趙彩嬌 譚敏 葉藝 王曙松 范郁山

(廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001)

腎為先天之本，水火之宅，是維持人體生命活動(dòng)的重要臟腑，具有藏精、主水、納氣三大生理功能，為臟腑陰陽之根本。腎陽又稱為命門之火，具有溫煦、蒸騰、氣化、推動(dòng)等作用。腎陽不足，出現(xiàn)溫煦、蒸騰、氣化等功能減退，并出現(xiàn)腎陽虛衰等一系列證候。

腎陽虛證是中醫(yī)臟腑辨證的一個(gè)重要證型，見于多種疾病的過程中，一直為中醫(yī)界研究的重點(diǎn)。中醫(yī)理論認(rèn)為，腎虛是衰老的主因，陽氣是生命的根本，腎陽虛與衰老有著密不可分的關(guān)系。故本實(shí)驗(yàn)擬用腎陽虛模型家兔為研究對(duì)象，以血清白細(xì)胞介素(IL)-2，免疫球蛋白(Ig)A、IgG、IgM為客觀指標(biāo)，觀察靈龜八法按時(shí)開穴艾炷灸對(duì)其含量水平變化的影響。

1 材料與方法

1.1動(dòng)物分組 選用廣西中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供的健康新西蘭家兔40只，8月齡，體重2.0～2.2 kg，雌雄各半(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)為SYXK桂2012-0001)。實(shí)驗(yàn)前，所有動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)室條件下適應(yīng)性飼養(yǎng)2 w，實(shí)驗(yàn)室要求每天光照與黑暗各12 h(光照時(shí)間為7∶00～19∶00)、室溫23℃，相對(duì)濕度為65%。在此期間自由進(jìn)食和飲水。飼料由動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。適應(yīng)性飼養(yǎng)結(jié)束后再次稱重，按隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、靈龜八法治療組、神闕治療對(duì)照組各10只。

1.2試劑與儀器 (1)藥品和試劑：造模用羥基脲片，由齊魯制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為11204LC，規(guī)格為0.5 g/片。IL-2試劑盒、IgA、M、G試劑盒由蘇州卡爾文生物科技有限公司提供，規(guī)格96T，批號(hào)20121001A。(2)主要實(shí)驗(yàn)儀器：德國(guó)Thermo Electron公司的Thermo離心機(jī)，型號(hào)ST16R；美國(guó)BioTek公司的全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀，型號(hào)EPOCH BIOTEK；日本三洋電機(jī)株式會(huì)社的醫(yī)用低溫箱(-80℃)，型號(hào)MDF-U7386S；日本三洋電機(jī)株式會(huì)社恒溫箱(CO2培養(yǎng)箱)，型號(hào)MCO-18AIC。(3)艾絨：南陽綠瑩艾草制品有限公司的三年陳艾，純度10∶1。

1.3造模方法 羥基脲片用研缽搗碎，用清水配置成500 mg/3 ml的混懸液，充分混勻〔1〕。除空白對(duì)照組外，其余組家兔均用羥基脲混懸液空腹灌胃，劑量為700 mg/(kg·d)。連續(xù)造模5 d，家兔即出現(xiàn)體重下降、進(jìn)食量減少、豎毛拱背、掉毛、毛色無光澤、畏寒肢冷、活動(dòng)減少、神態(tài)萎靡、踡臥、尿多、下利清谷等腎陽虛征象。在整個(gè)造模過程中實(shí)驗(yàn)家兔未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。

1.4干預(yù)治療方法 空白對(duì)照組：每天上午只稱體重，不灌胃。稱完體重后，將家兔取仰臥位，四肢固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上5 min。模型對(duì)照組：每天上午用羥基脲混懸液，劑量700 mg/(kg·d)空腹灌胃后，再將家兔取仰臥位，四肢固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上5 min。連續(xù)造模5 d。靈龜八法治療組：同模型對(duì)照組連續(xù)造模5 d，造模結(jié)束次日巳時(shí)應(yīng)用靈龜八法按時(shí)開穴艾炷灸干預(yù)治療，連續(xù)治療10 d。這10 d的開穴依次是照海、照海、內(nèi)關(guān)、外關(guān)、公孫、外關(guān)、申脈、公孫、外關(guān)、公孫。腧穴定位方法主要參照鄧春雷等〔2〕主編《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》的“常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的針灸穴位之定位方法”進(jìn)行。艾炷制作：將細(xì)軟艾絨捻緊成為直徑約5 mm、高1 cm的圓錐狀艾炷，每炷約50 mg。施灸方法：將家兔取仰臥位，四肢固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，在靈龜八法當(dāng)時(shí)辰所開穴位上進(jìn)行艾炷灸，單側(cè)直接無瘢痕灸。根據(jù)先陽后陰的原理，先灸左側(cè)穴位，次日再灸右側(cè)穴位，交替進(jìn)行。施灸時(shí)先將施灸部位的體毛剪去，再涂以少量蘆薈汁以固定艾炷，并防止?fàn)C傷，無瘢痕直接灸，每次連續(xù)灸3壯，每壯以家兔全身掙扎為度。每日1次，共治療10 d。神闕治療對(duì)照組：同模型對(duì)照組連續(xù)造模5 d，造模結(jié)束次日巳時(shí)開始進(jìn)行治療。將家兔取仰臥位，四肢固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，在神闕穴上進(jìn)行艾炷灸。腧穴定位方法及施灸方法同靈龜八法治療組，每日1次，共治療10 d。

1.5標(biāo)本采集與檢測(cè) 各組家兔于造模前、造模后、治療后分別取耳緣靜脈血3 ml，2 000 r/min離心10 min，吸取血清置于-80℃冰箱保存待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定細(xì)胞因子IL-2及IgG、IgA、IgM的含量，具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.6生命質(zhì)量評(píng)分 參照《中醫(yī)虛證辨證參考標(biāo)準(zhǔn)》〔3〕中的腎陽虛診斷標(biāo)準(zhǔn)，采用等級(jí)評(píng)定積分法自制評(píng)分量表，選擇進(jìn)食量、體重、豎毛拱背、掉毛、毛色無光澤、畏寒肢冷、活動(dòng)減少、神態(tài)萎靡、踡臥、尿多、下利清谷等為積分癥狀。根據(jù)癥狀輕度、中度、重度分別計(jì)2、4、8分；有其他癥狀者計(jì)2分，無計(jì)0分。

1.7數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行方差分析。

2 結(jié) 果

2.1各組家兔生命質(zhì)量評(píng)分比較 造模后，空白組未出現(xiàn)腎陽虛的癥狀；與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組、靈龜八法治療組、神闕治療對(duì)照組生命質(zhì)量評(píng)分明顯升高(P<0.01)。造模后靈龜八法治療組與神闕治療對(duì)照組生命質(zhì)量評(píng)分與模型對(duì)照組比較，無明顯差異(均P>0.05)。與造模后比較，靈龜八法治療組和神闕治療對(duì)照組治療后癥狀明顯改善(P<0.01)，且靈龜八法治療組優(yōu)于神闕治療對(duì)照組(P<0.05)。見表1。

表1 造模后及治療后家兔生命質(zhì)量評(píng)分的變化分)

2.2各組家兔血清細(xì)胞因子IL-2、IgG、IgA、IgM比較 造模前4組血清IL-2、IgG、IgA、IgM水平無顯著差異(P>0.05)。造模后，模型對(duì)照組、神闕治療對(duì)照組、靈龜八法治療組血清IL-2水平較造模前顯著降低，血清IgG、IgA、IgM水平較造模前顯著升高與空白組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。治療后，靈龜八法治療組IL-2水平明顯升高(P<0.05)，而神闕治療對(duì)照組的IL-2含量雖略有升高，但無顯著差異(P>0.05)，兩治療組組間比較差異顯著(P<0.05)，治療后，靈龜八法治療組及神闕治療對(duì)照組血清IgG、IgM、IgA含量均下降，且與模型對(duì)照組比較有顯著差異(P<0.01，P<0.05)，治療組間比較差異無顯著(P>0.05)。見表2。

表2 4組血清IL-2、IgG、IgA、IgM檢測(cè)結(jié)果

3 討 論

中醫(yī)中藥里是沒有“免疫”這一專用術(shù)語，但可以從現(xiàn)代免疫學(xué)精確的定量檢測(cè)手段應(yīng)用中，觀察到中醫(yī)藥在免疫領(lǐng)域里的作用〔4〕。中醫(yī)理論認(rèn)為“正氣存內(nèi)，邪不可干”，“腎為先天之本”，是人生生不息之根，正氣的產(chǎn)生離不開腎陽的溫煦，故腎與免疫具有十分密切的關(guān)系。腎陽虛證涉及神經(jīng)、內(nèi)分泌、物質(zhì)代謝、生殖、免疫、受體等多個(gè)方面，主要表現(xiàn)在全身功能減退及神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)功能的紊亂〔5〕。操紅纓等〔6〕研究發(fā)現(xiàn)，腎陽虛多尿模型大鼠CD3+、CD4+百分比，較正常對(duì)照組明顯減少，CD3+、CD8+百分比，較正常對(duì)照組明顯增加，說明腎陽虛大鼠的免疫功能紊亂。譚從娥等〔7〕則利用基因表達(dá)譜芯片技術(shù)探討腎陽虛證的發(fā)生與免疫功能類基因的關(guān)聯(lián)性，結(jié)果顯示免疫系統(tǒng)反應(yīng)特別是MHC-Ⅱ類分子介導(dǎo)的抗原加工及提呈過程的異?？赡苁悄I陽虛證發(fā)生的主要免疫機(jī)制?，F(xiàn)代多項(xiàng)研究〔8～10〕顯示，通過提高免疫功能可以改善腎陽虛癥狀，可見，腎陽虛與免疫功能關(guān)系密切。

中醫(yī)作為世界上影響力較大的傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)，自古以來就對(duì)防病延衰極為重視。中醫(yī)傳統(tǒng)的衰老學(xué)說主要有〔11〕：①陰陽失調(diào)說；②臟腑虛衰說(包括腎虧虛為主說、脾胃虛衰為主說)；③精氣神虧耗說等。在臟腑虛衰說中，認(rèn)為腎氣虛衰是衰老的主要原因，《素問》曰：“五臟之真，惟腎為根”，認(rèn)為腎陽通過蒸化腎陰產(chǎn)生腎氣，而腎氣則直接關(guān)系到人體的生長(zhǎng)、發(fā)育、生殖和衰老。可以說，變老與否、變化的速度、壽命的長(zhǎng)短，很大程度取決于腎氣的強(qiáng)弱，所以腎氣虛衰是衰老的重要原因。

腎虛中又以腎陽虛與衰老的關(guān)系最為密切。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，陽氣是人體生命活動(dòng)中的動(dòng)力源，與壽命關(guān)系極大。如《內(nèi)經(jīng)》云：“陽氣者，若天與日，失其所則折壽而不彰”，“人年五十以上，陽氣日衰，損與日至，心力漸退，忘前失后，興居怠惰”。可見老年人功能退行性改變是陽氣衰微的結(jié)果。腎陽為人體一身陽氣之根本，若腎陽一衰，則一身之陽皆衰，從而加速衰老的進(jìn)程?？梢娔I是全身各臟腑的調(diào)節(jié)中心，腎氣虛中的腎陽虛是人體衰老的主要原因。

本研究結(jié)果提示靈龜八法對(duì)腎陽虛家兔血清IL-2水平具有明顯的提高作用，這可能與其刺激細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞細(xì)胞的增殖和分化有關(guān)，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫功能。

家兔受羥基脲片免疫抑制后，機(jī)體自身調(diào)節(jié)起免疫應(yīng)答反應(yīng)所致產(chǎn)生IgA、IgG、IgM抗體，故數(shù)值升高。本研究結(jié)果說明靈龜八法艾炷灸可使家兔受羥基脲片免疫抑制減輕，故治療后IgA、IgG、IgM數(shù)值降低，這可能是靈龜八法艾炷灸提高腎陽虛家兔的免疫功能的作用機(jī)制之一，這對(duì)預(yù)防和減緩腎陽虛的進(jìn)展具有積極的意義。

免疫功能學(xué)說是1969年由美國(guó)學(xué)者R·Walford首先提出的。他認(rèn)為與自身抗體有關(guān)的自身免疫在導(dǎo)致衰老的過程中起著決定性作用。自身免疫的發(fā)生，主要是免疫系統(tǒng)自我識(shí)別功能的降低或障礙，不能識(shí)別“自我”和“非我”，將自身正常的組織細(xì)胞，當(dāng)作外來的“異物”進(jìn)行攻擊，導(dǎo)致機(jī)體的損害、衰老和死亡。可見免疫系統(tǒng)對(duì)維護(hù)人體健康、防止衰老及老年病的防治是很重要的。