劉小云，江昱軒，王智情，胡珊玲，羅海清，林 燕

(贛南師范大學(xué) 柑橘檢測中心，江西 贛州 341000)

臍橙是我國及世界各國競相栽培的柑桔良種，其中的優(yōu)質(zhì)品種如紐荷爾以江西贛南種植面積最大且產(chǎn)量最高[1-2]，如今“贛南臍橙”已享譽國內(nèi)外，成為高品質(zhì)臍橙的代名詞[3].臍橙品質(zhì)的良莠通常以果品中可溶性固形物(可固)、總酸(或可滴定酸)、維生素C(Vc)、固酸比等含量加以評判[4-5].而臍橙作為鮮果樣品，其貯存方式的不同對各項品質(zhì)的檢測結(jié)果影響很大[6]，尤其是對維生素C等極易受環(huán)境因素影響的項目而言[7].作者所在檢測中心為中國合格評定國家認可委員會(CNAS)認可實驗室，需要為社會提供精準可靠的檢測數(shù)據(jù)，并且對出具的任何檢測數(shù)據(jù)，都為客戶保留一定的質(zhì)疑時間，以滿足對檢測結(jié)果的復(fù)檢要求.因此我們需要滿足對所接收的柑橘類樣品從檢測方法、樣品流轉(zhuǎn)到留樣時間、留樣方式等規(guī)定詳細而具體的要求.本研究對臍橙鮮果中可固、總酸、Vc三個常規(guī)品質(zhì)項目的檢測關(guān)鍵步驟和留樣方法等進行了系列條件實驗，以確保檢測結(jié)果的準確性及重現(xiàn)性.臍橙鮮果中可固、總酸、Vc三個項目的檢測依據(jù)分別為GB/T 8210-2011《柑橘鮮果檢驗方法》、GB/T 12456-2008《食品中總酸的測定》和GB 5009.86-2016《食品中抗壞血酸測定》.

1 主要儀器與試劑

WAY-2S阿貝折射儀(上海儀電物理光學(xué)儀器有限公司)；鄰苯二甲酸氫鉀基準物質(zhì)；氫氧化鈉；酚酞；偏磷酸；草酸；碳酸氫鈉；2,6-二氯靛酚；L(+)-抗壞血酸基準物質(zhì).以上試劑除特別說明外均為分析純.

2 結(jié)果與討論

2.1 臍橙果品的均勻性

臍橙呈橢圓形或鵝蛋形，與其它水果類似，由于受生長過程中光照不均勻等因素影響，不僅使單個果品間品質(zhì)產(chǎn)生不同，即使同一個果品的不同部位，也可能存在品質(zhì)的不均勻，如單個蘋果在光照不同的外圍與內(nèi)膛之間可固與可滴定酸就存在顯著性差異[8].為探究單個臍橙不同部位的差異性，分別抽取3個新鮮果及3個貯存果(冷藏3 個月)，將每個臍橙均分4份，分別測定4個不同部位的可固、總酸及Vc含量，結(jié)果見表1.

由表1可知，同一臍橙4個部位的可固、總酸及Vc含量存在一定的差異性，這一結(jié)果與胡德玉[9]對柑橘樹不同空間分布果實的總酸、可固的差異性結(jié)論相一致；貯存果的差異性明顯高于新鮮果.因此在分析檢測時，需要對臍橙等鮮果樣品的取樣及留樣特別關(guān)注，以確保取樣代表性、結(jié)果準確性及復(fù)檢重現(xiàn)性.

表1 單個臍橙果品的品質(zhì)均勻性

2.2 臍橙中總酸測定的關(guān)鍵步驟及留樣方法

2.2.1 NaOH標定時的流速控制

GB/T 12456-2008《食品中總酸的測定》及GB/T 8210-2011《柑桔鮮果檢驗方法》中可滴定酸的測定都采用酸堿滴定的方法，其中NaOH標準溶液濃度的準確標定對總酸測定結(jié)果至關(guān)重要.NaOH的標定采用國家標準GB/T 601-2016《化學(xué)試劑標準滴定溶液》，該標準中規(guī)定以鄰苯二甲酸氫鉀基準物質(zhì)標定NaOH時，標定結(jié)果取兩人八平行的平均值，且單人四平行及兩人八平行的精密度要求分別為：相對極差不得大于相對重復(fù)性臨界極差[CR0.95(4)r=0.15 %]和[CR0.95(8)r=0.18 %].為達到如此高的精密度要求，滴定時除了符合常規(guī)滴定操作要求外，對標準滴定溶液從滴定管(50 mL)中的流出速度也需加以嚴格控制[10].本實驗比較不同滴定速度對NaOH標定結(jié)果的影響，結(jié)果見表2，當(dāng)?shù)味ㄋ俣葹槌Ｒ?guī)的點滴成線時，約為15～20 mL/min.

表2 NaOH標定時滴定速度的影響

由表2可知，滴定速度對NaOH標定結(jié)果的精密度影響較大，當(dāng)?shù)味ㄋ俣瓤刂圃?～10 mL/min內(nèi)時，結(jié)果的精密度符合國家標準要求，而6～8 mL/min時精密度最佳.

2.2.2 總酸測定的留樣要求

檢測實驗室尤其是對社會提供第三方檢測服務(wù)的機構(gòu)，對于樣品的留樣方式都會做出明確規(guī)定，以應(yīng)對送檢人員對結(jié)果產(chǎn)生疑議時進行復(fù)檢[11].根據(jù)國家標準GB/T 5009.1-2003，一般樣品的留樣時間為一個月，以備需要時復(fù)檢，而易變質(zhì)食品通常情況下可不予留樣[12].臍橙鮮果由于受微生物和細菌作用，易腐爛變質(zhì)，若低溫儲存則可延長保存時間[13].作者所在實驗室為了確定臍橙鮮果樣品的留樣方式及留樣時間，選擇了4 ℃和-20 ℃,2個溫度條件進行實驗[14-15]，同時4 ℃條件下分別比較鮮果留樣和勻漿留樣2種情況，具體方法為：(A)4 ℃鮮果留樣：按國家標準要求將用作檢測的臍橙鮮果對半切開，其中一半取可食部分經(jīng)勻漿后用于檢測，剩余一半鮮果樣品于4 ℃冰箱留樣保存，復(fù)檢時再取可食部分勻漿制樣；(B)4 ℃勻漿留樣：按國家標準要求取臍橙鮮果可食部分，勻漿制樣后取部分用于檢測，剩余勻漿樣品于4 ℃冰箱留樣保存；(C)-20 ℃勻漿留樣：制樣方法同(B)，只將剩余勻漿樣品于-20 ℃冰箱留樣保存.實驗比較了當(dāng)天制樣并測定后，以上3種留樣方式的復(fù)檢(為期4周共28 d)，結(jié)果見表3.

表3 總酸測定留樣方法比較(g/kg)

GB/T 8210-2011標準中，對總酸測定的精密度要求為2次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%.對比表3數(shù)據(jù)可知，4 ℃鮮果留樣7 d后，樣品中總酸含量就有了明顯變化，不符合精密度要求，這與該留樣方式未考慮樣品的不均勻性特點有關(guān)；而4 ℃和-20 ℃勻漿留樣14 d后，復(fù)檢結(jié)果的重現(xiàn)性好.此外，在-20 ℃勻漿留樣條件下，留樣時間可延長至28 d.

2.3 臍橙中可固測定的留樣要求

可溶性固形物為流體食品中所有溶解于水中的糖、酸、維生素、礦物質(zhì)等化合物的總稱，可簡單地以折射儀測定折射率的方法進行測定[16].為確定臍橙中可固測定時的留樣方法，同樣采用2.2.2中的3種方法進行比對實驗，結(jié)果見表4.

表4 可固測定留樣方法的比較(%)

由表4可知，臍橙中可固測定與總酸測定的留樣可采用一樣的方法，即4 ℃勻漿條件下可留樣14 d，-20 ℃勻漿條件下可留樣至28 d.留樣期間內(nèi)可固測定結(jié)果保持穩(wěn)定，符合復(fù)檢的重現(xiàn)性要求.

2.4 臍橙中Vc測定關(guān)鍵步驟及留樣要求

Vc又名抗壞血酸，是一種己糖衍生物.柑橘中還原性Vc易被氧化，因此給檢測及留樣帶來更高要求[17].GB 5009.86-2016《食品中抗壞血酸測定》中共有3個方法，分別為高效液相色譜法、熒光法和2,6-二氯靛酚(DCIP)滴定法，其中滴定法簡單快速，較為常用，但對所用試劑的保存要求及滴定中的操作步驟要求嚴格.

2.4.1 2,6-二氯靛酚(DCIP)標準溶液的標定

柑橘中Vc的測定是將樣品經(jīng)酸性液浸出后，以藍色的堿性染料DCIP標準滴定溶液對其進行氧化還原滴定.由于DCIP標準溶液是通過基準抗壞血酸進行標定，因此抗壞血酸基準溶液及DCIP標準滴定溶液的穩(wěn)定性對臍橙中Vc測定具有重要影響.

圖1 2,6-二氯靛酚(DCIP)標準滴定溶液的穩(wěn)定性

圖1表明DCIP存放于4 ℃冰箱時，1周內(nèi)濃度穩(wěn)定，無需重復(fù)標定；若在1周后使用時，必須進行重新標定，以確定其滴定度；4 ℃儲存條件下溶液可穩(wěn)定8周，之后不僅濃度發(fā)生明顯改變，同時滴定終點不敏銳，有拖尾現(xiàn)象，影響終點判斷.因此本實驗確定DCIP標準滴定溶液只能在4 ℃冰箱存放8周，過期不能用于樣品測定.

2.4.2 Vc測定的留樣方法

GB 5009.86-2016標準中，Vc測定時需要將臍橙可食部分與20 g/L的草酸溶液混合后勻漿，以減少勻漿過程中Vc被空氣氧化.同理對4 ℃鮮果留樣、4 ℃勻漿留樣和-20 ℃勻漿留樣3種方式進行比較，以確定臍橙中Vc測定時的留樣方法，結(jié)果見表5.

表5 Vc測定留樣方法的比較(mg/100 g)

GB 5009.86-2016標準中，對Vc測定結(jié)果的精密度要求為2次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的2%(Vc含量大于20 mg/100 g時).由表5可知，在4 ℃鮮果和4 ℃勻漿留樣7 d后，樣品中Vc含量變化已超出方法精密度要求，而-20 ℃勻漿留樣28 d，Vc測定結(jié)果穩(wěn)定.因此本實驗認為，臍橙中Vc測定留樣時，必須將與草酸混合后的勻漿樣品置于-20 ℃冰箱密封冷凍儲存，復(fù)檢時經(jīng)解凍后再測定.

3 結(jié)論

3.1 臍橙常規(guī)品質(zhì)測定關(guān)鍵步驟

以紐荷爾臍橙為例，對臍橙鮮果樣品中可固、總酸、Vc三個常規(guī)品質(zhì)項目檢測的主要影響因素進行了實驗研究.總酸測定時，氫氧化鈉標準溶液滴定速度需控制在6～10 mL/min范圍；Vc測定時，滴定劑DCIP于4 ℃冰箱可儲存8周，且配制1周后每次使用時需重新標定；用于標定DCIP的基準抗壞血酸需現(xiàn)配現(xiàn)用.

3.2 臍橙鮮果樣品的復(fù)檢留樣要求

通過不同方式的留樣比較，確定了實驗室在進行臍橙鮮果樣品中可固、總酸、Vc檢測時的留樣方法和留樣時間.可固和總酸測定時為4 ℃勻漿留樣，時間為14 d；Vc測定時為-20 ℃勻漿留樣，留樣時間可達28 d.經(jīng)實驗所確定的方法，可用于指導(dǎo)臍橙鮮果常規(guī)品質(zhì)檢測過程及留樣操作，從而確保檢測結(jié)果的準確性及重現(xiàn)性.