任玉清 陳啟松 王華

（深圳市南山區(qū)西麗人民醫(yī)院普通外科 廣東 深圳 518055）

近年來，由于多種因素的交互性作用，導(dǎo)致胃癌具有較高的發(fā)病率，嚴(yán)重影響患者健康以及生命安全。該病屬于典型的消化系統(tǒng)惡性腫瘤類型，其發(fā)病率占據(jù)人類惡性腫瘤第三名[1-2]。因?yàn)樵缙谖赴┮话惚憩F(xiàn)為無癥狀或只是輕微不適，而一旦覺察到明顯癥狀時(shí)，普遍已經(jīng)進(jìn)入晚期，延誤了最佳治療機(jī)會(huì)。所以，必須采取有效措施，尋求科學(xué)有效的診斷指標(biāo)[3]。我院積極開展研究，探索分析胃癌組織中異黏蛋白(MTDH)以及程序性細(xì)胞死亡因子4(PDCD4)的表達(dá)水平及其臨床意義，取得了有價(jià)值的經(jīng)驗(yàn)。

1.資料與方法

1.1 一般資料

將我院2019 年1—10 月收治的接受胃癌手術(shù)治療患者50例作為研究對(duì)象。含男33 例、女17 例；年齡42 ～76 歲，平均(60.5±4.5)歲；病程1 ～6 個(gè)月，平均(3.5±0.5)個(gè)月；在胃癌TNM 臨床分期方面，含Ⅰ＋Ⅱ期26 例，Ⅲ＋Ⅳ期24 例；在有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況方面：含淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移34 例，未發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移16 例。所有研究對(duì)象均具有胃癌相關(guān)臨床指征并經(jīng)檢查確診，均為原發(fā)疾病，已對(duì)并發(fā)嚴(yán)重肝、腦、腎以及血液性疾病患者予以排除，同時(shí)排除過往有胃部腫瘤史及術(shù)前接受放射和化學(xué)治療者。所有研究對(duì)象均同意納入本研究，并經(jīng)本院倫理委員會(huì)審批，其臨床資料均完整準(zhǔn)確。

1.2 方法

組建專門小組，抽調(diào)本院專業(yè)人員5 人參與。選取研究對(duì)象胃癌組織以及癌旁組織標(biāo)本實(shí)施檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)材料及試劑選用MTDH Rabbit pAb-多克隆抗體(武漢愛博泰克生物科技有限公司)、ANti-PDCD4 多克隆抗體(上海安妍生物有限公司)，通用型二步法檢測(cè)試劑盒(PV-6000)免疫組化(北京欣興唐生物科技有限公司)、濃縮型DAB 試劑盒(上海康朗生物科技有限公司)。按照規(guī)范進(jìn)行標(biāo)本采集，注意癌旁組織必須自距離癌組織邊界＞5cm 位置選取[4-5]。完成標(biāo)本采集后，要將其妥善固定于比例10%的中性甲醛溶液中，以乙醇進(jìn)行脫水，以石蠟進(jìn)行包埋。予以連續(xù)切片蠟塊6 張，應(yīng)用覆有多聚賴氨酸載玻片實(shí)施粘貼，之后實(shí)施免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)。免疫組化嚴(yán)格按照要求規(guī)范實(shí)施具體操作：①烤片。將備好的切片置于68℃的烤片箱中進(jìn)行烤片，時(shí)間持續(xù)20min。②二甲苯脫蠟，乙醇脫水。將烤片完成的切片依次置入3缸二甲苯試劑缸，每缸予以停留15min。實(shí)現(xiàn)脫蠟后，依次以純乙醇、75%乙醇、50%乙醇、純凈水實(shí)施洗脫，最后以比例為0.01mol/L 的磷酸鹽緩沖液實(shí)施沖洗3 次。③內(nèi)源性過氧化物酶活性阻斷及滅活。將切片置入備好的濕盒，應(yīng)用比例為3%的過氧化氫去離子水滴入，保存在37℃環(huán)境下10min，然后以比例為0.01mol/L 的磷酸鹽緩沖液實(shí)施洗滌。④加入一抗。將一抗進(jìn)行稀釋后滴入，在4℃條件下孵育24h。⑤濕盒復(fù)溫。將濕盒置于室溫下半小時(shí)，應(yīng)用0.01mol/L 磷酸鹽緩沖液實(shí)施洗滌。⑥滴加二抗。滴加二抗試劑1 滴，于37℃條件下放置15min。⑦沖洗。應(yīng)用PBS 磷酸鹽緩沖液予以沖洗3 次，每次持續(xù)3min。⑧顯色。配置完成新鮮DAB 顯色液，將50μl 滴于到標(biāo)本，仔細(xì)觀察，但特異性部位著色較強(qiáng)，周圍著色較淺時(shí)，立即停止反應(yīng)。⑨復(fù)染及藍(lán)化。應(yīng)用蘇木素實(shí)施復(fù)染，15s 后應(yīng)用自來水洗滌，并將其置入95℃熱水中完成藍(lán)化60s。所有患者在完成手術(shù)治療后，均接受隨訪[6]。

1.3 觀察指標(biāo)

①胃癌組織和癌旁組織中MTDH 與PDCD4 表達(dá)差異。②MTDH與PDCD4 在胃癌組織中的表達(dá)水平與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系。③MTDH 與PDCD4 在胃癌組織中表達(dá)的相關(guān)性。免疫組化顯色標(biāo)準(zhǔn)為：當(dāng)細(xì)胞內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色顆粒即表示MTDH 與PDCD4 發(fā)生陽性染色[7]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS20.0 軟件對(duì)相關(guān)結(jié)果數(shù)據(jù)實(shí)施分析。P＜0.05 對(duì)應(yīng)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 胃癌患者胃癌組織與癌旁組織MTDH 與PDCD4 表達(dá)情況比較

檢測(cè)表明，胃癌患者胃癌組織及癌旁組織中均呈現(xiàn)MTDH 與PDCD4 表達(dá)，MTDH 胃癌組織中表達(dá)水平為74.00%(37 例)，顯著超過癌旁組織的26.00%(13 例)(P＜0.05)；PDCD4 胃癌組織中表達(dá)水平為26.00%(13 例)，顯著低于癌旁組織的74.00%(37 例)(P＜0.05)。

2.2 胃癌組織MTDH 和PDCD4 表達(dá)水平與臨床參數(shù)情況比較

胃癌組織中，MTDH 陽性表達(dá)水平和腫瘤分期、浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著相關(guān)(P＜0.05)，與其他參數(shù)無明顯相關(guān)性(P＞0.05)；PDCD4 陽性表達(dá)水平與腫瘤分化程度顯著相關(guān)(P＜0.05)，與其他參數(shù)無顯著相關(guān)性(P＞0.05)。見表1 ～表3。

2.3 胃癌組織中MTDH 和PDCD4 在表達(dá)情況比較

50例胃癌患者中，有37例MTDH陽性表達(dá)，其中6例(16.22%)PDCD4 陽性表達(dá)；有13 例MTDH 陰性表達(dá)，其中有6 例(46.15%)PDCD4 陽性表達(dá)。

表1 胃癌組織MTDH 和PDCD4 表達(dá)水平與性別、年齡、腫瘤大小情況比較[n(%)]

表2 胃癌組織MTDH 和PDCD4 表達(dá)水平與腫瘤浸潤(rùn)程度、分期和淋巴轉(zhuǎn)移情況比較[n(%)]

表3 胃癌組織MTDH 和PDCD4 表達(dá)水平與腫瘤分化程度、部位和分型情況比較[n(%)]

3.討論

異黏蛋白(MTDH)屬于星形細(xì)胞上調(diào)基因-1(AEG-1)的別稱[8]。臨床研究結(jié)果顯示，其對(duì)于膀胱癌、乳腺癌、前列腺癌以及腦膠質(zhì)瘤、非小細(xì)胞肺癌等一系列惡性腫瘤而言，均具有高表達(dá)屬性[9]。其與腫瘤不良預(yù)后具有十分密切的關(guān)系，且能夠促進(jìn)腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移和以及提升其化療耐藥性。程序性細(xì)胞死亡因子4(PDCD4)屬于細(xì)胞凋亡所必需的一類新生大分子復(fù)合物類型，一旦細(xì)胞凋亡啟動(dòng)，就會(huì)表達(dá)為上調(diào)[10]。臨床研究證實(shí)，PDCD4 不但會(huì)在極大程度上影響細(xì)胞的程序性死亡，還能夠通過阻止細(xì)胞腫瘤性轉(zhuǎn)化以有效抑制腫瘤的發(fā)生以及發(fā)展[11]。本研究結(jié)果顯示，胃癌患者的胃癌組織中，MTDH 含量明顯性超過癌旁組織，且和腫瘤分期、浸潤(rùn)程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等具有明顯相關(guān)性[12-13]。而PDCD4 在患者胃癌組織中的表達(dá)水平明顯性低于癌旁組織，且和腫瘤分化程度具有明顯相關(guān)性；對(duì)于同一胃癌患者而言，其MTDH 和PDCD4 表達(dá)基本表現(xiàn)為負(fù)相關(guān)關(guān)系。因此，對(duì)于胃癌患者，積極實(shí)施MTDH 和PDCD4 表達(dá)水平檢測(cè)，能夠有效實(shí)現(xiàn)對(duì)胃癌的發(fā)生、發(fā)展以及預(yù)后的判斷和分析，對(duì)于及時(shí)治療干預(yù)具有重要價(jià)值[14-15]。