河南省駐馬店市中心血站（463000）孫四力

輸血現(xiàn)階段已成為了臨床中應(yīng)用較為廣泛的治療手段之一，其作用越來越突出，而對于血液工作者來講，保證臨床輸血安全則是工作重點[1]。有臨床研究發(fā)現(xiàn)，病毒“窗口期”較長是導(dǎo)致輸血感染的主要原因[2]；所以讓窗口期縮短，讓病毒檢出率提高就成為了現(xiàn)階段需要及時解決的問題。在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)逐漸發(fā)展和進步的過程中，核酸檢測作為新型的檢測手段之一，開始逐漸應(yīng)用于臨床檢測工作中，核酸檢測法不但能讓病毒檢測的窗口期明顯縮短，而且還能讓血液傳播病原體殘余風(fēng)險顯著降低，在對隱匿性HBV病毒感染進行檢測時，核酸檢測法的作用非常重要[3]。本研究主要分析了無償獻血血液標本核酸檢測法HBV病毒篩查對臨床輸血安全的影響，現(xiàn)作如下分析。

1 一般資料與方法

1.1 一般資料 選取某站2019年1月～7月采集的1500份無償獻血血液標本，納入標準：簽署知情同意書；脈搏和血壓正常，不存在嚴重疾??；男性≥50kg，女性≥45kg。排除標準：淋巴結(jié)腫大；皮膚感染；傳染性疾病。全部1500份無償獻血血液標本中，848例男性，652例女性；其年齡為23～39歲，平均為（29.4±3.2）歲；其體質(zhì)量指數(shù)為19.1～25.3kg/m2，平均為（22.3±1.4）kg/m2。采用丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）化學(xué)法和HBs-Ag快速試紙法初篩合格，每一位無償獻血者均留取血液標本2管，分別采用酶聯(lián)免疫法和核酸檢測法對HBV病毒進行篩查。

1.2 方法 （1）儀器、試劑：選擇上海浩源生物科技有限公司的全自動核素監(jiān)測儀，瑞士FAME全自動儀器（酶聯(lián)免疫法檢測儀）；上海浩源生物科技有限公司的HBV核酸提取試劑和檢測試劑；英科新創(chuàng)生物科技有限公司的HbsAg檢測試劑。（2）核酸檢測法：①初檢：選擇醫(yī)療專用試劑對無償獻血血液標本進行核酸檢測單人份初檢；根據(jù)核酸檢測法的相關(guān)要求在分析擴增產(chǎn)物區(qū)、試劑制備區(qū)和標本制備區(qū)進行試驗，試驗時應(yīng)對相關(guān)污染事件進行嚴格控制。在制備好24h內(nèi)，嚴格遵循試劑說明書開展HBV-PCR熒光定量檢測，進行PCR加樣、擴增、試劑準備和樣品準備等。PCR反應(yīng)程序的具體設(shè)置為：溫度設(shè)置為94℃，持續(xù)時間為3分鐘，溫度為50℃，時間為2分鐘，延伸65℃，時間為35秒，退火50℃，時間為10秒；變性94℃，時間為10秒，循環(huán)擴增45次，在完成熒光檢測后，進行64℃循環(huán)共40個，檢測通道為550nm、530nm。②追蹤監(jiān)測和復(fù)檢：如果標本為酶聯(lián)免疫法（-）、核酸檢測法（+），則應(yīng)接受復(fù)檢，復(fù)檢標本為新鮮全血分離冰凍血漿。有相同復(fù)檢結(jié)果的酶聯(lián)免疫法（-）、核酸檢測法（+）標本應(yīng)進行追蹤檢測；再次采集血液標本開展酶聯(lián)免疫法檢測，選擇專用試劑開展核酸檢測法定量檢測，并開展HBsAg確診檢測，按照上述結(jié)果對免疫學(xué)檢測窗口期進行判斷。（3）酶聯(lián)免疫法檢測：在開展HBsGa檢測時，在獻血標本中分別加入2種酶聯(lián)免疫法試劑，應(yīng)同時具備陰性對照、空白對照、陽性對照以及室內(nèi)質(zhì)控；S/CO≥1則判斷為陽性，S/CO≤0.7則判斷為陰性，0.7≤S/CO≤1則為灰區(qū)[4]。

1.3 觀察指標 ①HBV病毒陽性檢出率與漏診率進行觀察；②對窗口期進行觀察；③對檢測敏感性和特異性進行觀察比較。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 本實驗相關(guān)數(shù)據(jù)運用SPSS21.0軟件做統(tǒng)計學(xué)處理，計數(shù)資料以百分率（%）表示，組間數(shù)據(jù)比較進行X2檢驗，計量資料以均值±標準差（±s）表示，組間數(shù)據(jù)比較進行t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HBV病毒陽性檢出率與漏診率觀察 核酸檢測法的HBV病毒陽性檢出率為0.67%，漏診率為0.13%；酶聯(lián)免疫法的HBV病毒陽性檢出率為0.60%，漏診率為0.20%；在HBV病毒陽性檢出率以及漏診率方面，核酸檢測法與酶聯(lián)免疫法比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 窗口期觀察 核酸檢測法的窗口期為（21.21±3.76）d，明顯短于酶聯(lián)免疫法的（35.17±4.83）d，兩者比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3 敏感性和特異性觀察 核酸檢測法的敏感性為99.73%，特異性為99.47%；酶聯(lián)免疫法的敏感性為93.13%，特異性為93.40%；在檢測敏感性、特異性方面，核酸檢測法明顯高于酶聯(lián)免疫法（P＜0.05）。

3 討論

我國現(xiàn)階段已成為了一個HBV病毒感染大國，所以加強HBV病毒感染的預(yù)防和控制工作就顯得非常重要[5]。有臨床研究發(fā)現(xiàn)，血液傳播是導(dǎo)致HBV病毒感染風(fēng)險增加的主要原因，所以現(xiàn)階段在開展輸血管理工作時，積極開展HBV病毒篩查工作就顯得非常關(guān)鍵[6]。

酶聯(lián)免疫法是臨床中應(yīng)用比較廣泛的血清學(xué)檢測手段之一，是現(xiàn)階段臨床診斷HBV病毒感染的常用手段，在血液篩查和臨床診斷中的作用非常重要[7]。核酸檢測法則是最近幾年開始逐漸應(yīng)用于臨床的新型診斷手段之一，對血液中是否存在病毒核酸進行檢測，進而來對有無感染病原體進行確診。有臨床研究發(fā)現(xiàn)，采用核酸檢測法開展血液篩查，能讓HIV病毒感染的臨床檢出率明顯提高，讓漏診事件明顯減少[8]。

分析本研究發(fā)現(xiàn)，在HBV病毒陽性檢出率以及漏診率方面，核酸檢測法與酶聯(lián)免疫法比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；核酸檢測法的窗口期明顯短于酶聯(lián)免疫法（P＜0.05），而且在檢測敏感性、特異性方面，核酸檢測法明顯高于酶聯(lián)免疫法（P＜0.05）；結(jié)果表明，核酸檢測法能讓窗口期明顯縮短，診斷效能較高。核酸檢測法選擇二次擴增套式PCR擴增法，能讓假陽性率明顯降低，讓檢測敏感性和特異性顯著提升。在實際的臨床檢測中，外周血中的病毒表現(xiàn)為間歇性存在，所以核酸檢測法也可能出現(xiàn)漏診的情況，聯(lián)合應(yīng)用酶聯(lián)免疫法進行檢測則能有效彌補核酸檢測法的缺點。

總之，采用核酸檢測法對無償獻血血液標本進行HBV病毒篩查，檢測敏感性和特異性較高，而且能讓窗口期明顯縮短，讓臨床輸血安全得以保證。