□ 徐秋艷 江蘇權(quán)正檢驗(yàn)檢測有限公司

1 實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備

該實(shí)驗(yàn)選用的超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜儀，為1290UHPLC6400QQQ型制，另配置ST8R 型冷凍離心機(jī)、LPVortex Mixer 型渦旋振蕩儀。選用精度分別為十萬分之一、百分之一的電子天平，超聲波儀型制Ultrasonic Cleaner，并采用瑞士BUCHI 公司生產(chǎn)的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、德國IKA 公司生產(chǎn)的高速勻漿機(jī)。

該實(shí)驗(yàn)選用的試劑有甲醇、乙酸乙酯、濃度為29%左右的氨水、無水硫酸鈉等。另外該實(shí)驗(yàn)需用超純水，提前制備。

該實(shí)驗(yàn)選用市場隨機(jī)購買的生豬肉，氯霉素類物質(zhì)選用純度高于98.8%的標(biāo)準(zhǔn)品。

2 實(shí)驗(yàn)操作過程

2.1 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液

選擇氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考等3 類藥物的標(biāo)準(zhǔn)品各5.0 mg，分別放置于容量瓶中，使用甲醇將其稀釋至50 mL 刻度位置，由此得到三瓶標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，其濃度均100 μg/mL。在實(shí)驗(yàn)操作前，可由此標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液作為基礎(chǔ)液，向內(nèi)加超純水用以稀釋，可達(dá)所需濃度。

2.2 儀器條件

對(duì)色譜條件進(jìn)行調(diào)試，將甲醇與水的體積比例調(diào)至2 ∶3；實(shí)驗(yàn)流速調(diào)至每分鐘1 mL；樣品進(jìn)量數(shù)值調(diào)至20 μL；色譜柱數(shù)值調(diào)至C18（3 mm×100 mm），并將色譜柱溫度調(diào)至恒定35 ℃。儀器運(yùn)行原理見圖1。

圖1 儀器運(yùn)行原理

對(duì)質(zhì)譜條件做出調(diào)試，離子源的運(yùn)行形式為電噴霧，掃描方式則為負(fù)離子掃描，其中采用多反應(yīng)監(jiān)測的方式，確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)穩(wěn)定。該離子源的額定電壓設(shè)置為3.5 kV，霧化壓力定為45 psi；干燥氣體的每分鐘流量為5 L，氣體溫度維持恒定300 ℃；鞘氣每分鐘流量11 L，鞘氣溫度恒定在250 ℃。

2.3 處理豬肉樣品

取豬肉1 kg，去皮，絞碎并勻漿1 min，稱取已勻漿試樣(5.00+0.05) g，置50 mL 聚丙烯離心管中，加入3 g無水硫酸鈉，乙酸乙酯10.0 mL，氨水0.3 mL，渦旋2 min，超聲處理5 min，離心5 min，取上清液2 mL至25 mL 雞心瓶中，45 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干[1]。殘?jiān)鼫u旋靜置分層，取下層溶液過濾膜后，供液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜測定。

2.4 氨水影響試驗(yàn)

取3 類藥品物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液，將其提取后勻漿，該步驟原理是加入氨水量不同，將會(huì)對(duì)各物質(zhì)的定量離子平均峰的面積產(chǎn)生影響，以此判斷氨水濃度、數(shù)量對(duì)該實(shí)驗(yàn)過程的影響范圍及對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響效果。該步驟下選用的氨水濃度為28%～30%，選用量為0 ～0.5 mL，設(shè)置等量區(qū)間為5 段。

2.5 回收率與精密性試驗(yàn)

在豬肉樣品中加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，其中每個(gè)濃度下設(shè)置6 個(gè)平行因素，并按照樣品的處理方式，去制備加標(biāo)的溶液樣式。氯霉素與氟苯尼考的溶液濃度區(qū)間相同，分別為0.1、0.3 和1.0 μg/kg，而甲砜霉素的溶液濃度設(shè)置為0.5、1.5 和5.0 μg/kg。該步驟操作目的為探究加標(biāo)回收率和該法下的數(shù)據(jù)精密性，分析相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

3 研究結(jié)果討論

3.1 氨水影響試驗(yàn)的結(jié)果

實(shí)驗(yàn)可知，當(dāng)改變氨水濃度和添加量時(shí)，將影響氯霉素類藥物的提取數(shù)據(jù)，且影響較大，因此在使用該法測定時(shí)，需將氨水濃度固定，并著重確定添加量的具體數(shù)值。為增加提取效率，應(yīng)將0.3 mL 或0.4 mL 作為氨水添加量，若綜合考慮不同物質(zhì)的提取效率，則選用0.3 mL 氨水作為豬肉樣品提取液。

3.2 回收率與精密性結(jié)果

分析實(shí)驗(yàn)回收率，可知在空白豬肉樣品中3 種氯霉素類藥物添加水平為0.1 ～5.0 μg/kg 時(shí)，平均回 收率為90.8%～108.2%。分析該法下的實(shí)驗(yàn)精密性，可知相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.4%～9.8%（n=6），回收率和精密度結(jié)果均較好。

4 結(jié)論

綜上，采用超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜方法，對(duì)豬肉中的氯霉素類藥物進(jìn)行含量測定，通過實(shí)驗(yàn)可知該法的應(yīng)用效果良好，能在簡便操作下，將藥物含量檢出，且檢出限較低，能實(shí)現(xiàn)低含量的檢出目的。其中發(fā)現(xiàn)氨水可影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)度，因此實(shí)驗(yàn)過程中需對(duì)其進(jìn)行良好運(yùn)用，另外實(shí)驗(yàn)分析回收率、精密性效果較好，該實(shí)驗(yàn)方法滿足了實(shí)驗(yàn)室中的檢測要求。