué)檢測方面津出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)植物與食品檢測中心更側(cè)重于采用PCR技術(shù)對(duì)ASFV的直接檢測，CN101463396A、CN104745730A、CN104774953A公開了采用Taqman探針的熒光定量分別診斷ASFV P54、ASFV CP204L、ASFV CP530R基因。為了提高檢測效能CN104745729A、CN104745731A分別公開了利用二重或三重?zé)晒釸T-PCR同時(shí)檢出ASFV和豬繁殖與呼吸綜合征病毒。