謝妙妙 王毅 藍(lán)小芳

染色體非整倍體異常疾病是一類因染色體數(shù)目增加或減少引起的遺傳缺陷性疾病。研究顯示，新生兒中唐氏綜合征即21-三體綜合征（Down syndrome，T21）發(fā)病率約為1/800，發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)隨著母親年齡的增加而增加，45歲婦女的風(fēng)險(xiǎn)達(dá)到35%；愛(ài)德華綜合征即18-三體綜合征（Edwards syndrome，T18）的發(fā)病率約為 1/6 000；帕陶綜合征即13-三體綜合征（Patau syndrome，T13）的發(fā)病率約為1/10 000；性染色體非整倍體的發(fā)生率約為1/500[1-3]。近年來(lái)，優(yōu)化胎兒染色體非整倍體異常疾病篩查方法和完善產(chǎn)檢流程成為研究熱點(diǎn)，并取得明顯改進(jìn)[4]。早期妊娠二聯(lián)血清學(xué)產(chǎn)前篩查和胎兒頸項(xiàng)透明層篩查，加上中期妊娠三聯(lián)血清學(xué)產(chǎn)前篩查或四聯(lián)血清學(xué)產(chǎn)前篩查，T21檢出率可達(dá)96%[5-6]，但仍有近5%的假陽(yáng)性率，并且對(duì)除T21或T18以外的染色體非整倍體檢出效果較差。最近基于孕婦血漿中胎兒游離DNA檢測(cè)技術(shù)的非侵入性產(chǎn)前檢查，又稱無(wú)創(chuàng)胎兒染色體非整倍體基因檢測(cè)（noninvasive fetal trisomy test，NIFTY），相對(duì)于傳統(tǒng)的血清學(xué)產(chǎn)前篩查，具有檢出率高和假陽(yáng)性率低的特點(diǎn)[7]，用于高危妊娠婦女有較高的靈敏度和特異度[8]。目前關(guān)于NIFTY的研究大多集中于高危和高齡孕婦（≥35歲）的應(yīng)用。本研究回顧性分析NIFTY在35歲以下孕婦中的檢測(cè)結(jié)果，進(jìn)一步探討NIFTY對(duì)胎兒染色體非整倍體異常疾病的診斷價(jià)值。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 回顧2016年1月5日至2019年10月1日在麗水市婦幼保健院產(chǎn)檢的980例＜35歲孕婦的臨床資料。孕婦年齡 22～34（28.25±3.63）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）進(jìn)行了血清學(xué)產(chǎn)前篩查，包括早期妊娠二聯(lián)血清學(xué)產(chǎn)前篩查和中期妊娠三聯(lián)血清學(xué)產(chǎn)前篩查；（2）血清學(xué)產(chǎn)前篩查T(mén)18或T21高風(fēng)險(xiǎn)，胎兒超聲檢查結(jié)果異常，或既往有胎兒染色體三體妊娠史的孕婦同意接受侵入性檢查；（3）有完整的產(chǎn)檢記錄。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，參與本研究的夫婦均簽訂知情同意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 血清學(xué)產(chǎn)前篩查血樣采集于孕11～20+6（16.21±1.67）周。采集孕婦外周血3 ml，離心分離血清，-20℃儲(chǔ)存?zhèn)錂z，1周內(nèi)完成血清學(xué)產(chǎn)前篩查。使用Auto DELFIA分析儀平臺(tái)（美國(guó)PerkinElmer公司），并使用DELFIA時(shí)間分辨熒光法及配套的甲胎蛋白（alpha fetoprotein，AFP）/游離人絨毛膜促性腺激素β亞單位（free-β-human chorionic gonadotropin,free-β-hCG）雙標(biāo)試劑及游離雌三醇（unconjugated estriol，μE3）試劑盒測(cè)量 AFP、freeβ-hCG、μE3水平。胎兒T21和T18的個(gè)體化風(fēng)險(xiǎn)由生命周期軟件生成。T21篩查陽(yáng)性的截?cái)嘀翟O(shè)置為1/270；T18篩查陽(yáng)性的截?cái)嘀翟O(shè)置為1/350；神經(jīng)管缺陷以AFP單項(xiàng)中位數(shù)倍數(shù)（multiples of the median，MOM）值≥2.5為截?cái)嘀?。高于截?cái)嘀禐楦唢L(fēng)險(xiǎn)。

1.2.2 NIFTY 血清學(xué)產(chǎn)前篩查染色體三體高風(fēng)險(xiǎn)和其它因素引起高風(fēng)險(xiǎn)的孕婦行NIFTY。采集孕12～22周孕婦外周血5 ml，于乙二胺四乙酸抗凝管中。采用游離DNA提取純化試劑盒（中國(guó)杰毅麥特公司，GM006）提取樣本中的胎兒游離DNA。采用Qubit熒光計(jì)（美國(guó)Thermo Fisher公司，Q33327）測(cè)定DNA濃度。采用胎兒染色體非整倍體（T13、T18、T21）檢測(cè)試劑盒（中國(guó)杰毅麥特公司，GM003-P1）進(jìn)行檢測(cè)。最后通過(guò)生物信息學(xué)分析，計(jì)算出各條染色體對(duì)應(yīng)覆蓋深度值，得出胎兒患染色體非整倍體疾病的風(fēng)險(xiǎn)。本研究因臨床實(shí)際工作困難，血清學(xué)產(chǎn)前篩查低風(fēng)險(xiǎn)的孕婦默認(rèn)NIFTY低風(fēng)險(xiǎn)。

1.2.3 胎兒染色體核型分析 NIFTY高風(fēng)險(xiǎn)的孕婦均行侵入性產(chǎn)前診斷羊膜腔穿刺術(shù)，對(duì)滋養(yǎng)層細(xì)胞或胎兒細(xì)胞培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行胎兒染色體核型分析。本研究因臨床實(shí)際工作困難，血清學(xué)產(chǎn)前篩查低風(fēng)險(xiǎn)、NIFTY低風(fēng)險(xiǎn)的孕婦默認(rèn)胎兒染色體核型分析陰性。

2 結(jié)果

2.1 血清學(xué)產(chǎn)前篩查 血清學(xué)產(chǎn)前篩查出胎兒染色體三體高風(fēng)險(xiǎn)198例（20.20%），其中T21高風(fēng)險(xiǎn)192例（19.59%），T18高風(fēng)險(xiǎn)6例（0.61%）。血清學(xué)產(chǎn)前篩查單項(xiàng)MOM值異常及胎兒超聲檢查異常者占8.56%。

2.2 NIFTY及羊膜腔穿刺術(shù)胎兒染色體核型分析 204例（198例血清學(xué)產(chǎn)前篩查染色體三體高風(fēng)險(xiǎn)和6例其它因素引起高風(fēng)險(xiǎn)）孕婦進(jìn)行NIFTY，結(jié)果示NIFTY高風(fēng)險(xiǎn)12例。該12例孕婦行羊膜腔穿刺術(shù)胎兒染色體核型分析，顯示T21 9例，T18 2例，T13 1例，見(jiàn)表1。該12例孕婦在得知胎兒染色體核型分析結(jié)果后均終止妊娠。

表1 12例NIFTY高風(fēng)險(xiǎn)孕婦胎兒染色體核型分析

2.3 血清學(xué)產(chǎn)前篩查對(duì)胎兒染色體非整倍體異常疾病的診斷價(jià)值 198例血清學(xué)產(chǎn)前篩查高風(fēng)險(xiǎn)的孕婦中胎兒染色體核型分析陽(yáng)性9例，陰性189例；782例血清學(xué)產(chǎn)前篩查低風(fēng)險(xiǎn)的孕婦中胎兒染色體核型分析陽(yáng)性3例，陰性779例。以胎兒染色體核型分析結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，血清學(xué)產(chǎn)前篩查的靈敏度為75.00%，特異度為80.48%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值4.55%，陰性預(yù)測(cè)值99.62%。

2.4 NIFTY對(duì)胎兒染色體非整倍體異常疾病的診斷價(jià)值 12例NIFTY高風(fēng)險(xiǎn)孕婦中胎兒染色體核型分析陽(yáng)性12例，陰性0例；968例NIFTY低風(fēng)險(xiǎn)孕婦中胎兒染色體核型分析陽(yáng)性0例，陰性968例。以胎兒染色體核型分析結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，NIFTY對(duì)胎兒染色體非整倍體診斷的靈敏度和特異度均為100.00%。

3 討論

基于測(cè)序的NIFTY正在迅速改變產(chǎn)前診斷領(lǐng)域，多項(xiàng)臨床研究結(jié)果報(bào)道NIFTY進(jìn)行胎兒染色體非整倍體篩查具有高靈敏度和高特異度，目前在許多醫(yī)療機(jī)構(gòu)中廣泛應(yīng)用NIFTY對(duì)高危妊娠進(jìn)行常規(guī)胎兒染色體非整倍體疾病篩查[8]。NIFTY依賴于在更大的整倍體母體DNA的背景下檢測(cè)來(lái)自染色體非整倍體胎兒的DNA的比例增加的能力，即為胎兒染色體計(jì)數(shù)的序列標(biāo)簽的數(shù)量（即測(cè)序深度）和母體血漿中胎兒DNA的比例。如果血漿樣本中胎兒DNA越多，篩查整倍體與非整倍體妊娠的效能就越高[8]。

目前在國(guó)內(nèi)，孕期血清學(xué)產(chǎn)前篩查是最廣泛采用的產(chǎn)前篩查方法。因此，NIFTY在普通人群中的效率評(píng)估并沒(méi)有得到充分的證明。為了進(jìn)一步評(píng)估＜35歲孕婦實(shí)施NIFTY的可能性，筆者設(shè)計(jì)了本研究，在預(yù)期的臨床環(huán)境中來(lái)評(píng)估NIFTY對(duì)胎兒染色體非整倍體診斷的效能，結(jié)果顯示其具有靈敏度高、特異度高的優(yōu)勢(shì)。且隨著NIFTY納入地方醫(yī)療保健服務(wù)，NIFTY費(fèi)用進(jìn)一步降低，因此推廣普及NIFTY也是最佳時(shí)機(jī)。

綜上所述，本研究結(jié)果顯示，對(duì)＜35歲孕婦應(yīng)用NIFTY篩查胎兒染色體非整倍體安全有效，具有高靈敏度和特異度。