劉帥葉

（廣州省深圳市四季醫(yī)療美容醫(yī)院，廣東 深圳 518052）

0 引言

尋找一個安全，有效，持久，無毒的組織代用品，對修復重建外科來說尤為重要。從20世界 70年代起，自體脂肪移植得以出現(xiàn)，移植后的脂肪吸收，壞死，感染和纖維囊性化等不良反應頻繁發(fā)生，對脂肪移植的發(fā)展造成了嚴重的不良影響。促進脂肪移植成活，將脂肪移植后的并發(fā)癥進行降低，是進行自體脂肪移植技術的干預關鍵[1]。本研究則以自體脂肪干細胞體外擴增混合自體脂肪顆粒移植的方法進行入手，探究其具體應用成果，展開具體分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料。選取我院患者為研究對象，患者的選取時間在2018年5月至2019年5月，共選取患者100例，將其隨機分為兩組，每組50例患者，一組患者經(jīng)過自體脂肪干細胞分離和培養(yǎng)，促進體外擴增，對自體脂肪顆粒進行介導，實現(xiàn)注射移植，促進面部塑形的填充或是隆胸。對照組患者給予單純的自體脂肪移植?；颊咧信?9人，男11人，年齡在20-58歲，平均（34.34±2.34）歲，患者均無其他重大疾病，并簽署知情同意書。

1.2 研究方法探究。主要試劑和儀器：主要將α-MEM無血清培養(yǎng)基進行應用，其中的Ⅰ型膠原酶和胰蛋白酶主要選擇生產(chǎn)自美國Sigma公司的，而CD29-PE，CD31-PE，CD34-PE，HLA-AΒC-FITC，HLA-DR-FITC，主要選擇生產(chǎn)自美國Βioscinces公司的，同時需要應用秋水仙素，其主要選擇生產(chǎn)自上海瑞郎商貿(mào)有限公司的，同時倒置鏡和成像系統(tǒng)選擇生產(chǎn)自日本Olympus公司的。實驗方法：對自體脂肪肝細胞的體外分離培養(yǎng)來說，需要在患者下腹部進行自體脂肪顆粒的抽取，其劑量為50-60 mL，并將其進行離心處理，離心次數(shù)為2次。并取脂肪層，將濃度為0.075%的Ⅰ型膠原酶加入其中，并將其放置在37℃溫度環(huán)境中，將其進行消化處理，時間為60 min，并給予離心處理，離心速度為1500 r/min，離心時間為15 min，同時將上層脂肪組織進行去除，并將生理鹽水進行應用，進行沉淀重懸，將直徑在70 μm的細胞進行過濾篩選，將殘余結締組織進行去除，同時給予離心處理，此時的離心速度為1500 r/min，離心干預時間在5分鐘。隨后在其中加入紅細胞裂解液，處理5分鐘左右，并用生理鹽水進行清洗，次數(shù)為2次，進行技術，將α-MEM培養(yǎng)基進行應用，以106個/mL，將其平鋪在培養(yǎng)皿中，并記錄為P0代，在觀察其長滿細胞后，將濃度為0.05%的胰蛋白酶進行應用，促進消化作用，以1:6的比例進行傳代復制。自體脂肪干細胞免疫表型鑒定：將第3代的自體脂肪干細胞進行選取，同時采用胰酶消化，用PΒS進行清洗，清洗兩遍，然后將其放置在溫室內(nèi)，進行避光孵育，時間為30 min，再用PΒS清洗2次，并采用流式細胞儀進行檢測[2]。

1.3 統(tǒng)計學分析。以統(tǒng)計學軟件SPSS 20.0為工具，對此次研究中所出現(xiàn)的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，對計量資料（±s）的比較結果予以t值驗證，對計數(shù)資料（n，%）的比較結果予以χ2值驗證，當結果呈現(xiàn)出P＜0.05時表示組間比較差異存在統(tǒng)計學分析價值[3]。

2 結果

2.1 hADSCs細胞形態(tài)。在給予患者接種24小時后，對其展開倒置顯微鏡觀察，其結果顯示大部分的細胞均表現(xiàn)為貼壁，并表現(xiàn)為梭形，并且其中混有少量的未貼壁的圓形淋巴細胞，在接種48小時后，需要進行換液操作，同時將淋巴細胞進行去除，在細胞長滿后，細胞會表現(xiàn)出旋渦狀生長，在傳到第3代后，不存在形態(tài)上的差異性。

2.2 hADSCs免疫表型。在流式細胞儀下進行檢測，其結果顯示：第3代hADSCs高表達，主要為HLA-AΒC，CD37，CD44和CD29，對應的陽性率在95%以上，但是對應內(nèi)皮標志物并不表示，造血細胞表面的標志物主要組織形容性抗原的陽性率在3%以下。

3 討論

干細胞是一種可實現(xiàn)自我修復更新，并促進多向分化強能增強的細胞組織，其對應的重建功能和組織修復能力較強。尋找一個安全，有效，持久，無毒的組織代用品，對修復重建外科來說尤為重要[4]。根據(jù)相關研究數(shù)據(jù)顯示，其曾在脂肪組織中將干細胞進行分離，并將其命名為脂肪間充質干細胞，從此之后，脂肪干細胞就得到了廣泛關注，在將其與骨髓來源的MSCs進行比較時，脂肪干細胞可將儲量進行提高，同時其取材過程較為方便，對患者造成痛苦程度相對較小，同時干細胞所對應的擴增能力相對較強，因此，可以說脂肪干細胞是組織工程中的理想種子細胞，根據(jù)近些年的發(fā)展研究顯示，脂肪干細胞在培養(yǎng)過程中，可逐漸向中胚層脂肪細胞，軟骨細胞分化，成骨細胞進行分化，同時可以向胰島細胞，肝臟細胞和心肌細胞進行分化，其結果表明脂肪干細胞的多向分化強能較強[5]。

根據(jù)隆胸的近兩年隨訪結果顯示，其MRI中，hADSCs介導的自體脂肪移植，并不會促進腺體體積的增加，通常僅僅是促進乳房的皮下脂肪組織厚度增加，是對女性乳腺組織進行的安全隆胸手術。根據(jù)研究解結果顯示hADSCs介導自體脂肪移植術，其所對應的特定較為顯著[6]。本研究結果顯示：在流式細胞儀下進行檢測，其結果顯示：第3代hADSCs高表達，主要為HLAAΒC，CD37，CD44和CD29，對應的陽性率在95%以上，但是對應內(nèi)皮標志物并不表示，造血細胞表面的標志物主要組織形容性抗原的陽性率在3%以下。表明在hASACs介導的自體脂肪移植術是將具有分化成脂肪細胞的潛能的，其所對應的遺傳穩(wěn)定性較強，可將其自體脂肪間的充質干細胞注射移植，隨后進行面部塑性或隆胸。研究數(shù)據(jù)顯示，其具有將高移植脂肪細胞的成活率進行提高的作用，可促進移植脂肪進行血管再生，將脂肪顆粒的吸收進行減少，減少液化，從而可降低不良反應的發(fā)生率，具有顯著的應用優(yōu)勢。對其原因進行分析，可以明確主要受三方面因素影響。首先，hADSCs具有分化成脂肪細胞的能力，在人體中注入hADSCs，可單次增加脂肪細胞移植數(shù)量，而且其可移植入體內(nèi)的脂肪顆粒細胞為支架，在其周圍進行聚集，分化成脂肪細胞和自體脂肪間充質干細胞和血管內(nèi)皮細胞。其次，hADSCs具有分泌細胞因素和細胞基質的能力作用，可進一步促進移植脂肪顆粒細胞的血管再生，促進移植的脂肪顆粒細胞的穩(wěn)定性加強，而且其增值分化的過程以脂肪顆粒細胞為模板。最后，進行體外培養(yǎng)擴增，其脂肪干細胞較為單一，具有穩(wěn)定性，在移植前脂肪干細胞可再次進行免疫表型，遺傳穩(wěn)定和分化潛能的檢測，從而可對移植細胞的質量進行穩(wěn)定性。脂肪顆?？蔀橐浦驳膆ADSCs起到支架作用，hADSCs以脂肪顆粒細胞為模板進行分化，與脂肪組織的生物型狀態(tài)更加符合，而單純的脂肪顆粒移植并沒有hADSCs介導的細胞內(nèi)外環(huán)境，容易導致移植脂肪包成活率低等問題，脂肪顆粒的吸收，液化和感染等并發(fā)癥的發(fā)生也會隨之而來。而自體脂肪干細胞介導的自體脂肪移植術則可將此問題進行有效避免，提高細胞成活率[7]。

綜上所述，就自體脂肪干細胞介導的自體脂肪移植術進行應用，其具有移植脂肪成活率較高，創(chuàng)傷較小，成形效果較好等特點，對臨床發(fā)展具有積極意義，可在臨床再生醫(yī)學技術中進行推廣使用。