□ 馬淑青 王 丹 時(shí)振強(qiáng) 濰坊市疾病預(yù)防控制中心

赤霉素（Gibberellin）是一類(lèi)屬于雙萜類(lèi)化合物的植物內(nèi)源激素，也是一種廣譜性植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，其最突出的作用是加速細(xì)胞的分裂與伸長(zhǎng)。因赤霉素能夠促進(jìn)種子萌發(fā)、莖伸長(zhǎng)，提高坐果率，而被廣泛應(yīng)用于果蔬生長(zhǎng)、發(fā)育的各個(gè)階段。赤霉素屬于低毒農(nóng)藥，雖低毒，但畢竟是農(nóng)藥，多項(xiàng)研究證實(shí)短期內(nèi)大量攝入或者長(zhǎng)期少量攝入赤霉素會(huì)導(dǎo)致機(jī)體代謝失調(diào)，并誘發(fā)多種疾病，甚至致癌。例如：Troudi 等研究發(fā)現(xiàn)，赤霉素能刺激小鼠的甲狀腺、腎上腺、卵巢等內(nèi)分泌腺，改變其激素水平，進(jìn)而影響小鼠的生長(zhǎng)發(fā)育[1]；許春爽等研究發(fā)現(xiàn)赤霉素可導(dǎo)致人精子細(xì)胞的凋亡[2]；Erin 等研究發(fā)現(xiàn)赤霉素與腫瘤的形成有一定的關(guān)系[3]。

鑒于赤霉素對(duì)人類(lèi)健康的深遠(yuǎn)影響，日本、歐盟等國(guó)家和國(guó)際組織對(duì)食品中赤霉素制定了嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)，有的甚至已詳細(xì)到某個(gè)產(chǎn)品[4]。我國(guó)目前尚未出臺(tái)相應(yīng)的赤霉素使用限量標(biāo)準(zhǔn)。部分種植者為追求高產(chǎn)及利潤(rùn)，濫用赤霉素，使果實(shí)膨大并提前上市，這也使得一些果蔬中赤霉素殘留量較高，增加了人們的攝入概率。本文建立了用QuEChERS 結(jié)合Agilent1290—6460 檢測(cè)果蔬中赤霉素殘留的方法，并利用該法對(duì)濰坊市售果蔬中赤霉素殘留情況進(jìn)行了調(diào)查，以期獲得濰坊市售果蔬中赤霉素殘留的污染水平及其可能帶來(lái)的安全風(fēng)險(xiǎn)。

1 材料與方法

1.1 樣品來(lái)源

果蔬樣品從濰坊各縣市區(qū)的超市、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、集市和路邊攤位購(gòu)買(mǎi)獲得。根據(jù)本地居民的日常購(gòu)買(mǎi)情況，選擇居民消費(fèi)量較大的水果和蔬菜。共采集果蔬樣品568 份，其中水果272 份，蔬菜296 份。

1.2 儀器與試劑

UPLC—MS/MS（1290—6460）超 高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Agilent公 司）；KQ—250B 型 超 聲 波 清 洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；VORTEX GENIE2 型渦旋混勻器(美國(guó)Scientific 公司）；CR21N 型高速冷凍離心機(jī)（日本日立公司）；ARA520電子天平（奧豪斯國(guó)際貿(mào)易上海有限公司）。

赤霉素標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥99.0%）購(gòu)自德國(guó)Dr.Ehrenstorfer 公司；乙腈、甲醇（色譜純，美國(guó)Merck 公司）；乙酸（色譜純，美國(guó)Fisher 公司）；DisQuE 脫水試劑袋（AOAC 法）（Waters 公司）；QuchERS 分散固相萃取管（Waters 公司）；實(shí)驗(yàn)用水為Milli—Q 超純水。

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.025 g赤霉素標(biāo)準(zhǔn)品用乙腈溶解定容至50 mL，得500 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 分析條件

色譜條件：色譜柱為RRHD Eclipse Plus C18色 譜 柱（3.0 mm×100 mm，1.8 μm，美國(guó)Agilent 公司）；流動(dòng)相：A 為0.5% 甲酸水溶液，B 為乙腈；梯度洗脫：0 ～2.5 min，19%～90%B；2.5 ～4.5 min，90%B；4.5 ～6.0 min，90%～19%B；流速為0.2 mL/min，柱溫為40 ℃，進(jìn)樣量為2 μL。

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源（ESI—）；多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；鞘氣溫度為350 ℃，鞘氣流速為11 L/min，毛細(xì)管電壓為3 500 V，干燥氣溫度為325 ℃，干燥氣流速為11.0 L/min，噴嘴電壓為500 V，霧化氣壓力為40 psi。

1.4 樣品的前處理

前處理方法參考《2016 年國(guó)家食品污染物和有害因素風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)工作手冊(cè)》[5]。稱(chēng)取勻漿樣品10.0 g 于50 mL 塑料離心管中，加入10.0 mL含1%（V/V）乙酸的乙腈溶液，超聲提取2 min，加入脫水試劑（6 g 無(wú)水硫酸鎂和1.5 g 醋酸鈉）后渦旋1 min，10 000 r/min 離心3 min，取上清液2.0 mL 放入分散固相萃取管（25 mg C18和150 mg 無(wú)水硫酸鎂）中渦旋1 min，10 000 r/min 離心5 min，取上清液過(guò)0.22 μm 有機(jī)濾膜，上機(jī)。

2 結(jié)果與分析

2.1 赤霉素質(zhì)譜條件的確定

本文采用的是50 ng/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在EI—模式下，首先全掃描確定母離子，再分別對(duì)破碎電壓、碰撞能量和選擇離子等質(zhì)譜參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，優(yōu)化后得赤霉素的主要特征離子碎片分 別 為m/z 345.1、239.1、143.1，選擇基峰m/z 345.1 為母離子，子離子m/z 239.1、143.1 為兩個(gè)定性離子，子離子m/z 143.1 響應(yīng)最高，設(shè)為定量離子。子離子m/z 239.1 的碰撞能量為20 eV，子離子m/z 143.1 的碰撞能量為35 eV，破碎電壓均為70 V。在該條件下檢測(cè)赤霉素，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的MRM色譜圖如圖1 所示。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中赤霉素的MRM 色譜

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用含1%乙酸的乙腈溶液逐級(jí)稀釋成質(zhì)量濃度分別為2.0、5.0、10.0、50.0 ng/mL 和100.0 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。以定量離子的色譜峰面積（y）對(duì)赤霉素的質(zhì)量濃度（x，ng/mL）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程為：y=7.392x+7.587，相關(guān)系數(shù)r=0.998 4，線(xiàn)性范圍為2.0 ～100.0 ng/mL，在該濃度范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。按信噪比S/N=3，當(dāng)取樣量為10 g 時(shí)，樣品中赤霉素的檢出限為0.5 μg/kg，定量限為1.5 μg/kg。該法簡(jiǎn)單快捷、靈敏度高、重復(fù)性好，符合農(nóng)藥殘留分析的要求，可用于果蔬中赤霉素殘留的定性和定量檢測(cè)。

2.3 樣品的測(cè)定

用建立的方法對(duì)果蔬中赤霉素殘留含量進(jìn)行測(cè)定。作物本身會(huì)分泌微量赤霉素，檢測(cè)結(jié)果為內(nèi)源和外源的總和，所以殘留量低于2 μg/kg 的視為未檢出。最新的GB 2763—2019《食品中農(nóng)藥最大殘留限量》尚未對(duì)赤霉素進(jìn)行規(guī)定[6]，參考日本和歐盟的限量標(biāo)準(zhǔn)（0.2 mg/kg）對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)[4]。

本次調(diào)查共檢測(cè)果蔬樣品568份，結(jié)果見(jiàn)表1。由表1 可見(jiàn)，568 份樣品中有37 份樣品檢出赤霉素，檢出率為6.5%，檢出濃度范圍為0 ～132.7 μg/kg，均未超標(biāo)。蔬菜296 份樣品中檢出12 份，檢出率為4.1%，檢出樣品主要集中在瓜果與茄類(lèi)蔬菜中的番茄、黃瓜、冬瓜和豆類(lèi)蔬菜中的豆芽上，以豆芽中赤霉素殘留量最高，達(dá)132.7 μg/kg，這可能是因?yàn)椴宿r(nóng)為促進(jìn)豆子發(fā)芽、莖伸長(zhǎng)而過(guò)量使用赤霉素。272 份水果中檢出25 份，檢出率為9.2%，與蔬菜相比，赤霉素的殘留情況在水果中更為普遍，漿果類(lèi)中的葡萄、草莓、藍(lán)莓，瓜果類(lèi)中的西瓜、甜瓜，橘果類(lèi)的柑橘，核果類(lèi)的櫻桃、棗，仁果類(lèi)的圣女果等均有檢出赤霉素殘留，分析原因應(yīng)該是種植者們?yōu)榱颂岣弋a(chǎn)品的坐果率和產(chǎn)量而過(guò)量施用了赤霉素，該調(diào)查結(jié)果與其他地市的檢測(cè)結(jié)果基本吻合[7]。

表1 蔬菜和水果中赤霉素檢出情況匯總

3 結(jié)論

本文利用QuEChERS 結(jié)合UPLC—MS/MS 方法提取、凈化、檢測(cè)果蔬中赤霉素殘留，方法簡(jiǎn)單、快捷、靈敏度高、重復(fù)性好，符合農(nóng)藥殘留分析的要求，可用于果蔬中赤霉素殘留的定性和定量檢測(cè)。QuEChERS 是一種快速、簡(jiǎn)單、安全的前處理技術(shù)；質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)靈敏度高，選擇性強(qiáng)，是國(guó)際公認(rèn)具有法律效力的標(biāo)準(zhǔn)方法；QuEChERS 結(jié)合UPLC—MS/MS 必將是未來(lái)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑分析的主要手段。

本次調(diào)查的樣本量雖小，檢出的樣品也均未超標(biāo)，但從檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，濰坊市售果蔬中存在赤霉素殘留現(xiàn)象，尤其在水果、瓜類(lèi)與茄果類(lèi)蔬菜和豆芽中是比較普遍的，這應(yīng)該是種植者們?yōu)榱舜龠M(jìn)果蔬種子的萌發(fā)、提高坐果率、增加產(chǎn)量而過(guò)量施用赤霉素。長(zhǎng)期食用“人為調(diào)控”的果蔬對(duì)身體的影響有待進(jìn)一步評(píng)估，該結(jié)果應(yīng)引起相關(guān)部門(mén)的重視，國(guó)家也有必要出臺(tái)相關(guān)的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)范赤霉素的合理使用，最大限度的降低赤霉素對(duì)人類(lèi)健康的危害。