胡光華,徐 皓,陳 銳,李蘭蘭,彭秀麗(長春市食品藥品檢驗中心,吉林 長春 130000)
鹽酸米諾環(huán)素,又名鹽酸去甲基四環(huán)素,是半合成的四環(huán)素類衍生物抗生素,通過抑制敏感微生物的蛋白合成而產(chǎn)生抗菌效果,抗菌譜與四環(huán)素類藥物相似,但抗菌效果更強[1-2]。鹽酸米諾環(huán)素具有吸收迅速、完全、脂溶性高、半衰期長等優(yōu)點,臨床上主要用于痤瘡和牙周炎癥治療,能抑制大部分病原菌,具有抗菌和抗炎的雙重作用。鹽酸米諾環(huán)素緩釋片是鹽酸米諾環(huán)素與適當(dāng)?shù)妮o料羥丙基甲基纖維素制成的親水型骨架緩釋片。目前中國藥典采用高效液相色譜法測定鹽酸米諾環(huán)素的含量,但是對鹽酸米諾環(huán)素緩釋片的檢驗方法未見收載,采用液質(zhì)聯(lián)用的方法檢測鹽酸米諾環(huán)素緩釋片含量的文獻未見報道。因此,本作者建立液質(zhì)聯(lián)用方法對鹽酸米諾環(huán)素緩釋片進行含量測定。經(jīng)驗證使用本法操作簡便快速,靈敏度高,重現(xiàn)性好,可快速測定鹽酸米諾環(huán)素緩釋片的含量。
鹽酸米諾環(huán)素緩釋片(丹東醫(yī)創(chuàng)藥業(yè)有限責(zé)任公司,批號:191011,每片45 mg);米諾環(huán)素對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號:130514-200912,含量:88.05%);乙腈為色譜純,其余試劑為分析純,水為去離子水。
AB Sciex QTRAP? 4500液質(zhì)聯(lián)用儀(AB Sciex);XA-205電子天平(Mettler Toledo)。
色譜柱:Spherisorb C8柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流動相:0.2 mol/L醋酸銨-乙腈(80:20),流速為0.4 mL/min,進樣溫度為室溫,進樣方式為自動進樣。
質(zhì)譜部分:離子源為ESI離子源,正離子掃描,3.0 kV的電離電壓,電噴霧接口干燥氣(N2)流速為300 L/h,離子源溫度為150℃;錐孔電壓為30V,脫溶劑氣溫為130℃,定量分析離子:m/z 458(M-1+1,C23H27N3O7),441[(M-1+1)-OH,C23H26N3O6]。
對照品儲備液:取米諾環(huán)素對照品約50 mg,精密稱定,置100 mL容量瓶中,加80 mL去離子水溶解后稀釋至刻度,精密量取1 mL,置100 mL容量瓶中,定容,備用。
對照品溶液:取對照品儲備液1 mL,置于25 mL容量瓶中,加去離子水稀釋至刻度,即得。
供試品溶液:取鹽酸米諾環(huán)素緩釋片10片,研細,精密稱取適量(約相當(dāng)于米諾環(huán)素50 mg),加80 mL去離子水進行溶解,超聲處理(功率:250 W,頻率:60 kHz)30 min,定容至刻度;過濾,精密量取1 mL,置100 mL容量瓶中,稀釋至刻度;取1 mL,置于25 mL容量瓶中,定容,即得。
精密吸取對照品儲備液1、2、4、6、8、10 mL分別置100 mL容量瓶中,定容,加去離子水稀釋至刻度,共制得6個濃度梯度的系列對照品溶液,在上述質(zhì)譜條件下進行測定。以相應(yīng)的對照品溶液濃度對峰面積進行線性回歸,得回歸方程Y=26968X+80552×C,r=0.9998,線性50~500 ng/mL。
取同一批次鹽酸米諾環(huán)素緩釋片20片,研細,取細粉適量,按照供試品溶液的配制方法配制低中高三個濃度(相當(dāng)于米諾環(huán)素160 ng/mL、200 ng/mL、240 ng/mL),每個濃度平行配制5份溶液,按照上述色譜及質(zhì)譜條件重復(fù)進樣5次,記錄峰面積,并計算峰面積的RSD為1.20%,符合方法學(xué)要求。
精密量取同一份供試品溶液,在放置1 h、2 h、3 h、6 h、12 h、24 h的不同時間點分別進樣,記錄峰面積并計算峰面積的RSD為1.07%,說明米諾環(huán)素在水溶液中保存的峰面積幾乎沒有變化,供試品溶液的穩(wěn)定性較好。
精密稱定含米諾環(huán)素相同量的對照品和供試品,加水溶解制成200 ng/mL濃度的溶液,在供試品溶液中加入濃度含量為80%、100%、120%的對照品溶液,按上述色譜和質(zhì)譜條件進行實驗,各濃度含量分別測定3次,計算回收率,平均回收率為98.6%,RSD=0.65%。
將2.1中對照品溶液和供試液按上述質(zhì)譜條件進樣(進樣量5 μL),使用外標(biāo)法計算樣品的含量,結(jié)果見表1。
本研究對鹽酸米諾緩釋片進行研究,根據(jù)精確相對分子質(zhì)量、相關(guān)文獻以及對照品色譜保留時間及二級譜圖,得到對照品的質(zhì)譜參數(shù),建立鹽酸米諾環(huán)素緩釋片含量的快速檢測方法,平均用時為5 min,與相關(guān)文獻相比較可有效快速的檢測藥品含量,且還可用于藥品中其他成分的測定,通過圖譜分析可確定藥品中其他成分的含量,為鹽酸米諾環(huán)素緩釋片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立及評價提供研究依據(jù)。
表1 鹽酸米諾環(huán)素緩釋片含量測定結(jié)果(n=5)(%)
實驗中對色譜條件和質(zhì)譜條件都進行了優(yōu)化,對不同批次、不同濃度及不同溶解方式進行對比檢測,以實現(xiàn)色譜峰信息量穩(wěn)定作為指標(biāo),最終確定超聲處理(功率:250 W,頻率:60 kHz)30 min,藥液濃度為200 ng/mL為供試品的配制方法。因考慮到鹽酸米諾環(huán)素可在空氣及各種氧化劑中發(fā)生氧化還原反應(yīng),通過對各種溶劑進行對比考察,發(fā)現(xiàn)米諾環(huán)素在流動相中放置一定時間后藥液顏色發(fā)生改變,最終確定采用去離子水作為溶劑溶解藥品。對色譜條件進行考察,發(fā)現(xiàn)色譜柱Spherisorb C8柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)的分離效果較好,流動相0.2 mol/L醋酸銨-乙腈(80:20)的分離效果較好,柱溫和流速的微小差異造成的影響可忽略不計。
本研究發(fā)現(xiàn),采用HPLC-MS方法測定鹽酸米諾環(huán)素緩釋片含量,操作簡便快速,靈敏度高,重現(xiàn)性好,結(jié)果準(zhǔn)確可靠。