李麗+鄧飛+裴超信+張睿+周莉媛+邵靚

摘要：非洲豬瘟（African swine fever，ASF）已在全球多個(gè)國(guó)家發(fā)生和流行，是我國(guó)重點(diǎn)防范的外來(lái)動(dòng)物疫病。加強(qiáng)監(jiān)測(cè)對(duì)該病的防范有重要意義。采用美國(guó)Kernel公司的非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)來(lái)源于四川省阿壩州、廣元、巴中、達(dá)州、廣安、成都、內(nèi)江、資陽(yáng)、遂寧和雅安等地的540份豬血清樣品進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果顯示均為ASFV抗體陰性。

關(guān)鍵詞：四川?。环侵挢i瘟；抗體檢測(cè)

中圖分類號(hào)：S858.28 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1007-273X（2016）10-0010-03

非洲豬瘟（African Swine Fever，ASF）又稱為非洲豬瘟疫、疣豬病，是由雙鏈DNA 病毒感染引起的豬的一種急性、高度傳染性疾病[1]。其臨床癥狀和病理變化與豬瘟相似，表現(xiàn)為發(fā)熱、皮膚發(fā)紺和淋巴結(jié)、腎、胃腸黏膜充血、出血，急性型死亡率高達(dá)100%[2]。該病1921年首先發(fā)現(xiàn)于非洲東部國(guó)家肯尼亞，然后一直存在于撒哈拉以南的中、南部及西部的非洲國(guó)家[3]，據(jù)OIE統(tǒng)計(jì)，截至2012年底，全球共有48個(gè)國(guó)家報(bào)道發(fā)生過(guò)非洲豬瘟疫情。由于該病危害嚴(yán)重，OIE將其列為A 類法定報(bào)告動(dòng)物疫病[4]，我國(guó)將其列為一類動(dòng)物疫病。

雖然目前我國(guó)尚無(wú)非洲豬瘟疫情，但由于該病具有高傳染性及高死亡率且缺乏有效疫苗防治，隨著經(jīng)濟(jì)全球化的發(fā)展，ASF對(duì)我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)具有潛在的高風(fēng)險(xiǎn)性。加之近年來(lái)，該疫情在俄羅斯南部和北高加索地區(qū)繼續(xù)擴(kuò)散，我國(guó)與俄羅斯毗鄰，因此跨境傳播防控壓力更為巨大。四川省自2015年積極開(kāi)展實(shí)驗(yàn)室的血清學(xué)檢測(cè)工作，加強(qiáng)對(duì)該病的持續(xù)監(jiān)測(cè)，鄧飛等曾對(duì)四川省北部及東北部的5個(gè)地級(jí)市豬血清進(jìn)行抗體檢測(cè)，結(jié)果均為陰性[5]。本試驗(yàn)持續(xù)監(jiān)測(cè)上述5個(gè)地市的樣品并新增成都等四川中部及東部的5個(gè)地級(jí)市豬血清監(jiān)測(cè)?，F(xiàn)將其報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 血清樣品

血清樣本來(lái)源于四川省阿壩、廣元、巴中、達(dá)州、廣安的規(guī)模場(chǎng)及散養(yǎng)戶90份以及成都、內(nèi)江、資陽(yáng)、遂寧、雅安的規(guī)模場(chǎng)、散養(yǎng)戶及屠宰場(chǎng)450份，共計(jì)540份。

1.2 檢測(cè)試劑

美國(guó)Kernel公司的非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒，批號(hào)：160118。

1.3 檢測(cè)方法

（1）使用前所有試劑恢復(fù)至室溫。

（2）在ELISA反應(yīng)板上每孔加50 μL稀釋液，以50 μL/孔加入待檢樣品和陰陽(yáng)性對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照（E12、F12）和陰性對(duì)照（G12、H12）各設(shè)置兩孔，檢測(cè)樣品設(shè)置一孔，每板檢測(cè)樣品90份。

（3）封膜，振蕩，37 ℃孵育60 min。

（4）棄酶標(biāo)板中的液體于裝有NaOH的容器中，洗板機(jī)洗板4次，最后一次吸水紙上輕拍酶標(biāo)板。

（5）每孔加100 μL稀釋好的酶標(biāo)結(jié)合物，封膜，37 ℃孵育30 min。

（6）洗板5次，最后一次吸水紙上輕拍酶標(biāo)板。

（7）每孔加100 μL底物，室溫避光孵育15 min。

（8）每孔加100 μL終止液，振蕩混勻，酶標(biāo)儀450 nm讀取OD值。

1.4 結(jié)果判定

結(jié)果有效性確認(rèn)：陰性對(duì)照（G12、H12）平均OD值/陽(yáng)性對(duì)照（E12、F12）平均OD值≥4為有效，本試驗(yàn)檢測(cè)的6個(gè)反應(yīng)板結(jié)果均有效。

PI值計(jì)算：PI=1-（OD450 nm樣品值/OD450 nm陰性平均值）×100%

結(jié)果判定：PI<40%，ASFV抗體陰性；PI≥40%，ASFV抗體陽(yáng)性；PI在40%～50%之間為可疑，建議重新檢測(cè)或以其他方法檢測(cè)。

2 結(jié)果與分析

檢測(cè)樣品原始OD450 nm值見(jiàn)表1至表6。由表1～6可見(jiàn)，樣品的ASFV抗體均為陰性。

3 小結(jié)與討論

雖然我國(guó)目前沒(méi)有ASF疫情，但從世界流行、傳播、分布的態(tài)勢(shì)來(lái)看，ASF 傳入我國(guó)的風(fēng)險(xiǎn)性在不斷加大。分析如下：一是引進(jìn)種豬，這也是ASF傳入的重大風(fēng)險(xiǎn)因素，病毒如果隨著引種進(jìn)入我國(guó)，一旦在豬群寄居，很快會(huì)在豬群蔓延、流行。二是中國(guó)同流行和散發(fā)非洲豬瘟各國(guó)頻繁的經(jīng)貿(mào)往來(lái)，將可能通過(guò)人員或產(chǎn)品將疫情帶入。三是令人堪憂的養(yǎng)豬現(xiàn)狀，國(guó)內(nèi)很多豬場(chǎng)規(guī)模小，散養(yǎng)密度高，飼養(yǎng)管理不規(guī)范，環(huán)境衛(wèi)生及生物安全不到位，這為非洲豬瘟的傳播創(chuàng)造了良好的條件。第四，目前尚沒(méi)有有效的疫苗和藥物用于ASF 控制，惟一的控制方式是確保豬群健康，杜絕外來(lái)病發(fā)生。

4 意義

通過(guò)分析近年來(lái)ASF在世界范圍內(nèi)的流行趨勢(shì)，該病從北方傳入四川省的風(fēng)險(xiǎn)較大。因此，本實(shí)驗(yàn)室加強(qiáng)了對(duì)四川省北部、中部地區(qū)的監(jiān)測(cè)。此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，一方面實(shí)時(shí)掌握四川省重點(diǎn)防范地區(qū)ASF的感染情況，防患于未然；另一方面，一旦四川省突發(fā)ASF，為“早、快、嚴(yán)、小”處置疫情提供科學(xué)依據(jù)和技術(shù)儲(chǔ)備，盡可能減小ASF對(duì)四川省養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)的危害。

參考文獻(xiàn)：

[1] MURPHY F A，GIBBS E P J，HORZINEK M A，et al. Asfarviridae and Iridoviridae[A].MURPHY F A，GIBBS E P J， HORZINEK M A，et al. Veterinary virology[M]. 3rd. San Diego：Academic Press，1999.293-300.

[2] 殷 震，劉景華.動(dòng)物病毒學(xué)[M].第二版.北京：科學(xué)出版社，1997.1197-1205.

[3] PENRIT H M L，THOMSON G R，BASTOS A S S. African swine fever[A].COETEZR J A W，TUSTIN R C. Infectious diseases of Livestock[M].Southern Africa：Oxford University Press，2005.1087-1119.

[4] OIE. Terrestrial Animal Health Code. Chapter 2.6.6. African Swine Fever[EB/OL]. http：//www.oie.int/eng/normes/Mcode/ en_chapitre_2.6.6.htm，2007.

[5] 鄧 飛，李 麗.阻斷ELISA法檢測(cè)非洲豬瘟抗體[J].四川畜牧獸醫(yī)，2016（6）：22-23.