□ 杜玉菲 王建芬 林 聰 甘依婷 肖 瑤 李穎慧 長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院

自由基衰老學(xué)說(shuō)認(rèn)為人體在代謝中產(chǎn)生的過(guò)剩自由基對(duì)健康細(xì)胞可造成損害，而老齡化疾病與自由基對(duì)人體細(xì)胞的氧化損傷有關(guān)[1]。具有抗氧化性的物質(zhì)可以有效清除體內(nèi)過(guò)剩自由基或延緩其氧化帶來(lái)的損傷，從而起到抗炎，抗氧化，抗腫瘤，調(diào)血脂，抗輻射和防治動(dòng)脈硬化等作用[2]。茶葉中含有較多的茶多酚類物質(zhì)[3]，本文通過(guò)體外抗氧化性能力測(cè)定，對(duì)比不同加工形式的茶葉的抗氧化性，為茶葉提取物作為抗氧化食品添加劑開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器與設(shè)備

梅特勒電子天平AL204101（梅特勒—托利多儀器(上海)有限公司）；759S 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海菁華科技儀器有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

全發(fā)酵茶：紅茶（產(chǎn)地安徽祁門(mén)）；半發(fā)酵茶：烏龍茶（產(chǎn)地福建安溪）；不發(fā)酵茶：綠茶（產(chǎn)地福建安溪）；維生素C 標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)：MV0892，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司），其余試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 茶葉水提溶液的制備

將茶葉樣品粉碎后過(guò)篩（60 目），取粉末約3 g，精密稱定，加入水30 mL，在80 ℃水浴鍋中恒溫加熱30 min 后，離心（3 000 rpm，20 min）取上清液過(guò)濾，將各茶樣用新沸蒸餾水分別稀釋成0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 mg/mL 和1.0 mg/mL，備用。

2.2 對(duì)超氧陰離子（O2-·）的清除作用

鄰苯三酚在堿性條件下發(fā)生自氧化 產(chǎn) 生 超 氧 陰 離 子（O2—·），O2—·可加速鄰苯三酚的自氧化，其產(chǎn)物在320 nm 處有強(qiáng)烈吸收[4]。以維生素C 為陽(yáng)性對(duì)照，根據(jù)上述反應(yīng)機(jī)理，取各濃度樣品溶液1 mL，分別加入25 ℃已預(yù)熱的Tris—HCL 緩沖液、鄰苯三酚鹽酸溶液，搖勻反應(yīng)4 min，用0.5 mL 鹽酸終止反應(yīng)，在320 nm處測(cè)定吸光度A1。空白組以1 mL 水代替，同法操作，測(cè)得吸光度A0，樣品參照組以0.5 mL 的蒸餾水代替鄰苯三酚溶液，測(cè)得吸光度A2，具體操作見(jiàn)表1。依據(jù)公式：清除率（%）=A0—（A1—A2）］/A0×100%，求得各樣品對(duì)O2—·的清除率。

表1 對(duì)超氧陰離子（O2-·）的清除作用（n=3）

2.3 對(duì)1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH·）的清除作用

DPPH 可從抗氧化物中吸取質(zhì)子失去發(fā)色基團(tuán)，其在517 nm 波長(zhǎng)處有較強(qiáng)的吸收，通過(guò)吸光度的變化反映樣品對(duì)自由基的清除能力，從而推測(cè)其抗氧化性[5]。以維生素C 為陽(yáng)性對(duì)照，根據(jù)反應(yīng)原理，取各濃度樣品2 mL，加入2 mLDPPH 溶液，搖勻后于室溫暗室放置30 min，在517 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度A1；空白組用2 mL 無(wú)水乙醇，同法操作，測(cè)得吸光度A0，為了排除色素的影響設(shè)置樣品參照組，以2 ml 的無(wú)水乙醇代替DPPH，測(cè)定吸光度A2，具體操作見(jiàn)表2。依照清除率公式：清除率（%）=A0—（A1—A2）］/A0×100% 計(jì) 算 其 清除率。

表2 對(duì)DPPH·的清除作用（n=3）

2.4 對(duì)羥基自由基（OH·）的清除作用

抗氧化物質(zhì)具有清除羥基自由基的能力，所得產(chǎn)物在510 nm 波長(zhǎng)處有較強(qiáng)的吸收。以維生素C 為陽(yáng)性對(duì)照，根據(jù)反應(yīng)原理，取各濃度樣品1 mL依次加入2 mL FeSO4溶液、1.5 mL水楊酸—乙醇溶液，0.1 mL H2O2溶液，具體見(jiàn)表3，搖勻，在510 nm 處測(cè)定吸光度A1，空白組以1 mL 蒸餾水代替，測(cè)得吸光度A0[6]。依照清除率公式：清除率=（A0—A1)/A0×100%計(jì)算清除率。

表3 對(duì)羥基自由基（OH·）的清除作用（n=3）

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 3 種茶葉水提物對(duì)超氧陰離子自由基的清除作用

3 種茶葉水提物對(duì)超氧陰離子自由基的清除率與濃度成正相關(guān)，說(shuō)明其對(duì)超氧陰離子自由基的清除作用有濃度依賴性；由表4 可知，在濃度為1.0 mg/mL時(shí)，綠茶的清除率最高（63%），其次是烏龍茶（44.52%），最后是紅茶（27.5%）。

根據(jù)表4 數(shù)據(jù)計(jì)算得，綠茶、紅茶和烏龍茶對(duì)超氧陰離子自由基的清除率存在顯著性差異（P ＜0.01）。

表4 不同濃度的3 種茶葉水提物對(duì)超氧陰離子（OH·）的清除率（單位%）

3.2 3 種 茶 葉 對(duì)1，1- 二 苯 基-2-三硝基苯肼（DPPH·）的清除作用

濃度為1.0 mg/mL 時(shí)，綠茶對(duì)1,1—二苯基—2—三硝基苯肼（DPPH·）的清除作用最高，且3 種茶葉水提物的對(duì)1,1—二苯基—2—三硝基苯肼（DPPH·）的清除能力均低于VC，具體見(jiàn)表5。

由表5 計(jì)算得，綠茶、紅茶和烏龍茶對(duì)1，1—二苯基—2—三硝基苯肼（DPPH·）的清除作用存在顯著性差異（P＜0.01）。

3.3 3 種茶葉對(duì)羥基自由基（OH·）的清除作用

3 種茶葉水提物對(duì)羥基自由基（OH·）的清除力低于VC 的清除能力。由表6 可知，當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到1.0 mg/mL 時(shí)，紅茶、綠茶、烏龍茶對(duì)羥基自由基（OH·）的清除率分別達(dá)到了53.28%、63.95%、61.52%。

表6 3 種茶葉水提物對(duì)羥基自由基（OH·）的清除率（單位%）

由表6 的數(shù)據(jù)計(jì)算得，紅茶和烏龍茶對(duì)羥基自由基（OH·）的清除作用存在顯著性差異（P ＜0.01）。

4 結(jié)論

3 種茶葉水提物均具有一定的抗氧化能力，但與維生素C 比，其抗氧化能力略低，值得關(guān)注的是綠茶所表現(xiàn)的抗氧化能力強(qiáng)于紅茶和烏龍茶。由此可知不同的加工工藝會(huì)影響茶葉的抗氧化能力。