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        甲狀腺激素免疫學(xué)檢測研究的新進(jìn)展

        2021-01-06 14:19:31肖立嬌天津市北辰醫(yī)院天津300400
        首都食品與醫(yī)藥 2021年19期
        關(guān)鍵詞:精密度抗原靈敏度

        肖立嬌(天津市北辰醫(yī)院,天津 300400)

        1 概述

        RIA技術(shù)的發(fā)展主要分為五代,第一代為Yalow、Berson創(chuàng)建,主要應(yīng)用了競爭抑制免疫反應(yīng)原理,使醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)史進(jìn)入了新紀(jì)元;第二代的主要標(biāo)志為游離標(biāo)記抗原分離技術(shù)、抗原-抗體復(fù)合物;第三代的主要標(biāo)志為半抗原制備抗體技術(shù);第四代的主要標(biāo)志為單克隆技術(shù)、固相載體材料;第五代的主要標(biāo)志為抗體固相化,為全自動分析打下了基礎(chǔ)[1]。此外,以RIA理論為基礎(chǔ),還陸續(xù)出現(xiàn)了電化學(xué)發(fā)光免疫法(ECLIA)、酶聯(lián)免疫分析法(EIA)等檢測分析技術(shù),不僅提高了檢測靈敏度、特異性,且制備簡易、無污染、有效期長、自動化程度高,在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用[2]。

        2 免疫學(xué)檢測方法分析

        2.1 RIA技術(shù) RIA技術(shù)為1959年由Yalow等人建立,成為臨床檢驗(yàn)及定量分析的革命性技術(shù),為生物醫(yī)學(xué)發(fā)展做出了重要貢獻(xiàn)。RIA主要通過對抗原或抗體應(yīng)用放射性核素標(biāo)記,并使其與待測抗原或抗體結(jié)合,檢測其復(fù)合物。目前,國內(nèi)部分實(shí)驗(yàn)室仍應(yīng)用RIA試劑盒進(jìn)行游離三碘甲狀腺原氨酸(FT3)、游離甲狀腺素(FT4)、促甲狀腺激素(TSH)等指標(biāo)測定[3]。該檢測方法不僅靈敏度、特異性高,且精密度好,對多種微量蛋白、激素、腫瘤標(biāo)志物均能進(jìn)行準(zhǔn)確檢測[4-5]。同時,由于其設(shè)備要求不高、操作簡單、成本低廉,因此,它是基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)用最多的超微量物質(zhì)檢測方法,也是部分激素檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”。但該檢測方法也存在一定不足,主要表現(xiàn)為自動化程度低、試劑盒不易儲存、放射性污染等,因此,該技術(shù)也逐漸被其他新檢測技術(shù)所取代[6]。

        2.2 EIA技術(shù) EIA技術(shù)最早出現(xiàn)于1966年,在酶的高效催化作用下,促使抗原和抗體特異性免疫反應(yīng),并使用特定的酶標(biāo)記,形成可用于示蹤的免疫酶,通過觀察其顯色程度,對待測物進(jìn)行分析。與RIA技術(shù)相比,EIA技術(shù)不僅設(shè)備簡單,操作安全,同時也克服了其放射性污染的問題。但該技術(shù)測量范圍窄、酶穩(wěn)定性不足、不易定量分析、靈敏度偏低,因此限制了其臨床應(yīng)用。直到1971年,有學(xué)者對EIA技術(shù)進(jìn)行了改進(jìn),使用酶代替核素標(biāo)記,即酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA),該技術(shù)的特點(diǎn)在于操作簡單、穩(wěn)定性及安全性好、靈敏度及特異度高、自動化程度高[7]。有研究利用ELISA法進(jìn)行抗甲狀腺過氧化物酶抗體的定量分析,結(jié)果顯示靈敏度、特異度較高,適合基層實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用[8]。也有學(xué)者對比了化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA)與ELISA在檢測促甲狀腺素受體抗體方面的價值,結(jié)果并無明顯差異,但認(rèn)為與ELISA相比,CLIA的重復(fù)性更好,檢測速度更快,自動化程度更高,且檢測范圍較寬[9]。ELISA雖然設(shè)備要求不高,成本低廉,但操作相對較為繁瑣,自動化程度低于CLIA。

        2.3 CLIA技術(shù) CLIA技術(shù)最早出現(xiàn)于1977年,是基于RIA原理形成的檢測技術(shù),將高特異性免疫反應(yīng)以及高靈敏化學(xué)發(fā)光有機(jī)結(jié)合。早期CLIA的檢測特異度與RIA相當(dāng),但靈敏度偏低,主要是由于光信號持續(xù)時間限制,無法滿足檢測需求。直至90年代,發(fā)光穩(wěn)定劑的應(yīng)用,使發(fā)光信號持續(xù)時間延長,可達(dá)到20-30min,使其臨床應(yīng)用價值明顯提高。1990年,電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)系統(tǒng)建立,使其正式成為新一代標(biāo)記免疫測定技術(shù)。有研究對比了ECLIA、ELISA對TSH 的檢測結(jié)果,結(jié)果顯示兩者檢測的結(jié)果高度相關(guān),但與ELISA相比,ECLIA的準(zhǔn)確度、精密度、線性范圍更佳。有研究分別應(yīng)用CLIA、RIA檢測甲狀腺球蛋白含量,結(jié)果顯示與RIA相比,CLIA的特異度、靈敏度、符合率更高,診斷價值明顯高于RIA[10]。同時,CLIA技術(shù)還避免了RIA的放射性污染問題,且試劑有效期更長,是目前超微量檢測的主要方法。

        除此之外,CLIA可應(yīng)用智能化操作程序,具有操作靈活、隨到隨檢、自動化程度高等特點(diǎn),使檢測效果明顯提高。以往有研究在不同孕期、非孕期女性血清甲狀腺激素水平檢測中應(yīng)用了CLIA技術(shù),結(jié)果顯示不同孕期、非孕期女性差異明顯,提示其可用于孕期甲狀腺疾病的早期篩查及診斷,對改善母嬰結(jié)局具有積極意義[11]。

        2.4 化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析(CLEIA) CLEIA也是一種酶免疫分析法,其反應(yīng)底物為發(fā)光劑,操作方法基本與EIA相同。在發(fā)光系統(tǒng)中,應(yīng)用了螢火蟲等熒光素,使發(fā)光信號明顯增強(qiáng),且能夠在一定時間內(nèi)維持穩(wěn)定,使檢測的靈敏度、準(zhǔn)確性均明顯提高。同時,該技術(shù)與同位素標(biāo)記技術(shù)相似,但可能獲得更佳的檢測結(jié)果,因此,在部分實(shí)驗(yàn)室中已經(jīng)逐步替代了RIA[12-13]。有學(xué)者對甲狀腺功能亢進(jìn)(甲亢)患者應(yīng)用了CLEIA法檢測,并與健康人群對比,結(jié)果顯示甲亢患者的TT3、TT4、TSH 水平均明顯高于健康人群,可用于判斷甲亢病情[14]。

        2.5 其他檢測技術(shù) 除以上檢測技術(shù)外,時間分辨熒光免疫測定法(TRFIA)、ECLIA等也在臨床上得到較多應(yīng)用,其中,TRFIA是一種特殊分析技術(shù),充分利用了熒光波長、激發(fā)波長的差異,提高了檢測的靈敏性[15]。有學(xué)者認(rèn)為,TRFIA是現(xiàn)階段最靈敏的微量檢測技術(shù),具有廣泛的應(yīng)用前景[16]。而ECLIA為新一代免疫標(biāo)記技術(shù),綜合了免疫分析、磁微粒技術(shù)、生物素-親和素、電化學(xué)發(fā)光等技術(shù),具有精密度高、回收率高、快速穩(wěn)定等特點(diǎn),更適合用于現(xiàn)代醫(yī)院的臨床檢測。

        3 結(jié)束語

        目前可用于甲狀腺激素檢測的免疫學(xué)檢測技術(shù)較多,從早期的RIA技術(shù)、EIA技術(shù)、CLIA技術(shù),到CLEIA、TRFIA、ECLIA等新型檢測技術(shù),其檢測靈敏度、特異度明顯提高,且自動化程度越來越高,在回收率、精密度、線性范圍方面也有顯著進(jìn)步。從整體上看,CLIA、ECLIA仍是目前檢測甲狀腺激素的較為理想的方法,值得推廣。

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