張傳師， 雍 康， 王方國， 羅正中， 沈留紅， 曹隨忠

(1.重慶三峽職業(yè)學(xué)院動物科技系， 重慶萬州404155 ； 2.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院， 四川成都611130)

奶牛乳房炎主要分為臨床型和隱性型，其中隱性乳房炎的發(fā)病率遠遠高于臨床型乳房炎[1]。造成奶牛乳腺炎中臨床常見的菌屬有：鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和支原體等[2]。當(dāng)奶牛患乳房炎時，會導(dǎo)致奶牛泌乳能力降低、牛奶體細胞數(shù)上升，造成牛奶品質(zhì)下降，對奶牛業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失[3]。

美佑壯的主要成分是博落回提取物，博落回〔Macleaya cordata(Wild)R.Br.〕為罌粟科(Paperveraceae)博落回屬植物，多年生高大草本，主要生長于丘陵或低山林的灌叢或草叢中，分布在我國的貴州、廣西、廣東、福建等南部省份，少量分布在日本中部[4]。博落回含有異喹啉類生物堿，約為干重的1%，已分離鑒定的成分有10余種，主要為血根堿(Sanguinarine)和白屈菜紅堿(Chelerythrine)[5-6]。有研究表明，博落回提取物對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等有抗菌的作用[7]，還有殺蟲、改善肝功能、增強免疫力、抗炎和抗腫瘤等作用[8-9]。由于博落回活性有效成分是天然物質(zhì)，使用后易降解無殘留，在動物養(yǎng)殖上具有良好的保健和生產(chǎn)作用[9-10]。博落回注射液對仔豬的白痢、黃痢有較好的治療效果，其注射液被載入2003年版《獸藥質(zhì)量標準》[11]。Wang等[12]對博落回安全性的試驗結(jié)果表明，博落回提取物對奶牛的體況評分、產(chǎn)奶量和乳成分無顯著影響。本試驗的目的是在患有隱性乳房炎的奶牛日糧中添加美佑壯，評價其對奶牛隱性乳房炎和血清生化指標的影響。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 全自動獸用血液生化分析儀(型號SMT-12V，成都斯馬特科技有限公司)；檢測試劑板(成都斯馬特科技有限公司)；離心機(型號TD-4Z臺式低速離心機)。美佑壯(博落回提取物)由湖南美可達生物資源有限公司(批號:170303；規(guī)格100 g：0.375 g)惠贈。蘭州隱性乳房炎診斷液(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所藥廠)。

1.2 試驗方法 試驗?zāi)膛碜运拇骋?guī)模化奶牛養(yǎng)殖場。采用加利福尼亞州乳房炎試驗(California mastitis test，CMT)隨機篩選出患有隱性乳房炎的奶牛。檢測方法：蘭州隱性乳房炎診斷液與蒸餾水1∶3稀釋(現(xiàn)配現(xiàn)用)。待檢測乳區(qū)棄去前3把奶，然后將乳樣擠在檢測杯，棄去多余乳樣，檢測杯內(nèi)約留2 mL乳樣，然后加入2 mL稀釋液，做水平同心圓搖動，搖動10～30 s，使乳樣與稀釋液充分混合。

在檢測出來患有隱性乳房炎的奶牛日糧中添加美佑壯，添加劑量為10 g/(d·頭)，添加周期為14 d。飼喂0 d、7 d、14 d三組之間相互比較。

1.3 樣品采集 試驗牛只分別在飼喂美佑壯0 d、7 d和14 d經(jīng)尾靜脈采血5 mL，室溫靜置30 min，3 000 r/min離心5 min收集血清，-20 ℃冷凍保存待檢。

1.4 測定指標與方法

1.4.1 隱性乳房炎的檢測及評分 將篩選出的患隱性奶牛乳房炎39頭奶牛，測量其在飼喂0 d、7 d、14 d乳汁中體細胞數(shù)。判定標準見表1。隱乳檢查結(jié)果采用計分法統(tǒng)計，陰性(-)為0分，弱陽性(+)為1分，陽性(++)為2分，強陽性(+++)為3分。CMT分值與乳區(qū)感染水平呈正比關(guān)系。

1.4.2 血清生化指標測定 使用全自動獸用血液生化儀檢測3個時間段血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、總膽紅素(TB)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、淀粉酶(AMY)、尿素(UREA)、肌酐(CREA)、鈣(Ca)、無機磷(PHOS)和血糖(GLU)的水平。

1.5 數(shù)據(jù)分析 血清生化指標采用SPSS 2.3.0軟件進行單因素方差分析，以P<0.05(差異顯著)、P>0.05(差異不顯著)作為差異顯著性的判定標準，試驗結(jié)果用平均值±標準差表示。

2 結(jié)果

2.1 飼喂美佑壯對隱性乳房炎的影響 通過CMT篩選的用于治療的隱性乳房炎奶牛共計39頭，根據(jù)試驗前、后奶牛隱性乳房炎的計分差判定療效，飼喂美佑壯后有5頭奶牛計分為負數(shù)，表示隱性乳房炎等級增加，占比12.8%；有13頭奶牛試驗前、后隱性乳房炎計分沒有變化(無療效)，占比33.3%；有9頭分數(shù)減低的等級為1，占比23.0%；有9頭分數(shù)減低的等級為2，占比23.0%；3頭奶牛分數(shù)減低的等級為3，占比7.7%。試驗后共計有21頭奶牛隱乳等級下降，即有療效的占比53.85%，而其中有8頭奶牛等級降低為0(即痊愈)，占比20.51%。結(jié)果表明美佑壯有較好療效。

2.2 飼喂美佑壯對奶牛血清生化指標的結(jié)果 由表2可知，添加美佑壯飼喂7 d和飼喂前相比較，ALT、AST、ALP、LDH、CK、TB、TP、ALB、AMY、CREA、Ca、GLU的含量差異不顯著(P>0.05)，UREA差異顯著(P<0.05)。添加美佑壯飼喂14 d和飼喂前相比較，ALT、AST、ALP、LDH、CK、TB、TP、ALB、AMY、UREA、CREA、Ca、PHOS、GLU差異均不顯著(P>0.05)。

表2 美佑壯對奶牛血清生化指標的影響Table 2 Effects of Meiyouzhuang to serum biochemical indcators in dairy cows

3 討論

3.1 美佑壯對乳汁體細胞數(shù)的影響 乳汁中的體細胞數(shù)和乳房炎密切相關(guān)。當(dāng)奶牛患乳房炎時，其乳汁中的體細胞數(shù)會顯著增加，故體細胞數(shù)可作為奶牛乳房炎的指示物[3]。通過在患有隱性乳房炎的奶牛日常飼料中添加美佑壯飼喂14 d，測量飼喂0 d和飼喂后隱性乳房炎的等級，共有53.85%的隱性乳房炎病例的等級降低，對隱性乳房炎的治愈率為20.5%，表明美佑壯對奶牛隱性乳房炎有明顯的治療效果，且能有效降低隱性奶乳房炎奶牛泌乳期時乳汁中的體細胞數(shù)。

3.2 美佑壯對血清生化指標的影響 機體血清生化指標能間接反映畜禽生理健康狀況血清生化指標中，ALT、AST指標可反應(yīng)肝細胞是否病變或壞死。ALT主要分布在肝臟，其次是骨骼肌、腎臟、心肌等組織中，AST主要分布在心肌，其次在肝臟、骨骼肌和腎臟組織中，當(dāng)這些組織細胞受損時，細胞膜的通透性增加，胞漿中的酶釋放進入血液，導(dǎo)致血清酶活性升高[13]。血漿堿性磷酸酶(ALP)在機體代謝過程中起著非常重要的作用，它能催化水解磷酸單酯、磷酸核苷以及6-磷酸糖等類似化合物，主要來自肝細胞和毛細膽管的微絨毛，當(dāng)膽汁排出不暢，毛細膽管內(nèi)壓升高時，可誘發(fā)產(chǎn)生大量ALP[14]。藥物的轉(zhuǎn)化部位主要在肝臟，因此當(dāng)機體出現(xiàn)藥物中毒時，多表現(xiàn)為肝臟的病理變化。本試驗中飼喂美佑壯7 d、14 d血清ALT、AST、ALP活性與飼喂0 d比較差異均不顯著。

肝臟是蛋白質(zhì)代謝的主要的器官，許多蛋白質(zhì)如白蛋白、糖蛋白、凝血因子、纖溶因子及各種轉(zhuǎn)運蛋白等都由肝細胞合成。在肝臟疾病時，可表現(xiàn)出血液中蛋白質(zhì)質(zhì)和量的改變。TP、ALB含量在一定程度上可反映機體蛋白質(zhì)的合成與代謝狀況[15]。美佑壯飼喂7 d、飼喂14 d和飼喂0 d比較TP、ALB含量，差異均不顯著。

血清UREA和CREA是反映腎小球的濾過功能的較好指標。本試驗中，UREA的含量在飼喂7 d以后含量降低，且差異顯著，14 d以后和飼喂0 d相比有降低，但差異不顯著。UREA可以反映飼料中蛋白質(zhì)利用情況和氨基酸的平衡情況[16]，提示美佑壯可以降低血清中尿素的含量，促進蛋白質(zhì)的吸收和利用。CREA在飼喂7 d和飼喂14 d以后和飼喂0 d相比，無顯著差異。結(jié)果表明，美佑壯對腎臟功能無不良影響。

CK是一種能量轉(zhuǎn)換酶催化三磷酸腺苷與二磷酸腺苷的相互轉(zhuǎn)換，與細胞內(nèi)能量運轉(zhuǎn)肌肉收縮、三磷酸腺苷再生有直接的關(guān)系，可作為診斷肌肉萎縮、心肌梗死及腸梗阻的指標。本試驗飼喂以后，CK活性略有升高，但差異不顯著，表明日糧中添加美佑壯對奶牛心臟、肝臟等臟器健康無不良影響。AMY主要來自胰腺和唾液腺，一般多考慮胰腺的問題。本試驗中，飼喂7 d和飼喂14 d以后AMY活性都比飼喂0 d降低，但差異不顯著，說明美佑壯對胰腺的消化功能無實質(zhì)性的影響。

美佑壯添加前、后對血清LDH活性無顯著影響，與Zhao等[17]的研究結(jié)果一致。曾建國等[18]博落回提取物對大鼠的毒性研究發(fā)現(xiàn)，試驗組對大鼠體重?zé)o不良影響，血清生化指標和陰性對照組比較無顯著差異。

本試驗結(jié)果表明，在患有隱性乳房炎的奶牛在日糧中添加美佑壯，可以有效降低奶牛乳汁中的體細胞數(shù)，對患隱性乳房炎的奶牛有較好的治療效果，而對奶牛血清生化指標無不良影響。