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        四川省非洲豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果與分析

        2017-03-20 14:50:30李麗鄧飛裴超信張睿周莉媛邵靚
        湖北畜牧獸醫(yī) 2016年10期
        關(guān)鍵詞:非洲豬瘟四川省

        李麗+鄧飛+裴超信+張睿+周莉媛+邵靚

        摘要:非洲豬瘟(African swine fever,ASF)已在全球多個(gè)國(guó)家發(fā)生和流行,是我國(guó)重點(diǎn)防范的外來(lái)動(dòng)物疫病。加強(qiáng)監(jiān)測(cè)對(duì)該病的防范有重要意義。采用美國(guó)Kernel公司的非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)來(lái)源于四川省阿壩州、廣元、巴中、達(dá)州、廣安、成都、內(nèi)江、資陽(yáng)、遂寧和雅安等地的540份豬血清樣品進(jìn)行了檢測(cè),結(jié)果顯示均為ASFV抗體陰性。

        關(guān)鍵詞:四川?。环侵挢i瘟;抗體檢測(cè)

        中圖分類號(hào):S858.28 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1007-273X(2016)10-0010-03

        非洲豬瘟(African Swine Fever,ASF)又稱為非洲豬瘟疫、疣豬病,是由雙鏈DNA 病毒感染引起的豬的一種急性、高度傳染性疾病[1]。其臨床癥狀和病理變化與豬瘟相似,表現(xiàn)為發(fā)熱、皮膚發(fā)紺和淋巴結(jié)、腎、胃腸黏膜充血、出血,急性型死亡率高達(dá)100%[2]。該病1921年首先發(fā)現(xiàn)于非洲東部國(guó)家肯尼亞,然后一直存在于撒哈拉以南的中、南部及西部的非洲國(guó)家[3],據(jù)OIE統(tǒng)計(jì),截至2012年底,全球共有48個(gè)國(guó)家報(bào)道發(fā)生過(guò)非洲豬瘟疫情。由于該病危害嚴(yán)重,OIE將其列為A 類法定報(bào)告動(dòng)物疫病[4],我國(guó)將其列為一類動(dòng)物疫病。

        雖然目前我國(guó)尚無(wú)非洲豬瘟疫情,但由于該病具有高傳染性及高死亡率且缺乏有效疫苗防治,隨著經(jīng)濟(jì)全球化的發(fā)展,ASF對(duì)我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)具有潛在的高風(fēng)險(xiǎn)性。加之近年來(lái),該疫情在俄羅斯南部和北高加索地區(qū)繼續(xù)擴(kuò)散,我國(guó)與俄羅斯毗鄰,因此跨境傳播防控壓力更為巨大。四川省自2015年積極開(kāi)展實(shí)驗(yàn)室的血清學(xué)檢測(cè)工作,加強(qiáng)對(duì)該病的持續(xù)監(jiān)測(cè),鄧飛等曾對(duì)四川省北部及東北部的5個(gè)地級(jí)市豬血清進(jìn)行抗體檢測(cè),結(jié)果均為陰性[5]。本試驗(yàn)持續(xù)監(jiān)測(cè)上述5個(gè)地市的樣品并新增成都等四川中部及東部的5個(gè)地級(jí)市豬血清監(jiān)測(cè)?,F(xiàn)將其報(bào)道如下。

        1 材料與方法

        1.1 血清樣品

        血清樣本來(lái)源于四川省阿壩、廣元、巴中、達(dá)州、廣安的規(guī)模場(chǎng)及散養(yǎng)戶90份以及成都、內(nèi)江、資陽(yáng)、遂寧、雅安的規(guī)模場(chǎng)、散養(yǎng)戶及屠宰場(chǎng)450份,共計(jì)540份。

        1.2 檢測(cè)試劑

        美國(guó)Kernel公司的非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒,批號(hào):160118。

        1.3 檢測(cè)方法

        (1)使用前所有試劑恢復(fù)至室溫。

        (2)在ELISA反應(yīng)板上每孔加50 μL稀釋液,以50 μL/孔加入待檢樣品和陰陽(yáng)性對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照(E12、F12)和陰性對(duì)照(G12、H12)各設(shè)置兩孔,檢測(cè)樣品設(shè)置一孔,每板檢測(cè)樣品90份。

        (3)封膜,振蕩,37 ℃孵育60 min。

        (4)棄酶標(biāo)板中的液體于裝有NaOH的容器中,洗板機(jī)洗板4次,最后一次吸水紙上輕拍酶標(biāo)板。

        (5)每孔加100 μL稀釋好的酶標(biāo)結(jié)合物,封膜,37 ℃孵育30 min。

        (6)洗板5次,最后一次吸水紙上輕拍酶標(biāo)板。

        (7)每孔加100 μL底物,室溫避光孵育15 min。

        (8)每孔加100 μL終止液,振蕩混勻,酶標(biāo)儀450 nm讀取OD值。

        1.4 結(jié)果判定

        結(jié)果有效性確認(rèn):陰性對(duì)照(G12、H12)平均OD值/陽(yáng)性對(duì)照(E12、F12)平均OD值≥4為有效,本試驗(yàn)檢測(cè)的6個(gè)反應(yīng)板結(jié)果均有效。

        PI值計(jì)算:PI=1-(OD450 nm樣品值/OD450 nm陰性平均值)×100%

        結(jié)果判定:PI<40%,ASFV抗體陰性;PI≥40%,ASFV抗體陽(yáng)性;PI在40%~50%之間為可疑,建議重新檢測(cè)或以其他方法檢測(cè)。

        2 結(jié)果與分析

        檢測(cè)樣品原始OD450 nm值見(jiàn)表1至表6。由表1~6可見(jiàn),樣品的ASFV抗體均為陰性。

        3 小結(jié)與討論

        雖然我國(guó)目前沒(méi)有ASF疫情,但從世界流行、傳播、分布的態(tài)勢(shì)來(lái)看,ASF 傳入我國(guó)的風(fēng)險(xiǎn)性在不斷加大。分析如下:一是引進(jìn)種豬,這也是ASF傳入的重大風(fēng)險(xiǎn)因素,病毒如果隨著引種進(jìn)入我國(guó),一旦在豬群寄居,很快會(huì)在豬群蔓延、流行。二是中國(guó)同流行和散發(fā)非洲豬瘟各國(guó)頻繁的經(jīng)貿(mào)往來(lái),將可能通過(guò)人員或產(chǎn)品將疫情帶入。三是令人堪憂的養(yǎng)豬現(xiàn)狀,國(guó)內(nèi)很多豬場(chǎng)規(guī)模小,散養(yǎng)密度高,飼養(yǎng)管理不規(guī)范,環(huán)境衛(wèi)生及生物安全不到位,這為非洲豬瘟的傳播創(chuàng)造了良好的條件。第四,目前尚沒(méi)有有效的疫苗和藥物用于ASF 控制,惟一的控制方式是確保豬群健康,杜絕外來(lái)病發(fā)生。

        4 意義

        通過(guò)分析近年來(lái)ASF在世界范圍內(nèi)的流行趨勢(shì),該病從北方傳入四川省的風(fēng)險(xiǎn)較大。因此,本實(shí)驗(yàn)室加強(qiáng)了對(duì)四川省北部、中部地區(qū)的監(jiān)測(cè)。此項(xiàng)實(shí)驗(yàn),一方面實(shí)時(shí)掌握四川省重點(diǎn)防范地區(qū)ASF的感染情況,防患于未然;另一方面,一旦四川省突發(fā)ASF,為“早、快、嚴(yán)、小”處置疫情提供科學(xué)依據(jù)和技術(shù)儲(chǔ)備,盡可能減小ASF對(duì)四川省養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)的危害。

        參考文獻(xiàn):

        [1] MURPHY F A,GIBBS E P J,HORZINEK M A,et al. Asfarviridae and Iridoviridae[A].MURPHY F A,GIBBS E P J, HORZINEK M A,et al. Veterinary virology[M]. 3rd. San Diego:Academic Press,1999.293-300.

        [2] 殷 震,劉景華.動(dòng)物病毒學(xué)[M].第二版.北京:科學(xué)出版社,1997.1197-1205.

        [3] PENRIT H M L,THOMSON G R,BASTOS A S S. African swine fever[A].COETEZR J A W,TUSTIN R C. Infectious diseases of Livestock[M].Southern Africa:Oxford University Press,2005.1087-1119.

        [4] OIE. Terrestrial Animal Health Code. Chapter 2.6.6. African Swine Fever[EB/OL]. http://www.oie.int/eng/normes/Mcode/ en_chapitre_2.6.6.htm,2007.

        [5] 鄧 飛,李 麗.阻斷ELISA法檢測(cè)非洲豬瘟抗體[J].四川畜牧獸醫(yī),2016(6):22-23.

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