劉學良 汪永明 石春蘭 韓達斌 陳鵬 俞雅瓊 陳麗 劉海青
摘要:目的建立百花定喘片的薄層色譜鑒別方法。方法采用薄層色譜法,對百花定喘片中的麻黃、五味子、牡丹皮、黃芩進行定性鑒別。結果在薄層色譜中,4味藥材均能得到很好的鑒別。結論該法專屬性強,重復性好,且操作簡單,可用于百花定喘片的質量控制。
關鍵詞: 百花定喘片;薄層色譜;鑒別
【中圖分類號】R97 ?【文獻標識碼】A ?【文章編號】1673-9026(2021)14--01
百花定喘方為中醫(yī)驗方,收載于《衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑第一冊[1]。
由麻黃、五味子、牡丹皮等17味藥味組方而成,用于治療新久咳嗽,喘咳痰多,勞嗽咳血。該制劑質量標準中僅有性狀和片劑的常規(guī)檢查項,無任何鑒別和含量測定項。為了提高該制劑的質量控制水平,有效控制該藥品質量,參考文獻[2~6 ] ,對制劑中的4味藥材的薄層鑒別方法進行研究,建立了其薄層鑒別方法,可用于該制劑的質量控制。
1 儀器與試藥
BT224S 型電子天平( 德國賽多利斯儀器有限公司);KQ5200B 型超聲機( 昆山超聲儀器有限公司);CAMA-GREPROSTAR3型薄層數(shù)碼成像系統(tǒng)( 瑞士);TDL-5-A 型臺式離心機(上海安亭科學儀器廠)。丹皮酚對照品( 批號:110708-201407),鹽酸麻黃堿( 批號:171241-201007),五味子對照藥材(批號:120922-201610)五味子甲素( 批號:110764-20100),五味子乙素( 批號:110765-201311),黃芩苷對照品( 批號:110715-201318),,均購于中國食品藥品檢定研究院;百花定喘片(天津中新藥業(yè)集團股份有限公司隆順榕制藥廠,批號:CD36031、CE36033、DD36035;廣東萬方制藥有限公司,批號:141201、150201、150202);薄層層析硅膠G 板( 青島海洋化工廠分廠);水為超純水;其余試劑均為分析純。
2 方法與結果
2.1麻黃
取本品20片,研細,加濃氨試液1ml,加氯仿25ml,加熱回流1小時,濾過,濾液蒸干,殘渣加氯仿1ml使溶解,作為供試品溶液。取鹽酸麻黃堿對照品, 加甲醇制成每1ml含2mg的溶液,作為對照品溶液。另取缺麻黃的陰性樣品,同法制成缺麻黃的陰性對照溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2020年版四部通則 0502)試驗,吸取上述溶液各5μl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以氯仿-甲醇-濃氨試液(40:10:1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以茚三酮試液,105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點,陰性對照無干擾。結果見圖1。
1、鹽酸麻黃堿對照品 ? 2、3、4、6、7、8百花定喘片樣品(批號CD36031、CE36033、DD36035、141201、150201、150202) ?5、麻黃陰性對照
2.2五味子
取本品20片,研細,加氯仿25ml,加熱回流1小時,濾過,濾液蒸干,殘渣加氯仿1ml使溶解,作為供試品溶液。取五味子對照藥材0.5g,同法制成對照藥材溶液。取五味子甲素、五味子乙素對照品, 加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對照品溶液。另取缺五味子的陰性樣品,同法制成缺五味子的陰性對照溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2020年版四部通則 0502)試驗,吸取上述溶液各5μl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以石油醚(30℃~60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上層溶液為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點,陰性對照無干擾。結果見圖2。
1-6、百花定喘片樣品(批號CD36031、CE36033、DD36035、141201、150201、150202)7、五味子陰性對照 ?8、五味子對照藥材 ?8、五味子甲素對照品 ?9、五味子乙素對照品
2.3 ?牡丹皮
取本品20片,研細,加乙醇25ml,超聲處理30分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加30ml乙醚使溶解,濾過,濾液蒸干,殘渣加丙酮1ml使溶解,作為供試品溶液。取丹皮酚對照品,加丙酮制成每1ml含5mg的溶液,作為對照品溶液。另取缺牡丹皮的陰性樣品,同法制成缺牡丹皮的陰性對照溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2020年版四部通則 0502)試驗,吸取上述溶液各5μl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以甲苯為展開劑,展開,取出,晾干,噴以鹽酸酸性5%的三氯化鐵乙醇溶液,105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點,陰性對照無干擾。結果見圖3。
1、牡丹皮陰性對照 ? 2、丹皮酚對照品3-8、百花定喘片樣品(批號CD36031、CE36033、DD36035、141201、150201、150202)
2.4 黃芩
取本品20片,研細,加甲醇25ml,超聲處理15分鐘,濾過,濾液水浴蒸干,殘渣加水10ml攪拌使溶解,加稀鹽酸調pH值至2,離心,收集沉淀,加水5ml水充分混勻,離心,收集沉淀,水浴揮干殘留液體,殘渣加甲醇5ml使溶解,作為供試品溶液。取黃芩苷對照品, 加甲醇制成每1ml含2mg的溶液,作為對照品溶液。另取缺黃芩的陰性樣品,同法制成缺黃芩的陰性對照溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2020年版四部通則 0502)試驗,吸取上述溶液各5μl(百花定喘丸供試品溶液8μl),分別點于1%氫氧化鈉制備的硅膠G薄層板上,以醋酸乙酯-甲酸-水(8:1:1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以5%三氯化鐵乙醇試液,105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點,陰性對照無干擾。結果見圖4。
1-6、百花定喘片樣品(批號CD36031、CE36033、DD36035、141201、150201、150202)7、8、黃芩苷對照品 ? 9、黃芩陰性對照
3 ?結果與討論
按上述建立方法分別對2家生產企業(yè)的6批次樣品進行牡丹皮、麻黃、五味子、黃芩4味藥材的TLC分析測定,6批次百花定喘片均檢出相應斑點。綜合比較,發(fā)現(xiàn)同一廠家不同批號的樣品差異不大,不同企業(yè)之間的樣品存在斑點大小及顏色深淺不一或微弱檢出的問題,說明企業(yè)對原料藥材質量把控不嚴。
經過多次試驗,發(fā)現(xiàn)牡丹皮、黃芩鑒別項中提取相應的對照藥材溶液點樣后,色譜圖中只有一個主斑點,為其特征成分丹皮酚、黃芩苷,而麻黃、五味子鑒別項中提取相應的對照藥材溶液點樣后,對照藥材中的部分斑點與樣品不能全部對應,所以百花定喘片中4味藥材的薄層色譜鑒別僅以其相應的特征成分為對照進行鑒別,方法簡單,陰性對照無干擾,紫外光下斑點清晰,結果較好。曾對制劑中的其他藥味采用不同的提取方法和展開劑、顯色劑進行薄層色譜鑒別,其陰性對照干擾較大,試驗未獲成功。
建立的百花定喘片處方中麻黃等4味藥材的薄層鑒別方法簡單,重復性好,專屬性強,斑點清晰,能提高質量標準對藥材的可控度,保證生產企業(yè)對藥材投料,增強了現(xiàn)行標準藥品有效性的控制,可用于百花定喘片的質量控制。
參考文獻:
[1] 衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑:第十三冊[S].1995
[2] 陳阿麗,楊永霞,梁生旺,等.百花定喘片中藥材的鑒別及其黃芩苷、橙皮苷的測定[J]. 華西藥學雜志,2014, 29(3) ∶318-320.
[3] 侯小濤, 李耀華, 盧小芳.復方百部止咳沖劑中黃芩和陳皮的鑒別及黃芩苷的含量測定[J]. 華西藥學雜志,2005, 20(2):165-167
[4] 姚琳,孫妍,譚思思,等.瓜桔止嗽丸薄層鑒別及桔梗皂苷D 的含量測定
[5] 雷成康,郭玲. 麻黃止嗽膠囊質量標準的建立[J].中國藥師,2016,19(4):681-684.
[6] 許廣華,王虎,李小偉,等.芪精愈消膠囊薄層鑒別及含量測定研究[J].安徽醫(yī)藥,2016,20(4):660-663.
基金項目:青海省基礎研究項目(編號2020-ZJ747)
作者簡介:劉學良(1980—),男,副主任藥師,主要從事藥品審評工作。