何晗 唐柳生 李世立 董捷 周游 韋顯珍

【摘要】?目的?探討青年肺結(jié)核患者支氣管肺泡灌洗液（BALF）T淋巴細胞亞群、炎癥因子表達情況及檢測意義。方法?選擇2018年1月～2019年11月就診的青年肺結(jié)核患者43例作為青年患病組，選擇同期就診的老年肺結(jié)核患者43例作為老年患病組，選擇同期體檢的健康青年43人作為正常青年組，比較各組BALF中T淋巴細胞亞群、炎癥因子水平。結(jié)果?青年患病組BALF中CD3+、CD4+表達水平顯著高于老年患病組，NK表達水平顯著低于老年患病組（P<0.01）;正常青年組BALF中CD3+、CD4+表達水平顯著高于青年患病組，NK表達水平顯著低于青年患病組（P<0.01）。青年患病組BALF中IFN-γ、IL-4、IL-12、IL-10表達水平顯著低于老年患病組（P<0.01）;正常青年組BALF中IFN-γ、IL-4、IL-12、IL-10表達水平顯著低于青年患病組（P<0.01）。正常青年組外周血中IgA表達水平顯著低于青年患病組、老年患病組，青年患病組外周血中IgA表達水平顯著低于老年患病組（P<0.05）。結(jié)論?青年肺結(jié)核患者BALF中T淋巴細胞免疫功能明顯高于老年肺結(jié)核患者，但低于健康青年人，炎癥反應(yīng)較老年肺結(jié)核患者輕微，但在體液免疫方面無明顯差異，檢測青年肺結(jié)核患者BALF中T淋巴細胞亞群及炎癥因子，有利于全面了解患者的細胞免疫功能，評估結(jié)核病灶嚴重程度，為治療方案選擇提供客觀依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】?青年肺結(jié)核;支氣管肺泡灌洗液;T淋巴細胞亞群;炎癥因子

中圖分類號：R521?文獻標(biāo)志碼：A?DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2020.09.010

【Abstract】?Objective?To investigate the expression of T-lymphocyte subsets and inflammatory factors in bronchoalveolar lavage fluid （BALF） of young patients with pulmonary tuberculosis and its significance of detection.Methods?43 young patients with tuberculosis admitted to hospital from January 2018 to November 2019 were selected as young patients group，43 elderly patients with tuberculosis in the same period as old patients group，and 43 healthy young people who came to hospital for physical examination in the same period as normal young people group.And then，the levels of T-lymphocyte subsets and inflammatory factors in BALF of each group were compared.Results?The expression levels of CD3+ and CD4+ in BALF of the young patients group were significantly higher than those of the old patients group，but the expression level of NK was significantly lower than that of the old patients group （P<0.01）.The expression levels of CD3+ and CD4+ in BALF of the normal young people group were significantly higher than those of the young patients group，but the expression level of NK was significantly lower than that of the young patients group （P<0.01）.The expression levels of IFN-γ，IL-4，IL-12 and IL-10 in BALF of the young patients group were significantly lower than those of the old patients group （P<0.01）.The expression levels of IFN-γ，IL-4，IL-12 and IL-10 in BALF of the normal young people group were significantly lower than those of the young patients group （P<0.01）.The expression level of IgA in the peripheral blood of the normal young people group was significantly lower than that of the young patients group and the old?patients group，and the expression level of IgA in the peripheral blood of the young patients group was significantly lower than that of the old patients group （P<0.05）.Conclusion?The immune function of T-lymphocyte in BALF of young patients with pulmonary tuberculosis is significantly higher than that of old patients，but lower than that of healthy young people，and the inflammatory reaction is milder than that of old patients，but there is no significant difference in humoral immunity.The detection of T-lymphocyte subsets and inflammatory factors in BALF of young patients with pulmonary tuberculosis is conducive to fully understanding the cellular immune function of patients and evaluating?the severity of the tuberculosis focus，so as to provide an objective basis for the choice of treatment plan.

【Key words】?youth tuberculosis;BALF;T-lymphocyte subsets;inflammatory factors

肺結(jié)核是臨床上常見的慢性肺部感染性疾病，是由結(jié)核分枝桿菌感染所致，具有嚴重傳染性，患者常表現(xiàn)出咳嗽、咳痰、咯血、胸痛等癥狀，嚴重危及患者的身體健康，且多數(shù)患者因非特異性癥狀誤診、漏診，導(dǎo)致治療延遲，影響預(yù)后[1]。因此，在肺結(jié)核發(fā)病早期及時、準(zhǔn)確診斷，對提高患者治療效果具有重要意義。目前，診斷肺結(jié)核主要依靠細菌實驗、病理活檢、X線、血清學(xué)檢測及臨床癥狀觀察等，其中結(jié)核桿菌培養(yǎng)是診斷肺結(jié)核的金標(biāo)準(zhǔn)，雖然具有較高靈敏度，但耗時長且含菌量少時不能快速、準(zhǔn)確鑒別結(jié)核分枝桿菌。隨著支氣管鏡技術(shù)的提高，其成為輔助診斷肺結(jié)核的重要手段[2]。研究發(fā)現(xiàn)，肺結(jié)核是以T淋巴細胞所介導(dǎo)的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)為主，機體被結(jié)核桿菌感染后產(chǎn)生保護性免疫作用，多為CD4+淋巴細胞釋放的各種細胞因子而出現(xiàn)的免疫反應(yīng)，分為Th1與Th2兩種亞型，Th1與Th2的應(yīng)答平衡在肺結(jié)核發(fā)病中起著決定性作用，Th1/Th2表達平衡被打破會促進結(jié)核分枝桿菌免疫逃逸的發(fā)生，Th1主要產(chǎn)生IFN-γ、IL-12，誘導(dǎo)細胞免疫，Th2主要分泌IL-4、IL-10，激活B細胞產(chǎn)生抗體以抑制巨噬細胞功能[3]。目前關(guān)于肺結(jié)核患者支氣管肺泡灌洗液（BALF）中T淋巴細胞亞群、炎癥因子表達情況的研究較少。因此，本研究通過檢測43例青年肺結(jié)核患者T淋巴細胞亞群、炎癥因子表達情況，并分析與老年肺結(jié)核患者、健康青年人群之間的差異，以期為肺結(jié)核的診斷、治療提供參考依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1?資料與方法

1.1?一般資料

選擇2018年1月～2019年11月于我院就診的青年肺結(jié)核患者43例作為青年患病組，選擇同期就診的老年肺結(jié)核患者43例作為老年患病組，并選擇同期來我院體檢的健康青年人群43人作為正常青年組。按照世界衛(wèi)生組織（WHO）年齡劃分標(biāo)準(zhǔn)，青年人≤44歲，老年人≥60歲。青年患病組：男27例，女16例，年齡18～40（26.97±4.19）歲，BMI 21～24（22.71±1.76）kg/m2;老年組：男26例，女17例，年齡60～77（68.35±3.05）歲，BMI 22～25（23.05±1.93）kg/m2;正常青年組：男25人，女18人，年齡22～38（26.81±7.62）歲，BMI 21～24（22.86±1.84）kg/m2;三組患者的一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性，且本研究已征得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2?納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴均經(jīng)影像學(xué)、病原菌檢查及臨床癥狀觀察證實，符合《肺結(jié)核診斷和治療指南》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，患者有咳嗽、咳痰、痰中帶血癥狀，胸片檢查提示有活動性肺結(jié)核，痰液經(jīng)結(jié)核桿菌培養(yǎng)顯示為陽性，抗酸染色為陽性[4];⑵具有正常的認知溝通能力;⑶首次發(fā)病，入院前未接受抗結(jié)核治療;⑷簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴合并內(nèi)分泌疾病者;⑵合并惡性腫瘤者;⑶合并嚴重肝腎疾病者;⑷合并自身免疫疾病者;⑸合并其他肺部疾病或艾滋病者;⑹服用免疫抑制劑者;⑺妊娠期、哺乳期婦女。

1.3?方法

⑴按照《纖維支氣管鏡臨床應(yīng)用指南（方案）》中的操作方法進行肺泡灌洗，研究對象均予以阿托品0.5 mg、苯巴比妥100 mg肌肉注射，予以2%利多卡因咽部及鼻腔黏膜局部麻醉，采用日本Olympus公司生產(chǎn)的BF-1T-240支氣管鏡經(jīng)口或鼻插入到右肺中葉或左肺舌段的支氣管，將其頂端契入支氣管分支開口，收集研究對象BALF 10 mL，采用美國BD公司生產(chǎn)的FACSCalibur型流式細胞儀抗體雙標(biāo)法對BALF中T淋巴細胞亞群進行分析，檢測CD3+、CD4+、CD8+、NK表達水平，并準(zhǔn)確計算CD4+/CD8+值，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測IFN-γ、IL-4、IL-12、IL-10表達水平。⑵采集研究對象的外周靜脈血5 mL于肝素抗凝管中，30 min內(nèi)送檢，采用ELISA法測定IgA、IgM、IgG表達水平。

1.4?統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 25.0計算數(shù)據(jù)，計量資料用（±s）表示，計量資料符合正態(tài)分布且方差齊性，采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，檢驗水準(zhǔn)：α=0.05，雙側(cè)檢驗。

2?結(jié)果

2.1?三組BALF中T淋巴細胞表達情況比較

青年患病組BALF中CD3+、CD4+表達水平顯著高于老年患病組，NK表達水平顯著低于老年患病組（P<0.01）;正常青年組BALF中CD3+、CD4+表達水平顯著高于青年患病組，NK表達水平顯著低于青年患病組（P<0.01）。見表1。

2.2?三組外周血中IgA、IgM、IgG表達情況比較

正常青年組外周血中IgA表達水平顯著低于青年患病組、老年患病組，青年患病組外周血中IgA表達水平顯著低于老年患病組（P<0.01）。見表2。

2.3?三組BALF中炎癥因子表達情況比較

青年患病組BALF中IFN-γ、IL-4、IL-12、IL-10表達水平顯著低于老年患病組（P<0.01）;正常青年組BALF中IFN-γ、IL-4、IL-12、IL-10表達水平顯著低于青年患病組（P<0.01）。見表3。

3?討論

肺結(jié)核是目前全世界公認的健康難題，感染性強，感染率居高不下，致死率高，嚴重危及患者的生命安全。結(jié)核分枝桿菌是誘發(fā)肺結(jié)核的主要病原體，可在單核-巨噬細胞中生長、繁殖，當(dāng)結(jié)核分枝桿菌侵入機體后，會產(chǎn)生T淋巴細胞介導(dǎo)的細胞免疫，導(dǎo)致大量炎癥因子及促炎因子分泌，從而調(diào)控免疫反應(yīng)[5]。支氣管鏡作為輔助手段應(yīng)用于肺結(jié)核診斷中，通過BALF直接獲取肺內(nèi)免疫效應(yīng)細胞，以檢測肺部免疫狀態(tài)，從而提高肺結(jié)核的診斷準(zhǔn)確性[6]。T淋巴細胞是機體中細胞免疫的主要效應(yīng)細胞，能夠介入細胞的免疫反應(yīng)，通過調(diào)節(jié)亞群細胞以調(diào)控機體免疫[7]。CD3+分布于T淋巴細胞表面，可起到信號轉(zhuǎn)導(dǎo)作用，能夠激活T淋巴細胞以使機體產(chǎn)生細胞免疫;CD4+是輔助性T淋巴細胞區(qū)域，能夠促進免疫細胞增殖分化以增強免疫反應(yīng);CD8+有抑制免疫細胞增長的作用，能夠刺激機體釋放抑制性細胞因子從而抑制機體免疫功能，發(fā)揮免疫功能負調(diào)節(jié)作用，使免疫功能下降[8]。當(dāng)機體受到結(jié)核分枝桿菌感染時，CD3+、CD4+表達水平降低，CD8+表達水平略有增高，導(dǎo)致機體免疫功能紊亂、失調(diào)，免疫功能下降，使得疾病發(fā)生[9]。NK細胞是機體免疫系統(tǒng)中參與排斥反應(yīng)的固有細胞，具有強大的細胞溶解能力，可發(fā)揮防止病原體感染的作用，在結(jié)核分枝桿菌的機體免疫中發(fā)揮著重要作用，當(dāng)機體被結(jié)核分枝桿菌侵入后，NK細胞被快速激活，通過細胞毒作用以殺傷結(jié)核分枝桿菌[10]。

本研究結(jié)果中，正常青年組BALF中CD3+、CD4+表達水平顯著高于青年患病組，青年患病組BALF中CD3+、CD4+表達水平顯著高于老年患病組。結(jié)果說明，與老年肺結(jié)核患者相比，青年肺結(jié)核患者的CD3+、CD4+表達下降幅度更小，其機體巨噬細胞或者效應(yīng)性因子的激活作用仍存在，效應(yīng)細胞對結(jié)核桿菌的吞噬作用未明顯降低。對于青年肺結(jié)核患者來說，其免疫器官、組織機能良好，但受結(jié)核分枝桿菌感染、疲勞等因素影響，機體免疫功能出現(xiàn)暫時性降低，激活機體適應(yīng)性免疫應(yīng)答抑制病原菌，使得青年肺結(jié)核患者的免疫功能受損情況更為輕微，而老年肺結(jié)核患者免疫器官衰老，其組織器官機能降低，且常結(jié)合多種基礎(chǔ)疾病，導(dǎo)致產(chǎn)生免疫細胞的能力降低，受到感染后機體的適應(yīng)性免疫應(yīng)答未被激活，導(dǎo)致CD3+、CD4+表達水平低于青年肺結(jié)核患者及健康青年。本研究中，正常青年組BALF中NK表達水平顯著低于青年患病組，青年患病組BALF中NK表達水平顯著低于老年患病組。結(jié)果提示，與老年肺結(jié)核患者相比，青年肺結(jié)核患者的NK表達下降幅度較小，究其原因在于青年肺結(jié)核患者被病原菌侵入后，其NK細胞激活，T淋巴細胞及適應(yīng)性免疫應(yīng)答隨之激活，免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)為避免正常細胞被殺傷而抑制NK細胞表達，使得NK細胞表達率降低，而老年肺結(jié)核患者感染病原菌后，機體固有免疫發(fā)揮作用使得NK細胞被激活，在病原菌殺傷中起著主要作用[11]。

表2中，正常青年組外周血中IgA表達水平顯著低于青年患病組和老年患病組，青年患病組外周血中IgA表達水平顯著低于老年患病組。結(jié)果提示，肺結(jié)核患者的體液免疫功能受影響較小，僅IgA水平在各組中存在差異，IgA在機體黏膜防御中發(fā)揮著重要作用，具有抑制病原菌、抗病毒的作用。一些學(xué)者認為，Th1與Th2細胞在肺結(jié)核發(fā)生、發(fā)展、治療及轉(zhuǎn)歸方面中起著重要作用，Th1在結(jié)核分枝桿菌感染會分泌IFN-γ等細胞因子以促使單核-巨噬細胞系統(tǒng)激活，IFN-γ能夠促進Th1細胞增殖，從而增強抗病原菌的能力;Th2能夠釋放IL-4、IL-10等細胞因子，激活B細胞產(chǎn)生抗體，抑制巨噬細胞活化[12]。表3中，青年患病組BALF中IFN-γ、IL-4、IL-12、IL-10表達水平顯著低于老年患病組，正常青年組BALF中IFN-γ、IL-4、IL-12、IL-10表達水平顯著低于青年患病組。結(jié)果提示，結(jié)核分枝桿菌侵入機體后，導(dǎo)致Th1與Th2細胞失衡，機體分泌大量的炎癥因子，通過檢測BALF中炎癥因子有利于了解機體炎癥狀態(tài)，反映病情嚴重程度，為尋找肺結(jié)核治療的合適靶點提供幫助。

綜上所述，青年肺結(jié)核患者BALF中T淋巴細胞免疫功能明顯高于老年肺結(jié)核患者，但低于健康青年人，炎癥反應(yīng)較老年肺結(jié)核患者輕微，但在體液免疫方面無明顯差異，檢測青年肺結(jié)核患者BALF中T淋巴細胞亞群、炎癥因子，有利于全面了解患者的細胞免疫功能，評估結(jié)核病灶嚴重程度，為治療方案選擇提供客觀依據(jù)。

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（收稿日期：2020-02-19?修回日期：2020-05-12）

（編輯：潘明志）