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        流感病毒檢驗(yàn)及相關(guān)方法的研究進(jìn)展

        2020-12-26 07:53:19天津市海河醫(yī)院300350秦中華
        首都食品與醫(yī)藥 2020年17期
        關(guān)鍵詞:免疫吸附膠體金流感病毒

        天津市海河醫(yī)院(300350)秦中華

        流感具有較高發(fā)病率及死亡率,在各個(gè)國(guó)家均有不同程度的發(fā)生率,導(dǎo)致急性呼吸道感染的主要病原之一,其屬于正黏病毒科,是有包膜以及分階段的單股負(fù)鏈RNA病毒[1]。目前流行病毒主要分為甲型及乙型,甲型流感病毒抗原變異較為活躍,對(duì)世界范圍具有一定影響;乙型流感病毒感染及傳播能力較甲型弱,但也會(huì)引起一定程度暴發(fā)流行。我國(guó)是流感病毒高發(fā)區(qū),近年來(lái),流感發(fā)生率不斷升高,直接威脅人類生命健康[2][3]。因此,臨床需尋求快速、準(zhǔn)確且適用于臨床應(yīng)用的流感病毒診斷方式,以早期診斷、隔離及治療。研究顯示,流感病毒檢驗(yàn)方式較多,但目前臨床對(duì)其研究并不多見(jiàn),為此,本文旨在對(duì)國(guó)內(nèi)外流感病毒檢驗(yàn)相關(guān)方法進(jìn)行綜述,為臨床診斷提供思路?,F(xiàn)綜述如下。

        1 病毒分離鑒定

        病毒分離法是一種檢測(cè)流感病毒的傳統(tǒng)方式,雖然具有敏感性高且精確度高等優(yōu)點(diǎn),且可在一定程度上檢測(cè)出病毒毒株情況,但是也具有一定局限,如檢測(cè)周期較長(zhǎng),具有一定安全隱患,故不適宜大規(guī)模應(yīng)用[4]。研究學(xué)者表明,在細(xì)菌培養(yǎng)后常常通過(guò)免疫熒光技術(shù)進(jìn)行進(jìn)一步鑒定,排除其他病毒可能性后,檢測(cè)甲型流感病毒核蛋白,做出診斷。王林等[5]研究選取流感高峰季節(jié)收集流感哨點(diǎn)醫(yī)院流感病例標(biāo)本(ILI)1025份,采用犬腎傳代細(xì)菌培養(yǎng)及實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè),對(duì)比兩種方式檢驗(yàn)差異情況;研究結(jié)果顯示,在選取病例中,實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)流感病毒核酸陽(yáng)性率為26.63%,細(xì)胞培養(yǎng)檢出12.58%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);在273份陽(yáng)性標(biāo)本中,分離出118株病毒株,占43.22%,752例陰性標(biāo)本中,分離出11株病毒株,占1.46%,實(shí)時(shí)熒光定量法檢驗(yàn)陽(yáng)性標(biāo)本及陰性標(biāo)本分離率差異顯著。根據(jù)其研究可發(fā)現(xiàn),實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)速度較快,靈敏性高,適用于臨床檢測(cè)及診斷流感疫情;細(xì)胞培養(yǎng)能夠獲得毒株,可進(jìn)行基因特異性及耐藥性等深入研究,二者結(jié)合診斷效果更佳。

        2 免疫學(xué)檢測(cè)

        2.1 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn) 免疫學(xué)檢測(cè)也是檢測(cè)流感病毒常用方式之一,其主要依據(jù)抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行檢驗(yàn),一般需要對(duì)血清中的抗原或者抗體進(jìn)行檢測(cè)。其中酶聯(lián)免疫吸附法可用于檢測(cè)抗原或抗體,具有方便快捷、靈敏度及特異度高等優(yōu)點(diǎn),是當(dāng)前臨床較為常用的免疫測(cè)定方式之一[6]。章倩云等[7]針對(duì)禽流感病毒M基因、H7基因以及N9基因的基因片段保守序列,進(jìn)行特異性標(biāo)記后,通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)PCR擴(kuò)增情況進(jìn)行判斷;研究結(jié)果顯示,其檢測(cè)三個(gè)基因片段最低拷貝數(shù)敏感性高于普通PCR技術(shù)的10~100倍;此外,在不同流感病毒亞型間,不同病毒之間均不存在交叉反應(yīng)現(xiàn)象;通過(guò)對(duì)臨床114份標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn),結(jié)果與雞胚培養(yǎng)符合率達(dá)到100%。根據(jù)其研究結(jié)果可發(fā)現(xiàn),酶聯(lián)免疫吸附法操作簡(jiǎn)單,具有較高靈敏度及特異度,可廣泛應(yīng)用于流感病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

        2.2 免疫熒光技術(shù) 免疫熒光技術(shù)具有檢測(cè)結(jié)果直觀等優(yōu)點(diǎn),但是其仍具有一定局限,如對(duì)制備抗原具有較高要求,可能會(huì)產(chǎn)生非特異性染色體[8]。何潔靜等[9]研究運(yùn)用雙抗夾心建立柯薩奇病毒A16型的時(shí)間分辨免疫熒光技術(shù),對(duì)該種方法檢測(cè)的靈敏度及特異度等進(jìn)行分析;研究結(jié)果顯示,時(shí)間分辨免疫熒光技術(shù)的檢驗(yàn),靈敏度為0.02ng/ml,回收率為100.2%~101.5%之間,將其與金標(biāo)準(zhǔn)PCR技術(shù)相比,檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性較酶聯(lián)免疫吸附法高。根據(jù)其研究結(jié)果可知,時(shí)間分辨免疫熒光法具有操作簡(jiǎn)單、靈敏度及準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn),適用于臨床篩查柯薩奇病毒A16型。

        2.3 膠體金免疫標(biāo)記法 既往相關(guān)研究報(bào)道,通過(guò)膠體金可有效檢測(cè)人絨毛膜的促性腺激素,這也成為臨床免疫學(xué)研究的重點(diǎn)及熱點(diǎn),受到臨床醫(yī)學(xué)界及研究界廣泛關(guān)注[10]。多年前,相關(guān)研究學(xué)者開(kāi)始申請(qǐng)有關(guān)膠體金快速檢測(cè)試紙相關(guān)專利,近年來(lái),不少研究學(xué)者采用膠體金免疫法檢測(cè)流感病毒,并取得一定研究結(jié)論。如鄭嘉庚等[11]學(xué)者為建立一種快速定性檢測(cè)血清丙型肝炎病毒(HCV)抗體方式,其根據(jù)雙抗原夾心法實(shí)驗(yàn)原理,建立膠體金免疫層分析法對(duì)人體血清中丙型肝炎抗體進(jìn)行檢測(cè);研究結(jié)果顯示,陰性參考品及陽(yáng)性參考品符合率達(dá)到100%,平行測(cè)定10條重復(fù)性參考品,全部顯示陽(yáng)性;通過(guò)檢測(cè)血清1050份標(biāo)本發(fā)現(xiàn),其與酶聯(lián)免疫吸附法符合率高達(dá)96.9%;又經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),該方法檢測(cè)靈敏度(97.90%)、特異度(99.00%)均較高。根據(jù)其研究可見(jiàn),膠體金免疫標(biāo)記法是一種更加方便、快速檢測(cè)血清中HCV抗體方式,可為臨床診治提供重要參考價(jià)值。

        3 流感病毒的核酸檢測(cè)

        3.1 聚合酶鏈反應(yīng) 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)是一項(xiàng)可在較短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù),具有敏感性、特異性高等特點(diǎn),可在較短時(shí)間內(nèi)對(duì)流感病毒進(jìn)行檢測(cè),對(duì)早期診斷流感病毒感染具有較高價(jià)值[12]。研究顯示,PCR技術(shù)用于病原體的確定,可有效檢測(cè)出早期感染患者,與病毒分離法比,其敏感性強(qiáng)500倍,但一般的PCR技術(shù)具有一定污染。蔡航航等[13]為了對(duì)比免疫組化法與PCR技術(shù)對(duì)EB病毒潛伏膜蛋白1(LMP-1)的檢測(cè)價(jià)值,其選取50例鼻咽癌患者以及50例鼻咽炎患者進(jìn)行分析對(duì)比,分別對(duì)不同患者標(biāo)本采用免疫組化法及PCR技術(shù)進(jìn)行檢測(cè);研究結(jié)果顯示,與免疫組化法比,PCR技術(shù)檢測(cè)LKP-1的靈敏度、準(zhǔn)確度均較高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),兩種方式診斷特異度無(wú)差異。根據(jù)該研究結(jié)果可知,PCR用于檢測(cè)LMP-1具有較高診斷準(zhǔn)確度及靈敏度,用于臨床具有更高價(jià)值。

        3.2 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增試驗(yàn)(LAMP) LAMP是一種DNA環(huán)介導(dǎo)的等溫核酸擴(kuò)增方法,目前被臨床廣泛應(yīng)用于檢測(cè)多種病毒。目前的基因特異性擴(kuò)增可通過(guò)光度法檢測(cè)反應(yīng)結(jié)束時(shí)溶液中所釋放的相關(guān)副產(chǎn)物。研究顯示,LAMP靈敏度與PCR相似,已被臨床廣泛應(yīng)用于檢測(cè)流感病毒。如趙娜等[14]應(yīng)用LAMP技術(shù)檢測(cè)乙型肝炎病毒,通過(guò)檢測(cè)乙型肝炎病毒毒株以及臨床樣本,評(píng)價(jià)LAMP的靈敏度、特異度以及抗干擾性,并將研究結(jié)果與PCR進(jìn)行對(duì)比;研究顯示,LAMP技術(shù)特異性高,未產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增;煮沸法的LAMP與PCR技術(shù)具有較好一致性。根據(jù)該研究學(xué)者結(jié)果可發(fā)現(xiàn),LAMP技術(shù)在檢測(cè)乙型肝炎病毒中具有一定優(yōu)點(diǎn),通過(guò)該方式檢測(cè)有利于提高臨床檢出率,為早期診治提供重要參考價(jià)值。此外,基因芯片法也是核酸檢測(cè)方式之一,可對(duì)數(shù)萬(wàn)個(gè)基因進(jìn)行檢測(cè),該種方式通過(guò)在支持物上固定大量探針?lè)肿?,將其與標(biāo)記的樣本分子進(jìn)行雜交,進(jìn)而通過(guò)所獲得信號(hào)強(qiáng)度,對(duì)樣本相關(guān)數(shù)量及序列相關(guān)信息進(jìn)行分析。研究發(fā)現(xiàn),該種方式具有較高靈敏度及特異度,但其對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求較高,價(jià)格昂貴,不方便一般檢測(cè)。

        4 小結(jié)與展望

        流感是分布于全球的感染性疾病,不僅對(duì)人類生命健康造成嚴(yán)重威脅,也給國(guó)家經(jīng)濟(jì)發(fā)展及社會(huì)穩(wěn)定造成一定威脅,故尋求安全可靠的流感病毒檢測(cè)方式成為臨床研究重點(diǎn)。病毒分離鑒定是檢測(cè)流感病毒傳統(tǒng)方式,其可有效檢測(cè)出病毒毒株,具有精確度高等優(yōu)點(diǎn),但是其具有一定局限性,如操作較為復(fù)雜,等待時(shí)間長(zhǎng),很難被臨床推廣。核酸檢測(cè)法是一種有效檢測(cè)流感病毒方法,與傳統(tǒng)方式比,其可在短時(shí)間內(nèi)完成檢測(cè),但是其也具有一定局限性,如對(duì)檢測(cè)技術(shù)人員要求較高,且價(jià)格昂貴,應(yīng)用不多。免疫學(xué)檢測(cè)操作簡(jiǎn)單,對(duì)檢驗(yàn)人員要求不高,特別是膠體金免疫標(biāo)記法所需時(shí)間更短,可現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè),較為方便;其中酶聯(lián)免疫吸附法具有檢驗(yàn)迅速、靈敏度高且可定量等優(yōu)點(diǎn),被臨床廣泛應(yīng)用。因此,臨床需結(jié)合不同地區(qū)對(duì)流感病毒檢測(cè)要求,選擇適宜的檢測(cè)方法及設(shè)備,提高診斷準(zhǔn)確率。

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