□ 楊亞瑞 河南華測(cè)檢測(cè)技術(shù)有限公司

本文使用高效液相色譜法對(duì)測(cè)定分析糕點(diǎn)中的防腐劑（苯甲酸、山梨酸），主要依據(jù)GB 5009.28—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測(cè)定》中的第一法液相色譜法，并對(duì)此方法進(jìn)行精簡(jiǎn)和優(yōu)化，對(duì)糕點(diǎn)中的苯甲酸、山梨酸進(jìn)行檢測(cè)分析[1]。

1 實(shí)驗(yàn)過程

1.1 溶液的配制

苯甲酸、山梨酸混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液的配制：分別準(zhǔn)確稱取苯甲酸和山梨酸標(biāo)準(zhǔn)品固體粉末各0.100 0 g（精確到0.000 1 g），用水溶解定容至10.0 mL，濃度為10 000 mg/L；取濃度為10 000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1 mL稀釋至10 mL，得到濃度為1 000 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。用儲(chǔ)備液配制濃度為1.00、2.00、5.00、10.00、20.00、50.00 mg/L 與100.0 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。

乙酸鋅溶液（220 g/L）的配制：準(zhǔn)確稱取220 g乙酸鋅溶于少量超純水中，再加入30 mL冰乙酸，加水定容至1 000 mL，備用。

亞鐵氰化鉀溶液（106 g/L）的配制：準(zhǔn)確稱取106 g亞鐵氰化鉀，加入適量水溶解，再加水定容至1 000 mL，備用。

乙酸銨溶液（0.02 mol/L）的配制：準(zhǔn)確稱取1.54 g乙酸銨固體，加水溶解，再加入200 μL乙酸，轉(zhuǎn)移至1 000 mL容量瓶中，定容，再經(jīng)0.22 μm水相微孔濾膜過濾后備用[2]。

1.2 主要設(shè)備

實(shí)驗(yàn)過程中使用的主要儀器以及其型號(hào)、廠家信息等。其它設(shè)備：10 mL容量瓶、50 mL容量瓶、1 000 mL容量瓶；1mL一次性注射器若干；50 mL離心管、配套離心管蓋若干；2 mL液相進(jìn)樣瓶、配套瓶蓋若干。

1.3 樣品來源

樣品來源于公司各個(gè)地市、縣市、區(qū)域客戶送檢的各種糕點(diǎn)。

1.4 分析步驟

1.4.1 樣品制備

本實(shí)驗(yàn)中所用的樣品均為固體樣品，參照國(guó)抽細(xì)則和測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)制樣的要求對(duì)樣品進(jìn)行制備。

1.4.2 樣品提取

準(zhǔn)確稱取1 g（精確到0.001 g）破碎后的樣品于50 mL塑料離心管中，加水20 mL，搖勻后，使用移液槍準(zhǔn)確加入乙酸鋅溶液（220 g/L）、亞鐵氰化鉀溶液（106 g/L）各 2.5 mL，加蓋、渦旋混勻后超聲提取30 min，冷卻后使用高速離心機(jī)離心2 min，取上清液過0.22 μm水相針式濾膜至2 mL的液相色譜樣品瓶中，等待液相色譜測(cè)定。

1.4.3 定性分析

將2.00 mg/L的苯甲酸和山梨酸單一標(biāo)準(zhǔn)溶液分別進(jìn)行測(cè)試，在230 nm波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè)分析，得到相對(duì)應(yīng)的色譜圖，從而確定苯甲酸和山梨酸的保留時(shí)間，通過保留時(shí)間對(duì)其進(jìn)行定性分析，必要時(shí)可利用光譜圖進(jìn)一步進(jìn)行定性。

1.4.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

將混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液分別注入液相色譜儀中，測(cè)定相應(yīng)的峰面積，以混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4.5 試樣溶液的測(cè)定

將試樣溶液注入液相色譜儀中，得到相應(yīng)的峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待測(cè)液中苯甲酸、山梨酸的質(zhì)量濃度。

1.4.6 回收率的測(cè)定方法

選擇一個(gè)已知苯甲酸和山梨酸含量的糕點(diǎn)樣品，按照樣品測(cè)定過程進(jìn)行低、中、高濃度加標(biāo)測(cè)試，計(jì)算該方法回收率。

2 結(jié)果分析

2.1 確定苯甲酸、山梨酸的保留時(shí)間

由2.00 mg/L苯甲酸、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液得到液相色譜圖，由此確定苯甲酸的保留時(shí)間在5.322 min左右，山梨酸的保留時(shí)間在10.045 min左右。

2.2 測(cè)定結(jié)果分析

本試驗(yàn)通過對(duì)20批糕點(diǎn)樣品進(jìn)行測(cè)定分析，結(jié)果顯示山梨酸的含量范圍為0.100～0.300 g/kg,苯甲酸未檢出。符合國(guó)家糕點(diǎn)中山梨酸含量＜1.0 g/kg,苯甲酸禁止添加的限量范圍要求。對(duì)檢出限、10倍檢出限、限值3水平進(jìn)行行加標(biāo)回收測(cè)定，結(jié)果顯示低、中、高濃度樣品回收率為97%～100%，符合國(guó)標(biāo)要求的95%～105%。

3 結(jié)語(yǔ)

綜上所述：用高效液相色譜法測(cè)定糕點(diǎn)中的苯甲酸和山梨酸，目標(biāo)化合物在分析條件下有著良好的分離度和峰型。在測(cè)試濃度范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.999以上，回收率在97%～100%，完全滿足國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求。通過對(duì)20個(gè)不同地區(qū)不同種類的糕點(diǎn)進(jìn)行分析測(cè)試比較得出，苯甲酸含量均為未檢出，山梨酸含量均低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的1.0 g/kg。由此說明食品生產(chǎn)企業(yè)基本能在標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定添加范圍內(nèi)合理的使用防腐劑，從而保證食品的安全性和可靠性。隨著國(guó)家市場(chǎng)對(duì)食品安全問題的大力管控和治理，相信在以后會(huì)有越來越多的人們加入到保衛(wèi)食品安全的隊(duì)伍中，會(huì)有更高效、更精密的檢測(cè)手段和更規(guī)范的法律標(biāo)準(zhǔn)來捍衛(wèi)人們舌尖上的安全。